四種嬰幼兒濕疹外用方劑對小鼠急性濕疹的影響

吳白芬 尚李 尚怡 彭海燕 劉錄 何芳雁 周志宏 浦仕彪

【摘 要】 目的：研究4種嬰幼兒濕疹外用方劑對急性濕疹模型小鼠的影響，為臨床應用提供實驗依據。方法：采用2，4二硝基氟苯（DNFB）誘導小鼠遲發性超敏反應及特異性皮炎模型，給予不同濃度的4種外用方劑觀察藥物治療作用。結果：模型組小鼠耳腫脹度、脾臟系數及皮膚損傷程度均明顯高于正常對照組;各給藥組連續局部涂藥7d，均可明顯抑制DNFB誘導小鼠的耳腫脹，明顯降低脾臟系數，不同程度抑制胸腺系數，并對皮膚損傷組織有一定修復作用。結論：4種外用方劑均能明顯抑制DNFB誘發小鼠的遲發型超敏反應，并對特異性皮炎（急性濕疹）具有一定防治作用。

【關鍵詞】 外用方劑;嬰兒濕疹;變態反應;特異性皮炎

【中圖分類號】R285.6 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2022）08-0022-05

Effects of Four External Infantile Eczema Prescriptions on Acute Eczema in Mice

WU Baifen1，2 SHANG Li1 SHANG Yi1 PENG Haiyan1 LIU Lu1 HE Fangyan1 ZHOU Zhihong1 PU Shibiao1*

1.Yunnan University of Chinese Medicine Engineering Research Center of Decoction

Pieces of Traditional/ Ynnan University of Chinese Medicine，Kunming 650500，China;

2.Yunnan University of business management， Kunming 650106，China

Abstract：

Objective The effects of four external infantile eczema prescriptions on acute eczema model mice were studied to provide experimental basis for clinical application.Methods The model of delayed hypersensitivity and specific dermatitis induced by 2，4-dinitrofluorobenzene （DNFB） in mice was used to observe the therapeutic effect of four external prescriptions with different concentrations.Results The degree of ear swelling， spleen coefficient and skin damage in the model group were significantly higher than those in the normal control group. Each administration group was continuously applied locally for 7 days， which could significantly inhibit the ear swelling of mice induced by DNFB， significantly reduce the spleen coefficient， inhibit the thymus coefficient to varying degrees， and have a certain repair effect on the damaged skin tissue.Conclusion Four external prescriptions can significantly inhibit the delayed type hypersensitivity induced by DNFB in mice， and have a certain preventive effect on specific dermatitis （acute eczema）.

Key words：

External Prescription; Lnfant Eczema; Allergic Reaction;Specific Dermatitis

嬰幼兒濕疹又稱為特應性皮炎，是常見病、多發病，有研究[1]表明新生兒期至3歲是嬰幼兒濕疹的高發期。嬰兒濕疹確切病因尚不清楚，一般認為是由內、外因素共同作用而引發的變態反應性皮膚疾病，主要與遺傳、感染、環境、飲食、皮膚屏障功能破壞及機體免疫功能失調等因素相關，嬰兒期免疫系統發育不成熟也是重要的發病因素[2]。中醫對濕疹的外治法是根據皮損的性質和發病部位的不同，選擇適當的藥物和劑型，進行外洗、濕敷、涂抹、噴霧、熏洗或坐浴的方法，具有療效好、作用直接、療程短、副反應小的優勢[3]，可緩解臨床癥狀，有效改善皮損，避免了外用激素的不良反應，并在一定程度上可控制疾病復發，故越來越受到重視。本文采用DNFB誘導小鼠遲發性超敏反應及特異性皮炎模型，考察4種云南某中醫館處方、民族民間驗方及自擬外用方劑對嬰幼兒濕疹的影響，以期為臨床應用及進一步開發提供科學依據。

1 材料

1.1 實驗動物 雄性ICR小鼠，5～8周齡，體重18～26g，成都達碩實驗動物有限公司，SCXK（川）2015-030。

1.2 試劑 2，4-二硝基氟苯（DNFB，批號：F20120726，中國醫藥集團上?；瘜W試劑公司）;橄欖油（批號：20160912，國藥集團化學試劑有限公司）;丙酮（批號：20160626，天津市富宇精細化工有限公司）。D73C34DF-7F3F-4D48-9614-F757F9A02C05

1.3 受試藥品 皮炎平（復方醋酸地塞米松乳膏，批號：1706004H，華潤三九醫藥股份有限公司）;兒膚康搽劑（批號：170807，成都森科制藥有限公司）。方劑1（1#）由顯齒蛇葡萄、桑白皮及三七組成。方劑2（2#）由顯齒蛇葡萄、桑白皮及全蝎組成。方劑3（3#）由白鮮皮、紫草及全蝎組成。方劑4（4#）由顯齒蛇葡萄、白鮮皮、紫草、桑白皮、三七及全蝎組成。取各處方藥材，分別加水煎煮三次，合并濾液濃縮至含生藥濃度依次為0.84、0.80、0.80、1.04g/mL，于4～8 ℃冷藏備用。

1.4 儀器 HX602Z電子天平（慈溪市大東衡器廠）;ADVENURERTM電子天平（奧豪斯儀器（上海）有限公司）;10～100 μL移液器（Eppendorf）;8 mm打孔器、剪刀、眼科彎鑷、止血鉗等。

