副流感病毒5型作為疫苗載體的研究進展

劉子寧 ， 湯新明 ， 梁 琳 ， 崔尚金

(1.中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所 ， 北京 海淀 100193 ； 2.農業農村部獸用藥物與診斷技術北京科學觀測實驗站 ， 北京 海淀 100193)

疫苗免疫是防控人類和動物疫病最經濟有效的策略。以適宜的病毒、細菌等微生物或寄生蟲為載體的活載體疫苗具有安全性高、能激發宿主多類型免疫應答、不需要佐劑等優勢，是目前疫苗研究領域的熱點之一。其中，以病毒為疫苗載體的研究最為廣泛，技術也最為成熟，并且已有許多商品化的重組病毒載體疫苗。副流感病毒5型(Parainfluenza virus type 5，PIV5)為單負鏈RNA病毒，感染宿主范圍廣，單獨感染一般不引起臨床癥狀，致病性低。其基因組相對穩定，易于培養和進行遺傳操作，具有作為疫苗載體的潛能。本文闡述PIV5的病原學特點、作為疫苗載體的優勢，及表達異源抗原的重組PIV5激發機體免疫應答的能力和針對相應抗原的免疫保護力，為載體疫苗的設計與研制提供參考。

1 副流感病毒5型概述

PIV5屬副黏病毒科(Paramyxoviridae)、腮腺炎病毒屬(Rubulavirus)成員，為單股負鏈RNA病毒，能夠從多種哺乳動物及細胞培養物中分離得到。根據國際病毒分類學委員會(ICTV)網站公布的記錄顯示，首次將該病毒命名為PIV5的時間為2009年。已報道的PIV5宿主包括人、猴、犬、豬、牛、虎和小熊貓等[1]。盡管PIV5可感染多種哺乳動物，但PIV5各毒株間基因序列較為保守，突變水平低，基因組在體內和體外都展現出較低的多樣性，且無跡象顯示其基因組間差異存在免疫或宿主特異性[2]；PIV5多由人類圈養的家畜、寵物以及動物園動物體內分離得到，其首次分離報道來自一圈養猴，但同時在野生猴體內未檢測到PIV5抗體，提示了動物可能是通過接觸人類而感染的，人類更可能是PIV5的自然宿主。PIV5致病力弱，單純的PIV5感染一般不引起臨床癥狀，一些PIV5毒株與其他病原混合感染可出現臨床癥狀，如犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus,CPIV)與支氣管敗血波氏桿菌(B.bronchiseptica)、犬腺病毒(Canine adenovirus，Ad)、犬支原體(M.canis)等病原體混合感染可引起犬傳染性呼吸道病(Canine infectious respiratory disease,CIRD)[3]，常在犬舍引起整窩幼犬感染，臨床癥狀為鼻塞、咳嗽、呼吸困難、發熱、嗜睡和下呼吸道感染[4]，俗稱“犬窩咳”。

隨著分子生物學技術的快速發展，反向遺傳操作技術成為生物體基因功能及應用研究的主要工具。對病毒而言，其基因組一般較小，基因序列較易獲得，借助細胞培養、細胞轉染與篩選，在體外條件下拯救病毒已不是障礙。由于負鏈RNA病毒的組裝需依賴RNA聚合酶和病毒結構蛋白組成的核糖核蛋白復合體(Ribonucleo-protein complex,RNPs)，其拯救相對DNA病毒和正鏈RNA病毒來說難度較大。近來年反向遺傳操作技術不斷發展，已有PIV5感染性克隆平臺成功建立的報道，構建重組PIV5載體疫苗成為了可能。PIV5作為疫苗載體具有安全性高(致病力弱)、穩定性強(基因組變異小)、感染宿主范圍廣泛、易于大規模培養等優勢，不斷有其作為載體表達狂犬病病毒[5]、高致病性禽流感病毒(HPAI)[6]、中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)[7]等高危病原體的保護性抗原，制備重組PIV5載體疫苗并進行免疫效果評價的報道。本團隊主要從事寵物疫病免疫防控產品的研制，針對PIV5和本實驗室分離的CPIV5毒株的病原學特性，認為CPIV5是理想的疫苗活載體，具有開發價值和應用前景。

