ENA抗體檢驗和血清體液免疫檢驗在診斷SLE方面的價值分析

任彥喜

摘要：目的 分析ENA抗體檢驗和血清體液免疫檢驗在診斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）方面的價值。方法 選擇2021年1月至2022年2月東明縣人民醫(yī)院收治30例的SLE患者納入研究組，同期30例健康者納入對照組，均行ENA抗體檢驗和血清體液免疫檢驗，對比兩組體液免疫指標、ENA抗體陽性檢出率。結果 研究組ds-DNA、Sm、SSB、SSA、nRNP抗體陽性檢出率高于對照組（P<0.05），研究組IgM、IgG、IgA高于對照組，C3、C4低于對照組（P<0.05）。結論 ENA抗體檢驗和血清體液免疫檢驗可用于SLE診斷。

關鍵詞：系統(tǒng)性紅斑狼瘡;血清體液免疫檢驗;ENA抗體檢驗;診斷意義

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種慢性復發(fā)性自身免疫性疾病，在育齡婦女中很常見[1]。SLE的病因尚不完全清楚，可能與遺傳、雌激素和環(huán)境因素（包括藥物、紫外線和感染）密切相關[2]。SLE的癥狀是面部蝴蝶狀紅斑，表皮水泡有或沒有中性粒細胞。暴露部位容易出現皮膚病變，包括光敏感性、脫發(fā)、雷諾現象、網狀紅斑和紫癜，除了皮膚損傷，還可能伴有關節(jié)疼痛或關節(jié)炎[3]。SLE患者血清中具有較多自身抗體和免疫復合物，導致血清免疫球蛋白、補體水平異常現象出現，故可以結合以上指標對患者進行診斷評估。實踐發(fā)現，如在診斷中可以結合ENA抗體檢驗和血清體液免疫檢驗，能為臨床提供一定的參考依據。本研究分析ENA抗體檢驗和血清體液免疫檢驗在診斷SLE方面的價值，現報道如下。

1資料與方法

1.1 基本資料

選擇2021年1月至2022年2月東明縣人民醫(yī)院收治30例的SLE患者納入研究組，同期30例健康者納入對照組，均簽署知情同意書。研究組：男1例，女29例;年齡21～52歲，平均（38.65±7.82）歲。對照組：均為女性，年齡20～53歲，平均（38.37±7.93）歲。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

1.2 研究方法

血清體液免疫檢驗：采集血液，分離血清，使用ELISA法檢測IgM、IgG、IgA、C3、C4。（1）包被：用包被液稀釋抗體至蛋白含量為0.5～20 ?G/ml，100 ?l/孔，4℃包被過夜。（2）洗盤：PBS沖洗2～3次即可，每次3～5 min;（3）封孔：按200～250 ?l/孔加封孔液，4℃過夜，然后棄孔內封孔液;（4）樣品處理：用洗滌液或樣品稀釋液將樣品（包括未知抗原）稀釋至所需濃度;（5）標準溶液：用洗滌液或樣品稀釋液將標準溶液稀釋至所需濃度;（6）加樣：依次加入50～100 ?l/孔稀釋的標準溶液、處理過的樣品、陰性對照和陽性對照，室溫或37℃孵育30～60 min;（7）加入酶標抗體：按照產品說明書稀釋酶標抗體，按50～100 ?l/孔加入新鮮制備的酶標抗體，室溫或37℃孵育1 h;（8）加入顯色底物溶液：按100～150 ?l/孔加入新配制的TMB底物溶液，室溫避光15～30 min。（9）反應終止：每個反應孔加入50 ?l終止液。（10）結果：反應孔顏色越深，陽性程度越強。陰性反應是無色或很淡的。根據顏色的深淺，用“+”和“-”表示。OD值也可以在450 nm（ABTS為410 nm）下測量。空白對照孔置零后，測量每個孔的OD值。如果樣品孔的OD值比陰性對照孔的OD值大2.1倍，則為陽性。

ENA抗體檢驗：采集血液，分離血清，用免疫斑點法檢測ENA抗體。（1）室溫下用100 ?l 70%酒精的聚偏氟乙烯孔板培養(yǎng)10 min。倒出酒精，用PBS清洗3次;（2）加入稀釋后的捕獲抗體，每孔加100 ?l，蓋上板蓋，4℃過夜;（3）將100 ?l 2%的脫脂牛奶加入每個孔中，蓋上盤子，在室溫下培養(yǎng)2 h;（4）向每孔加入100 ?l血清。可在體外預先受到刺激（間接伊利斑）。蓋上標準的96孔板塑料板蓋，在37℃的CO2培養(yǎng)箱中孵化15～20 h。（5）每孔加入100 ml清洗緩沖液，并在4℃的環(huán)境中孵化10 min。（6）于10 ml PBS-1%BSA中稀釋100 ?l檢測抗體，此為1板的量。每孔加100 ?l此液體，蓋上板蓋，37℃下孵育1.5 h。（7）10 ml的PBS-1%BSA稀釋10 ?l的親和素堿性磷酸酶，每孔加入100 ?l，37℃的溫度下1 h。（8）每孔加100 ?l BCIP/NBT，室溫下反應5～15 min。將板倒置以免殘留的液體流回膜上一旦膜干燥后，讀取點數。4℃下放置一夜，點數會比較明顯。