2 方法

2.1 DNFB致小鼠遲發型超敏反應[4] 選18～20g雄性小鼠，試驗前背部脫毛。除隨機抽取10只為正常對照外，其余造模動物均于腹部涂抹2% DNFB致敏，次日再加強1次。將模型動物隨機分為11組，于2次致敏后4 h開始于背部脫毛區及雙耳內外涂布給藥。正常和模型對照組給予純水（背0.5 mL、每耳50 μL），化藥對照組給予皮炎平（背10mg、每耳5mg），中藥對照組給予2倍稀釋的兒膚康搽劑（背0.5 mL、每耳50 μL），各方劑樣品高、低劑量組分別給予5倍及10倍稀釋的原液（背0.5 mL、每耳50 μL）;每日2次，連續7 d。致敏第7 d，末次給藥后30min，各小鼠用0.5% DNFB丙酮橄欖油溶液30 μL涂抹右耳內外兩側進行激發，左耳涂等量混合基質為對照。激發后24 h脫頸椎處死動物，剪下雙耳，以直徑8 mm打孔器取雙耳片稱重，計算腫脹度即遲發性超敏反應值，并摘取胸腺、脾臟稱重，計算脾臟和胸腺系數。結果見表1。

2.2 DNFB致小鼠特異性皮炎模型[5] 選用23～26 g雄性小鼠，實驗前日腹部剪毛、背部脫毛約2×3 cm2。除隨機抽取 11只為空白對照組外，其余動物致敏及分組情況同上。各模型組動物于致敏后第 5、8 天在背部脫毛區涂抹0.5% DNFB混合液50 μL誘發皮炎，并于首次激發后4 h開始于背部脫毛區涂藥：空白和模型對照組給予純水0.5 mL/只，化藥對照組給予皮炎平背10mg、每耳5mg，中藥對照組給予2倍稀釋的兒膚康搽劑背0.5mL，每耳50μL，各方劑樣品高、低劑量組分別給予5倍及10倍稀釋的原液背0.5mL，每耳50μL;每天給藥2次，連續7 d。第8天于脫毛部位及雙耳進行第8次給藥，1 h后用0.5%DNFB溶液30 μL涂抹右耳激發，左耳涂抹等量溶媒為對照，6 h后右耳再涂藥1次。激發后24 h，脫頸椎處死小鼠，取雙耳稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度指標;剖取胸腺和脾臟稱重，計算臟器系數;并取各組動物的背部皮膚進行組織病理學檢查。結果見表2及圖1。

2.3 數據統計 采用SPSS17統計軟件，計量資料以均數加減標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析法;方差齊采用LSD法檢驗，方差不齊采用Tamhane′s法檢驗;P<0.05表示差異有統計學意義，P<0.01表示差異有顯著統計學意義。

3 結果

3.1 對DNFB致小鼠遲發型超敏反應的影響 與模型組相比，各給藥組連續局部涂藥7 d，均可明顯抑制DNFB誘導小鼠的耳腫脹（P<0.05，P<0.01），明顯降低脾臟系數（P<0.05，P<0.01），但對胸腺系數僅有降低趨勢而無統計學意義。詳見表1。

3.2 對DNFB致特異性皮炎小鼠的影響 與模型組相比，各給藥組連續局部涂藥8 d，均可顯著抑制DNFB誘導小鼠的耳腫脹（P<0.05，P<0.01），明顯降低脾臟系數（P<0.05，P<0.01），不同程度降低胸腺系數。詳見表2。

由圖1可見，對照組皮膚各層次正常，真皮層結締組織疏松，各附屬器及脂肪組織正常;模型組表皮明顯增厚，表皮突明顯延長，角化過度和角化不全，結締組織變致密，皮下組織見炎細胞浸潤;各給藥組表皮增厚程度及炎細胞浸潤有所減輕。

4 討論

濕疹病因復雜，現代醫學對于本病的具體病因并不明確，認為遲發型變態反應與此病的發病機制密切相關[6]。嬰兒濕疹是特應性皮炎在嬰兒期的表現，西醫至今尚無理想根治手段，臨床一般以抗組胺、糖皮質激素、非特異性脫敏等治療為主，但療效并不理想，且長期使用不良反應較多[7]。基于對西醫治療的安全性考慮，多數家長更傾向于采用中藥外用制劑治療嬰幼兒濕疹，而目前臨床應用的方劑大多缺乏科學評價依據和規范的臨床總結，一定程度上限制了中醫藥優勢的發揮。本文采用DNFB誘導小鼠遲發性超敏反應及特異性皮炎模型，驗證了4種外用嬰幼兒濕疹方劑的藥效學基礎，為臨床推廣應用提供了試驗依據。

參考文獻

[1]申春平，閆琦，王召陽，等. 低齡嬰兒濕疹的流行病學調查與治療隨訪[J].臨床皮膚科雜志，2015，44（8）：469-472.

[2]劉曉雁，楊明，甄甄. 嬰兒濕疹診斷和治療[J].中國實用兒科雜志，2012，27（8）：588-590.

[3]郭櫻，楊玉峰.中藥外治濕疹研究進展[J].河北中醫藥學報，2014，29（3）：54-56.

[4]佟巖，王淑君，周曉棉，等. 楊梅素對小鼠被動皮膚過敏反應的影響[J].沈陽藥科大學學報，2009，26（10）：822-825.

[5]叢歡，李磊. 白鮮皮提取物抗濕疹實驗研究[J].中國醫學創新， 2012（12） ： 18-19.

[6]唐忠芬.白鮮皮提取物抗過敏作用的實驗研究以及在濕疹中的運用[D].成都：成都中醫藥大學，2006.

[7]王李敏.嬰兒濕疹預防和治療現狀[J].齊齊哈爾醫學院學報，2009，30（12）：1489-1491.

（收稿日期：2021-09-03 編輯：陶希睿）D73C34DF-7F3F-4D48-9614-F757F9A02C05