2 副流感病毒5型病原學特點

PIV5屬單負鏈RNA病毒目、副黏病毒科、副黏病毒亞科、腮腺炎病毒屬病毒。病毒粒子呈多形性，直徑在50～300 nm。病毒粒子的核衣殼呈螺旋對稱，厚度約17 nm，外有囊膜包被，主要成分為來源于宿主細胞的脂質體。囊膜表面有密集的纖突結構，包括血凝素-神經酪氨酸酶糖蛋白(Hemagglutinin-neuraminidase glycoprotein,HN)和融合蛋白(Fusion protein,F)2種纖突蛋白，該纖突結構與病毒進入宿主細胞有關，也是抗體中和病毒的靶標。PIV5可在多種人和動物細胞上生長并獲得高滴度培養產物，常用Vero細胞、MDCK細胞和MDBK細胞，較少引起細胞病變[2]。

PIV5基因組為不分節段的負鏈RNA，基因片段大約15.5 kb，共包括7個基因，編碼8種蛋白，從3′端到5′端依次為核衣殼蛋白(Neucleocapsid,NP)、磷酸化蛋白(Phosphoprotein,P)或輔助蛋白(Accessory protein,V)、膜基質蛋白(Matrix protein，M)、融合蛋白F、小疏水性蛋白(Small hydrophobic protein,SH)、血凝素-神經酪氨酸酶蛋白HN和大聚合酶蛋白(Large polymerase protein,L)，它們在PIV5整個生命周期里的總表達量依次遞減[8]，具有梯度轉錄的特性，這8種蛋白在病毒粒子表面的排布結構如圖1所示。盡管PIV5可以從人和多種不同哺乳動物體內分離得到，但對來自人、猴、豬和犬的多個PIV5毒株進行序列分析和比對顯示，其總核苷酸差異不超過7.8%，兩兩毒株間的平均差異僅為2.1%，且差異氨基酸隨機分布，在不同宿主來源的毒株間無特定規律，提示該病毒的宿主特異性較低[2,9]。其中變化最顯著的是SH基因編碼的氨基酸，一些犬源和豬源PIV5的SH基因功能不全或缺失，可作為PIV5毒株間的差異化分子標記。由于SH蛋白可以抑制TNF-α分泌，阻斷其介導的細胞凋亡[10]，缺失SH基因的PIV5細胞病變作用增強，同時誘導更強大的清除性免疫，比野生型PIV5更適合作為疫苗載體[11]。

圖1 副流感病毒5型結構示意圖

3 副流感病毒5型感染性克隆平臺的構建

3.1 反向遺傳學 PIV5載體的構建主要利用反向遺傳學(Reversed genetics)技術來實現。反向遺傳學技術是通過操縱基因組來進行基因突變、替換、插入和缺失，進而觀察其對表型的影響的技術。病毒反向遺傳學技術即是以病毒為研究對象，將病毒的RNA反轉錄為cDNA，在DNA層面對病毒基因組進行研究和改造，再將遺傳物質轉染進細胞或生物體內組裝為新的病毒，稱為病毒拯救。基于反向遺傳操作平臺，既可實現對病毒基因功能及致病機理的基礎研究，又可實現對病毒致弱或插入外源基因等的改造，是人類在病毒研究領域的一項重要技術。

3.2 PIV5反向遺傳操作平臺構建 相較于正鏈RNA病毒，負鏈RNA病毒反向遺傳操作系統較難建立。負鏈RNA病毒裸露的負鏈基因組或正鏈反基因組都不能作為啟動感染循環的模板，產生的子代病毒不具有感染性，只有在宿主RNA聚合酶作用下與結構蛋白NP、P、L共同構成RNP后才能產生具有感染性的子代病毒。PIV5反向遺傳操作系統建立的要點首先是構建正確的全長質粒，再分別構建表達NP、P、L蛋白的輔助質粒，將4種質粒以適當的比例共轉染能夠提供T7聚合酶的真核細胞系，實現病毒拯救。由于真核細胞不表達T7聚合酶，需額外引入，目前常用的方式有4種：(1)使用能提供T7聚合酶的重組痘病毒MVA-T7在轉染前感染細胞[12]；(2)構建表達T7聚合酶的重組細胞系，如以BHK-21細胞系為基礎構建的BSR-T7細胞系；(3)使用編碼T7聚合酶的質粒與4個病毒質粒共轉染細胞[13]；(4)使用真核細胞自身的RNA聚合酶系統(Pol Ⅱ系統)，這種方法不需要添加T7聚合酶，適用細胞種類更廣，據報道對副黏病毒科病毒的拯救效率高于T7聚合酶系統[14]。