1.3 觀察指標

對比兩組體液免疫指標（IgM、IgG、IgA、C3、C4）、ENA抗體陽性檢出率。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 24.0軟件分析數據，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數資料用率表示，采用χ2檢驗，（P<0.05）為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1 兩組ENA抗體陽性檢出率對比

研究組ds-DNA、Sm、SSB、SSA、nRNP抗體陽性檢出率分別為60.00%（18/30）、56.67%（17/30）、63.33%（19/30）、66.67%（20/30）、73.33%（22/30），對照組ds-DNA、Sm、SSB、SSA、nRNP抗體陽性檢出率均為0（P<0.05）。

2.2 兩組體液免疫指標對比

研究組IgM、IgG、IgA、C3、C4分別為（1.97±0.41）mg/L、（25.45±4.22）mg/L、（1.85±0.43）mg/L、（0.33±0.04）g/L、（0.09±0.02）g/L，對照組分別為（0.89±0.25）mg/L、（10.64±2.36）mg/L、（0.93±0.32）mg/L、（1.03±0.18）g/L、（0.26±0.05）g/L，IgM、IgG、IgA高于對照組，C3、C4低于對照組（P<0.05）。

3討論

SLE是一種由抗體和免疫復合物形成的自體免疫性疾病，在女性中更常見，占90%，通常是20～40歲的育齡婦女[4]。SLE屬嚴重疾病，其診斷應該包括兩部分，一是臨床癥狀，二是免疫學指標。美國風濕病協(xié)會修訂的SLE診斷標準共包括11項，如蝴蝶狀皮膚紅斑或盤狀紅斑、板狀紅斑、光敏感性、口鼻潰瘍、脫發(fā)、關節(jié)炎、關節(jié)痛或胸膜炎、漿膜炎和腎臟損害等，符合其中4項即可確診[5]。SLE對血液系統(tǒng)的損害是白細胞減少，溶血性貧血和低血小板計數。最重要的是抗核抗體陽性，有許多抗核抗體陽性的抗體，更特異的被稱為抗雙鏈dna抗體陽性，抗smith抗體陽性，抗磷脂抗體陽性。目前，在我國SLE臨床診斷中，血清補體水平降低也成為主要的診斷標準之一。

本研究中，研究組ds-DNA、Sm、SSB、SSA、nRNP抗體陽性檢出率高于對照組（P<0.05），研究組IgM、IgG、IgA高于對照組，C3、C4低于對照組（P<0.05）。體液免疫是指免疫效應B細胞產生特異性抗體。抗體具有保護作用，可產生相應的免疫治療。體液免疫中含有大量抗體，可以殺死和破壞病原體[6]。蛋白質、多糖、病毒顆粒和病原體在大分子細菌表面產生不同的抗原和特異性抗體，可被體液免疫殺死和清除，具有良好的免疫效果[7]。在類風濕性關節(jié)炎、干燥綜合征和SLE等自身免疫性疾病中，活動期血清IgM會升高。而急性感染后多伴隨出現免疫球蛋白IgG陽性，當感染痊愈時，會有記憶抗體，即免疫球蛋白IgG，表示感染，但不表示疾病。IgA可分為血清型和分泌型。IgA血清型可介導ADCC的調節(jié)和吞噬作用。分泌型IgA（sIgA）是黏膜防御系統(tǒng)的主要成分。它覆蓋鼻子、咽、氣管、腸和膀胱的黏膜表面，可以抑制微生物附著在呼吸道上皮細胞上，減緩病毒繁殖，這是一個重要的黏膜屏障。它對某些病毒、細菌和一般抗原具有抗體活性，這是防止病原體侵入人體的第一道防線。當外來抗原進入呼吸道或消化道并刺激局部免疫系統(tǒng)時，它們可以在沒有中樞免疫系統(tǒng)參與的情況下進行免疫反應，并產生分泌性抗體，即SIgA。抗原和抗體結合需要補體，當它引起免疫反應和自身免疫時，補體將被消耗和減少[8]。因此，當免疫系統(tǒng)受損時，補體C3/C4會被消耗。

抗ENA抗體主要用于檢測風濕性疾病，如類風濕性關節(jié)炎、干燥綜合征、SLE等，但與疾病的嚴重程度和活動性無明顯關系[9]。不同的陽性抗體對應不同的疾病，如抗SM抗體呈陽性反應，常見于SLE。結締組織病患者體內有ENA抗體。不同的抗ENA抗體與疾病類型有關。正如1/2的SLE患者有抗ENA抗體。SLE是由于同時存在多種抗體，其中SM抗體是擁有屬性標記的抗體。臨床上，SM抗體陽性多伴有RNA抗體陽性，單一SM抗體陽性少見。常用的方法很難純化和分離SM和RNP抗原。混合結締組織病患者的抗ENA抗體出現頻率高，滴度高，主要用于核糖核蛋白。血清中抗RNP抗體滴度幾乎為負相關，是混合結締組織病的一個指標。抗DNA抗體陽性的患者如果同時有抗ENA抗體，預后較好。腸道和抗LA抗體通常與干燥綜合征同時發(fā)生。因此，檢測ENA抗體有助于結締組織疾病的診斷和鑒別診斷。非風濕性疾病患者和正常血清中未檢測到抗SM抗體和抗RNP抗體，抗SM抗體與SLE活動性和腎損害無關，不能作為判斷SLE腎病活動性、改善和療效的依據。

綜上所述，ENA抗體檢驗和血清體液免疫檢驗，可用于SLE診斷。

參考文獻

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