枸杞中螺螨酯的測(cè)定及其儲(chǔ)藏穩(wěn)定性研究

劉 霞，吳 燕，趙子丹，茍春林，牛 艷，王曉菁

（寧夏農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，寧夏 銀川 750002）

螺螨酯（Spirodiclofen），分子式為C21H24Cl2O4，CAS 號(hào)為148477-71-8，屬于季酮酸類殺螨劑，對(duì)全爪螨屬、銹螨屬和葉螨屬等具有較好的防治效果[1]，涉及的作物包括柑橘[2]、蘋果[3-4]、火龍果[5]、葡萄[6]等。已報(bào)到的關(guān)于螺螨酯的檢測(cè)方法主要有氣相色譜法[7]、高效液相色譜法[8-9]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[5]。

目前，關(guān)于螺螨酯的研究主要集中在殘留分析和消解行為方面，而對(duì)于其在作物中的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性，國(guó)內(nèi)相關(guān)研究較少。通過查詢聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）和世界衛(wèi)生組織（WHO）農(nóng)藥殘留聯(lián)席會(huì)議（JMPR（Joint FAO/WHO Meeting on Pesticide Residues））2009 年會(huì)顯示：螺螨酯在桃子等高含水量農(nóng)作物中的儲(chǔ)存穩(wěn)定性至少13 個(gè)月，在柑橘、葡萄等高含酸量作物中至少24 個(gè)月，在杏仁、堅(jiān)果等含油作物中至少16 個(gè)月，在蘋果汁、葡萄汁等果汁中至少8 個(gè)月，在蘋果干、葡萄干和干果中至少10 個(gè)月，在枸杞中無查詢結(jié)果。

枸杞上螺螨酯殘留登記試驗(yàn)中，枸杞樣本在獲取后到被檢測(cè)，往往需要經(jīng)過一段時(shí)間儲(chǔ)藏，在儲(chǔ)藏過程中，螺螨酯有可能會(huì)發(fā)生氧化、水解等反應(yīng)，進(jìn)而降解。因此，為了準(zhǔn)確定性定量分析螺螨酯在枸杞上的殘留，本研究采用氣相色譜法結(jié)合固相萃取技術(shù)建立螺螨酯在枸杞中的殘留分析方法，研究在冷凍儲(chǔ)藏條件下螺螨酯在枸杞中的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性，以期為螺螨酯在枸杞上完成登記備案提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料與試劑

乙腈、正己烷（色譜純），美國(guó)Fisher Scientific 公司；螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)品（98.98%），德國(guó)DR.公司；Florisil 柱（1 000 mg/6 mL），美國(guó)安捷倫公司。

1.1.2 儀器與設(shè)備

MJ-PB80Q2-450 破壁機(jī)，美的集團(tuán)股份有限公司；Agilent 6890N 氣相色譜儀-ECD 檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司；TDL-40B 低速臺(tái)式大容量離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；R-215 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士步琦公司；T18 basic 型高速勻漿機(jī)，德國(guó)IKA 公司；PL202-L 型電子天平，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.2 樣品前處理

1.2.1 試樣準(zhǔn)備

枸杞鮮果：采摘新鮮枸杞鮮果（未施用螺螨酯，為試驗(yàn)空白），去除果葉、果梗，置于破壁料理機(jī)中打漿，備用。

枸杞干果：使用市售百瑞源品牌樣品，經(jīng)破壁機(jī)粉粹后，裝于密封袋中，備用。

1.2.2 樣品提取、凈化

稱取枸杞鮮果樣品10.00 g 或枸杞干果5.00 g 于50 mL 離心管中，加入20.0 mL 乙腈，高速勻漿2 min，加入5.0 g 氯化鈉，振搖約1 min，于4 000 r/min 離心3 min，移取上清液濃縮至近干，加入3.0 mL 丙酮/正己烷（1/9，V/V）溶液溶解后，轉(zhuǎn)移至用洗脫液預(yù)淋洗過的Florisil 固相萃取小柱中，重復(fù)3 次，再用10.0 mL 丙酮/正己烷（1/9，V/V）洗脫并收集，濃縮、定容，GC-ECD 檢測(cè)器檢測(cè)。

1.3 制備標(biāo)準(zhǔn)溶液及繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取0.010 1 g（精確至0.000 1 g）螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)品10 mL 的容量瓶中，用正己烷溶解并定容，配成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L 的螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)母液；吸取0.10 mL的1 000 mg/L 標(biāo)準(zhǔn)母液，用丙酮定容至10.0 mL，得到10 mg/L 標(biāo)準(zhǔn)溶液。將10 mg/L 標(biāo)準(zhǔn)溶液依次稀釋成0.01、0.05、0.10、0.20、0.50、1.0、2.0 mg/L 系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于繪制螺螨酯線性標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 添加回收試驗(yàn)

分別在空白枸杞基質(zhì)中添加0.01、0.1、1.0 mg/L 3個(gè)水平的螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)水平重復(fù)5 次，按照“1.2”中的前處理方法處理，氣相色譜儀-ECD 檢測(cè)器（GC-ECD）測(cè)定，計(jì)算回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.5 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性樣品的制備

儲(chǔ)藏穩(wěn)定試驗(yàn)樣本的制備按照《植物源性農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)準(zhǔn)則：NY/T 3094—2017》[10]采用添加標(biāo)液的方式制備而得，添加濃度為0.5 mg/kg，于低于-18 ℃的冰柜中保存。取樣間隔為0 d、1 個(gè)月、3 個(gè)月、7 個(gè)月和10 個(gè)月。取樣記錄見表1。

表1 螺螨酯在枸杞中儲(chǔ)藏穩(wěn)定試驗(yàn)取樣記錄Table 1 Sampling records of spirodiclofen storage stability in Goji berries