3.3 外源基因的插入 副黏病毒科病毒的NP蛋白需要結合6個堿基才能與病毒基因組相互作用，因此病毒基因組的堿基數目必須是6的倍數才能有效復制，該復制原則被稱為“六堿基原則”。當插入外源基因后不滿足該原則時，需要額外補充堿基使重組病毒總長度為6的倍數。PIV5從3′末端起始轉錄，基因起始序列(GS)和終止序列(GE)指引RNP按順序依次對基因進行轉錄。拯救重組不分節段負鏈RNA病毒(Nonsegmented negative-strand RNA virus，NNSV)時，外源基因會以獨立的開放閱讀框進行轉錄表達。第1個被插入至PIV5基因組的外源基因是綠色熒光蛋白(GFP)基因，表達GFP蛋白的PIV5(rPIV5-GFP)具有與野生型PIV5一樣的活性，為PIV5作為疫苗載體表達其他病毒保護性抗原成分的研究奠定了基礎[12]。早期的研究指出，插入外源基因片段越大對PIV5載體在體內復制的影響越大，而增加小片段插入基因的數量未發現對載體的復制有明顯影響，但重組病毒基因組總長度不能太長，PIV5可接受1～3個外源基因的插入，總長度在4～5 kb，為了容納更多的外源核苷酸可以移除PIV5的SH基因[7]。此外，由于PIV5具有梯度轉錄的特性，外源基因的插入位置離啟動子越近，表達效率越高，越遠則越低；但是，有報道指出外源基因插入啟動子和NP基因之間無法產生有活性的病毒粒子，插入NP基因和V/P基因之間病毒在生長時存在缺陷[11]，提示外源基因插入越靠近啟動子處，載體的衰減作用越強。現存的PIV5載體疫苗多采用將外源基因插入HN基因和L基因之間的保守方法[6,11,15-16]，但也有將外源基因插入SH基因和HN基因之間[17]能夠誘導宿主更強烈的免疫應答的報道。

4 副流感病毒5型作為表達載體的優勢

PIV5作為新型疫苗載體有許多突出的優勢：(1)PIV5安全性高，單獨感染人和大多數動物均不造成臨床疾病，而同屬副黏病毒科的其他病毒如新城疫病毒(NDV)、犬瘟熱病毒(CDV)等，由于它們本身對易感動物的致病性較強，以這些病毒制備的疫苗發生毒力返強、毒力殘留的風險比PIV5更高、影響更大。即便CPIV與其他病原體混合感染對犬具有一定致病性，但其弱毒疫苗株長期與犬瘟熱病毒、犬細小病毒、犬傳染性肝炎病毒制成聯苗應用于犬只[18]，提示致弱的CPIV疫苗株作為疫苗載體也具有較高的安全性；(2)PIV5基因組結構穩定，便于多種外源基因的插入，插入的外源基因以獨立的開放閱讀框轉錄翻譯，在病毒傳代過程中不易丟失和突變[19]，且外源基因插入合適的位點載體毒力不變，使PIV5比許多正鏈RNA病毒如豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)[10]和豬塞內卡病毒[20]更加適用于作為疫苗載體；此外，PIV5遺傳穩定，各毒株間差異小，幾乎不與其他病毒發生基因重排，進一步增加了其作為疫苗載體的安全性；(3)PIV5僅在胞漿中進行復制，遺傳物質為RNA，不存在DNA階段，病毒基因組不會整合到宿主細胞基因組內，幾乎不與宿主基因發生交換，不會對宿主產生負面影響；傳統DNA病毒載體如痘病毒、腺病毒、皰疹病毒等，雖然易于構建感染性克隆平臺，但其基因組復制需要在細胞核內進行，病毒DNA有錯配遺留在宿主細胞內的風險，體外細胞培養過程中也存在細胞轉化，相比負鏈RNA病毒存在一定風險[21]；(4)PIV5易于培養，大規模生產成本低，可用多種哺乳動物細胞系培養并獲得高滴度培養產物，Vero細胞培養可得到8×108PFU/mL的病毒液；(5)動物先前暴露于PIV5野毒或疫苗株均不會妨礙PIV5載體疫苗誘導免疫反應的強度[18]，提示PIV5載體疫苗可以使用或重復使用于任何免疫背景的動物，如有報道指出PIV5為載體的疫苗所誘導的抗體滴度是目前在美國市場流通的其他種類疫苗的3倍[13]；(6)PIV5免疫途徑多樣，不局限于注射給藥，鼻內給藥或口服給藥都能達到良好的免疫效果，適用于動物群體的大面積應用；(7)PIV5能夠全面的激活宿主的免疫應答，調動全身性體液免疫、細胞免疫及局部黏膜免疫，產生高效、廣范、持續的免疫應答，特別是具有高效誘導呼吸道黏膜免疫的能力。