降解率計(jì)算公式如下：

式中：D 為降解率，%；C0為樣品的初始濃度，mg/kg；Ct為樣品的檢測(cè)濃度，mg/kg。

1.6 色譜條件

GC-ECD 的色譜柱為DB-5MS UI 毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；模式為不分流進(jìn)樣、恒流，流量3.0 mL/min；載氣為氮?dú)猓晃泊盗髁繛?0 mL/min；進(jìn)樣量為1.0 μL；進(jìn)樣口溫度為290 ℃；檢測(cè)器為300 ℃；柱箱溫度為100～300 ℃。

1.7 數(shù)據(jù)處理

將所有數(shù)據(jù)錄入Excel 表中，用數(shù)據(jù)透視表得出平均值及標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的特異性、線性范圍及靈敏度

圖2 枸杞鮮果空白色譜圖Fig.2 The chromatogram of blank sample of fresh Goji berries fruit

圖3 枸杞干果空白色譜圖Fig.3 The chromatogram of blank sample of dry Goji berries fruit

圖4 枸杞鮮果中螺螨酯色譜圖Fig.4 The chromatogram of spirodiclofen in fresh Goji berries fruit

圖5 枸杞干果中螺螨酯色譜圖Fig.5 The chromatogram of spirodiclofen in dry Goji berries fruit

通過在基質(zhì)空白中添加螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)GC-ECD 對(duì)比分析可以看出（圖1～5），目標(biāo)峰保留時(shí)間處無雜峰干擾，表明此方法特異性良好。在0.01～2.0 mg/L 范圍內(nèi)，螺螨酯質(zhì)量濃度（x）與峰面積（y）呈良好的線性關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=356 298x-828 9.4，r=0.999 0，滿足外標(biāo)法定量的要求[10]。通過最低添加水平確定定量限（LOQ）為0.01 mg/kg，方法檢出限為0.005 mg/kg。

圖1 螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖（0.2 mg/L）Fig.1 The chromatogram of spirodiclofen standard solution（0.2 mg/L）

2.2 方法的正確度與精密度

分別向空白枸杞鮮果、枸杞干果基質(zhì)中添加0.01 mg/kg 螺螨酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液作為L(zhǎng)OQ 水平添加。同時(shí)參考其他農(nóng)藥在枸杞中的最高殘留限量（MRL）和10 倍MRL 值，增加添加水平0.1 mg/kg 和1.0 mg/kg，每個(gè)水平重復(fù)5 次，采用空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)品校正后，計(jì)算其回收率、RSD 值，結(jié)果見表2。螺螨酯在枸杞鮮果中的回收率為89%～100%，RSD 值為1.7%～2.7%，在枸杞干果中的回收率為87%～110%，RSD 值為1.3%～7.7%，均符合《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則：NY/T 788—2018》[11]中對(duì)檢測(cè)方法正確度和精密度的要求。

表2 螺螨酯在枸杞中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）Table 2 Recovery and relative standard deviation of spirodiclofen in Goji berries(n=5)

2.3 螺螨酯在枸杞中的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性研究

以0、1、3、7、10 個(gè)月作為螺螨酯在枸杞中的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性取樣時(shí)間點(diǎn)，按照前文建立的方法處理樣品，并通過《植物源性農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)準(zhǔn)則：NY/T 3094—2017》[10]中降解率公式計(jì)算螺螨酯的降解率。由表3 可以看出：螺螨酯在枸杞鮮果、枸杞干果中的降解率分別為0～18%、2%～11%。根據(jù)植物源性農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留儲(chǔ)藏穩(wěn)定性試驗(yàn)準(zhǔn)則要求，螺螨酯在兩種基質(zhì)中的降解率均低于30%，說明在低于-18 ℃條件下儲(chǔ)藏10 個(gè)月期間，螺螨酯在枸杞中的儲(chǔ)存穩(wěn)定性是可以接受的。通過比較螺螨酯在枸杞鮮果與枸杞干果中的降解率發(fā)現(xiàn)，枸杞干果中的降解率明顯低于枸杞鮮果中的降解率，造成該現(xiàn)象的主要原因是枸杞鮮果與枸杞干果的基質(zhì)不同，含水量不同，這再一次證實(shí)了不同基質(zhì)種類和含水量[12]對(duì)于農(nóng)藥的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性均具有一定影響。隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的延長(zhǎng)，同一種基質(zhì)中，螺螨酯的降解率出現(xiàn)上下波動(dòng)，但變化幅度不大，可能與前處理操作、儀器狀態(tài)差異有關(guān)，這在農(nóng)藥儲(chǔ)藏穩(wěn)定性相關(guān)研究中是普遍存在的[13]；同時(shí)，質(zhì)控樣品的數(shù)據(jù)表明螺螨酯在枸杞基質(zhì)中的穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)是合理的。

表3 螺螨酯在枸杞基質(zhì)中的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)結(jié)果Table 3 Storage stability of spirodiclofen in Goji berries

3 結(jié)論

本研究通過GC-ECD 結(jié)合固相萃取技術(shù)建立了螺螨酯在枸杞中的殘留分析方法，對(duì)建立的方法進(jìn)行確證，螺螨酯在枸杞鮮果、枸杞干果中的回收率分別為89%～100%、87%～110%，RSD 值分別為1.7%～2.7%、1.3%～7.7%，說明該方法準(zhǔn)確度高，精密度好，符合農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗(yàn)檢測(cè)分析的要求。在儲(chǔ)藏溫度低于-18 ℃、儲(chǔ)藏時(shí)間為10 個(gè)月的試驗(yàn)期內(nèi)，螺螨酯在枸杞鮮果與枸杞干果中的降解率均低于30%，說明螺螨酯在枸杞鮮果和干果中比較穩(wěn)定。