PIV5為載體的疫苗比其他病毒載體制備的疫苗具有更優越的免疫保護性。以H1N1-NP蛋白為外源基因分別插入VACV、腺病毒5型(Ad5)和PIV5制得VV-NP、Ad5-NP和PIV5-NP，分別研究其免疫原性，結果表明PIV5-NP的免疫保護性最佳，單次接種106PFU的PIV5-NP對攻毒致死劑量H1N1的小鼠的免疫保護率為100%，且小鼠體重僅減輕10%～20%[22]；而Ad5-NP對同樣處理的小鼠的免疫保護率是80%且小鼠體重減輕30%[23]，這可能與腺病毒未成功誘導呼吸道黏膜免疫有關，在表達中東呼吸綜合征冠狀病毒刺突蛋白(MERS-S)的Ad5中也可觀察到重組病毒無法誘導黏膜免疫的現象[24]；而VV-NP在這項試驗中未發揮免疫保護作用。在使用多個不同載體表達MERS-S制備疫苗的對比試驗中，PIV5載體疫苗也具有明顯的優勢，只需單次接種104PFU PIV5-MERS-S即可100%保護攻毒小鼠免于死亡，而RABV-MERS-S則需3次接種10 μg重組病毒粒子才能達到相同的保護效果[25]。在已報道的MERS載體疫苗中，PIV5載體疫苗的效果較好。

5 重組副流感病毒5型表達其他病原抗原的免疫保護力

5.1 重組PIV5表達流感病毒抗原 流感病毒HA蛋白是PIV5作為疫苗載體首次表達的外源病毒蛋白[26]，表達H5N1和H3N2 HA蛋白的重組PIV5(rPIV5-HA)在小鼠體內都具有良好的免疫原性。PIV5在表達膜蛋白時能夠把外源病毒蛋白展示在重組病毒膜表面，高效地刺激機體產生針對外源蛋白的特異性抗體[27]，在小鼠模型中證實了其具有良好的免疫保護性[17]。流感病毒HA蛋白的突變率較高，rPIV5-HA不能提供很好的交叉免疫，而流感病毒NP蛋白序列較為保守，繼rPIV5-HA后即出現了表達NP蛋白的PIV5(rPIV5-NP)。rPIV5-NP在小鼠模型內對致死劑量的H1N1攻毒具有100%的免疫保護性，但小鼠存在10%～20%的體重減輕，肺組織仍然會受到病毒侵襲。NP蛋白重組痘病毒(VV-NP)幾乎不具有免疫保護性；NP蛋白重組腺病毒(Ad5-NP)免疫的小鼠有20%死亡，存活小鼠的體重減輕達30%，相比較而言rPIV5-NP的免疫保護性明顯要優越得多[23]，這揭示了PIV5比傳統載體病毒更具作為通用型流感疫苗載體的價值。此外，由于流感病毒表面蛋白NA較HA的突變率低，表達NA蛋白的重組PIV5(rPIV5-NA)也比rPIV5-HA能產生更廣泛的交叉免疫。有研究證明，rPIV5-NA可誘導小鼠產生針對H5N1和H1N1高效的中和抗體，且明顯減輕臨床癥狀[6]，為PIV5作為通用型流感疫苗載體的價值提供了進一步證明。

5.2 重組PIV5表達狂犬病病毒抗原 狂犬病是一種高度接觸性、致死性的中樞神經系統疾病，盡管已有多種人用滅活狂犬病疫苗取得了不錯的免疫效果，但很難應用于流浪動物和野生動物狂犬病的防控，而這恰恰是狂犬病嚴重威脅人類的根源。PIV5重組活載體疫苗免疫途徑多樣，有報道指出其經口免疫的效價與口服狂犬病弱毒苗相當，經鼻免疫的效價甚至優于狂犬病弱毒苗[28]，且比后者的生物安全性高，為流浪動物和野生動物狂犬病疫苗的研制提供了更優選擇。狂犬病病毒糖蛋白(Rabies virus gloycoprotein,RVG)是狂犬病病毒主要的表面抗原，它不僅決定病毒的致病性，還是刺激宿主產生特異性中和抗體、激活免疫應答的主要蛋白。插入RVG基因的重組PIV5(rPIV5-RV)與rPIV5-HA一樣能夠把外源蛋白展示在重組病毒膜表面，高效地刺激機體產生針對狂犬病病毒的免疫應答[28]。此外，當進行狂犬病緊急治療時，需要同時注射狂犬病疫苗和單克隆抗體，rPIV5-RV的一大優勢是其不會被抗狂犬病毒單克隆抗體中和[5]，此時使用PIV5為載體的狂犬病疫苗比傳統滅活疫苗的效果更好。

5.3 重組PIV5表達人呼吸道合胞體病毒抗原 人呼吸道合胞體病毒(RSV)主要引起兒童、老人和免疫力低下人群細支氣管炎和肺炎[29-30]，尚無得到批準的疫苗上市，亟待研發安全高效的RSV疫苗。PIV5載體主要表達RSV膜表面融合蛋白(PIV5-F)和糖蛋白(PIV5-G)，在小鼠感染模型中已證實單次接種106PFU的PIV5-F或PIV5-G接種均可誘導有效的保護性免疫反應，其中PIV5-F可誘導血清中和抗體，PIV5-G免疫小鼠體內雖未檢測到血清中和抗體，但PIV5-G依然能有效降低小鼠肺部的RSV病毒載量。以非洲綠猴為模型的試驗中發現，PIV5-F可以最大程度的降低綠猴呼吸道內RSV的病毒滴度，比PIV5-G的免疫保護效率高[14]。對PIV5-F和PIV5-G的體外和體內培養都顯示，外源RSV基因在重組病毒傳代過程中持續保持高度穩定，不易突變而丟失。但是，RSV基因的插入會影響PIV5基因組的穩定性，使其在傳代過程中發生一定水平的突變[17]。所以PIV5為活載體的RSV疫苗的安全穩定性還需進一步研究。

5.4 重組PIV5表達痘病毒抗原 PIV5作為載體表達痘病毒(VACV)L1R和B5R的研究在小鼠感染模型內也取得了成功[31]，這2種分泌蛋白是介導VACV胞內成熟和囊膜包被的重要蛋白。PIV5-L1R/B5R免疫可誘導小鼠產生抗VACV中和抗體，感染致死劑量VACV的小鼠經鼻內接種PIV5-L1R/B5R可顯著降低病毒引起的病理學損傷。盡管免疫PIV5-L1R/B5R的小鼠仍然存在一定程度的體重減輕，但是與對照組相比其減重較少且較慢。該研究還發現，經PIV5-L1R/B5R免疫的小鼠可以免于感染VACV長達1.5年以上，其VACV抗體水平持續保持高濃度。這一發現揭示了PIV5作為長效疫苗載體的可能性。

5.5 重組PIV5表達中東呼吸綜合征冠狀病毒抗原 中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)感染人能夠造成嚴重的致死性呼吸道疾病，與2003年在我國暴發的SARS-CoV以及自2019年末至今席卷全球的2019-CoV同屬β屬冠狀病毒，親緣關系較密切，它們感染宿主細胞的主要膜蛋白均為刺突蛋白(Spike,S)，是冠狀病毒主要的保護性抗原成分。最近研究指出，表達MERS-CoV S蛋白的重組PIV5(PIV5-MERS-S)在hDPP4 KI小鼠模型內被證實可以起到可靠而有效的免疫保護作用[7]。該研究還指出，PIV5-MERS-S主要依靠激發宿主強烈的細胞免疫反應來發揮抵抗MERS-CoV感染的作用。PIV5-MERS-S免疫小鼠在攻毒MERS-CoV后可喚起強烈的MERS-S特異性CD8+T細胞的免疫反應，可完全保護小鼠免于死亡，其肺部的組織病理損傷也明顯減少。PIV5-MERS-S的免疫保護效果明顯優于MERS滅活苗，單次免疫104PFU的PIV5-MERS-S即可保護100%的小鼠免于死亡，而滅活MERS-CoV僅可保護25%的小鼠。除此以外，現存MERS滅活苗和SARS滅活苗易引發超敏反應的缺陷在PIV5-MERS-S免疫小鼠身上得到改善，PIV5-MERS-S造成的肺部嗜酸性粒細胞浸潤和玻璃樣變較MERS滅活苗少，但尚無統計學意義上的差異。盡管PIV5-MERS-S對肺內病毒的清除率高于滅活的MERS-CoV，但尚不能實現完全的清除性免疫，研究者認為，同時在PIV5載體內插入MERS-CoV的M蛋白和N蛋白可以進一步提高疫苗的病毒清除率。總之，PIV5-MERS-S比現存的滅活疫苗和許多傳統病毒為載體的MERS疫苗都更能少量高效地發揮免疫保護作用[25,32-34]，且不易發生超敏反應，是非常有前景的MERS疫苗候選載體。PIV5作為MERS-CoV載體的效果優越，預示著其同樣有潛力成為當下流行的2019-CoV的載體。

5.6 重組PIV5表達結核桿菌抗原 PIV5除作為其他病毒蛋白的表達載體外，也可作為細菌蛋白的表達載體。結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)引起人和動物的結核病(TB)，是一類胞內寄生菌，常規抗生素療效不顯著，常呈現持續感染，嚴重危害機體健康。目前獲得批準的結核病疫苗只有牛結核減毒活疫苗(BCG)，但其免疫效力較低，不能有效減少結核分枝桿菌形成的結核灶。以PIV5為載體表達結核分枝桿菌抗原85A(PIV5-85A)和85B(PIV5-85B)的疫苗在小鼠感染模型內都能有效地減少肺內的結核分枝桿菌載量，其中PIV5-85A能最大程度地減少感染小鼠肺部的菌落形成單位(CFU)[35]。此外，該研究還發現，初次免疫BCG的小鼠在加強免疫PIV5-85A或PIV5-85B后能夠顯著提升BCG的免疫效力，細菌載量可減少103單位的CFU。這是首次有研究指出PIV5載體疫苗具有提升初次免疫的其他疫苗免疫效力的能力，拓寬了PIV5作為疫苗載體研究的領域。

6 展望

經濟社會的快速發展改變了人與人、人與動物之間的交流模式和頻率，使得一些疫病尤其是人獸共患傳染病的暴發呈現新的態勢，傳統的滅活疫苗和弱毒疫苗已不能滿足許多疾病的防控需求，疫苗研制也由傳統疫苗的經驗性研制逐步過渡到依賴先進免疫學理論和技術的新型疫苗研制。重組載體疫苗相比較于滅活疫苗更能高效地誘導細胞免疫和體液免疫，過敏反應也較輕；又比弱毒疫苗更具安全性，可以用于制備生物安全級別較高的病原體疫苗。選擇合適的載體病毒是研發重組載體疫苗的關鍵，PIV5在眾多病毒載體中優勢顯著，雖然由于早期反向遺傳技術不夠成熟，投入市場使用的活載體疫苗還多以DNA病毒為基礎，但近年來負鏈RNA病毒反向遺傳技術不斷完善，PIV5極大的潛能勢必在未來有極高的應用前景。在獸醫領域，PIV5由于其感染犬的效率高、對大多數動物安全性良好、基因組穩定性高、易于培養、免疫途徑多樣和能夠全面激發免疫應答等特點，作為動物疫苗載體特別是作為犬貓狂犬病疫苗載體的優勢突出，比同類病毒中不具備感染犬能力的新城疫病毒(NDV)和對犬危害較大的犬瘟熱病毒(CDV)都更具優勢；在人類醫療領域，PIV5不致病又能經呼吸道接種，高效誘導呼吸道黏膜免疫的能力使它作為呼吸道疾病疫苗的研究引人注目，特別是在2019年末以呼吸道感染和肺炎為代表性癥狀的COVID-2019出現并產生全球性的暴發后，PIV5作為呼吸道疾病疫苗載體的價值有望進一步體現。