市售和自摘銀杏葉中黃酮類化合物含量對(duì)比研究

周晴 呂虹霞 代靖

【摘要】目的：研究市售和自摘銀杏葉中黃酮類化合物的含量對(duì)比。方法：主要采用超聲波輔助法，使用不同濃度乙醇溶液提取銀杏葉中黃酮類化合物，另外采用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)定銀杏葉中黃酮類化合物含量。結(jié)果：市售的銀杏葉中黃酮類化合物含量最多。結(jié)論：超聲提取法省時(shí)、高效、節(jié)能、環(huán)保，適用于銀杏葉中黃酮類化合物的提取，且在該條件下陜西省西安市市售的銀杏葉中黃酮類化合物含量比自摘銀杏葉高。

【關(guān)鍵詞】銀杏葉;黃酮;超聲提取法;紫外可見分光光度法

【DOI 編碼】10.3969/j.issn. 1674-4977.2022.02.012

Comparative Study on Flavonoid Content in Commercial and Self-picked Ginkgo Biloba Leaf

ZHOU Qing，Lu Hong-xia，DAI-Jing

（Xi'an International University，Xi'an 710077，China）

Abstract：Objective：To study the content comparison of flavonoids in commercial and self-picked Ginkgo biloba leaf. Methods：Flavonoids in Ginkgo biloba leaf were extracted with different concentrations of ethanol by ultrasonic-assisted method，and the content of flavonoids in ginkgo biloba leaf was determined by UV-visible spectrophotometer. Results：The commercial Ginkgo biloba leaf contained the most flavonoids. Conclusion：Ultrasonic extraction is time-saving，high efficiency，energy saving，environmental protection，suitable for the extraction of flavonoids in Ginkgo biloba leaf，and under the conditions of Xi'an city，Shaanxi Province，the content of flavonoids in Ginkgo biloba leaf is higher than that of self-picked Ginkgo biloba leaf.

Key words：Ginkgo biloba leaf;flavonoids;ultrasonic extraction;UV-visible spectrophotometry

銀杏葉除了含有黃酮類化合物以外，同時(shí)還含有蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、糖類、多酚類等水溶性物質(zhì)，大量應(yīng)用于防治心腦血管疾病、神經(jīng)性疾病、哮喘、癌癥等疾病[1]。臨床使用的干燥銀杏葉藥材一般為人工栽培，市面上買到的干燥銀杏葉也都是人工栽培的藥用銀杏葉[2]。除了栽培銀杏樹，中國(guó)很多地區(qū)野生銀杏樹的數(shù)量也不少。西安有銀杏樹的地區(qū)就很多，如古觀音禪寺、杜陵遺址公園、漢陽陵、唐大慈恩寺遺址公園、大唐芙蓉園等。

黃酮類化合物作為銀杏葉的主要成分之一，具有抗氧化、抗炎、抗衰老、抗癌、保肝護(hù)肝、抑菌、治療心血管疾病等作用，對(duì)高血壓、癌癥、冠心病等疾病有顯著的療效[3]。姜曉旭等人[4]的研究證明，銀杏葉中黃酮類化合物是治療心血管疾病的主要有效成分。穆楠[5]的研究證明，銀杏葉中黃酮類化合物在抗腫瘤方面具有很大潛力。

近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，銀杏葉除了作為中藥材使用，還被廣泛地應(yīng)用于飲料、化妝品等領(lǐng)域。陳桂光等人[6]的研究表明，以銀杏葉和芒果為原料，可以研制出一種新型的營(yíng)養(yǎng)保健天然飲品，為銀杏葉飲料市場(chǎng)的開發(fā)提供了一定的依據(jù)。劉燕等人[7]在介紹銀杏潔面膏和銀杏護(hù)膚爽的研制方法時(shí)簡(jiǎn)述了銀杏在防衰老化妝品中的應(yīng)用，表明它在化妝品領(lǐng)域也有很大潛力。

提取銀杏葉黃酮類化合物主要可以采用浸取方法、超聲提取方法、微波技術(shù)提取方法、生物酶解提取方法、先進(jìn)的超臨界流體萃取方法[8]。房磊[9]采用超聲輔助法的最佳工藝為提取功率80 W、提取時(shí)間40 min、提取溫度70℃、料液比1：25 （g/mL），此條件下提取出黃酮為27.32 mg/g。杜若源等[10]提取銀杏葉中總黃酮采用超聲波輔助方法的最優(yōu)提取條件為：乙醇濃度60%，固液比1：50（m：v），提取時(shí)間30 min，浸提物總黃酮含量達(dá)到8.075 mg/g，提取率達(dá)到80.75%。在張育新等人[11]的研究表明，按照國(guó)內(nèi)的設(shè)備和成本現(xiàn)狀，銀杏葉中黃酮類化合物提取主要采用的是水-乙醇提取法。所以，在乙醇回流的過程中，影響銀杏葉中黃酮類化合物提取的重要成因有提取溶劑的濃度（乙醇）、提取溶劑的具體用量、提取次數(shù)和提取時(shí)間。在本次研究主要采用超聲輔助提取法提取銀杏葉中黃酮類化合物，在乙醇回流的過程中分析乙醇濃度對(duì)銀杏葉中黃酮類化合物提取率的影響，同時(shí)對(duì)比市售和自摘銀杏葉中黃酮類化合物的含量，為后期開發(fā)利用銀杏葉提供廣泛發(fā)展思路。

1儀器與試藥

1.1儀器

電子天平（FA004，寧波市鄞州華豐電子儀器廠）;電熱鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9053型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;超聲波清洗器（SB-25-12DTDB型，寧波新芝生物科技股份有限公司）;紫外分光光度計(jì)（UV754PC型，上海佑科儀器儀表有限公司）。

1.2試藥與試劑

所有銀杏葉經(jīng)西安外事學(xué)院醫(yī)學(xué)院呂虹霞副教授鑒定為正品。市售銀杏葉（產(chǎn)地：陜西，購(gòu)于西安中藥材市場(chǎng)）;自摘銀杏葉（產(chǎn)地：陜西，摘自西安外事學(xué)院校區(qū)主路，新鮮，無病蟲害）;蒸餾水;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），無水乙醇（分析純，天津市天力化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20210302）;硝酸鈉，硝酸鋁（分析純，中國(guó)上海振欣試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：20080402）;氫氧化鈉（片）（分析純，天津奧普升化工有限公司，批號(hào)：20201015）。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1黃酮類化合物含量測(cè)定

2.1.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mg，使用濃度為60%的乙醇溶液將其溶解，定量轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中，將溶液稀釋至刻度值后搖勻，配置成為質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

吸取上述配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0 mL，1.0 mL，2.0 mL，3.0 mL，4.0 mL，5.0 mL分別置于6個(gè)10 mL的具塞試管中搖勻。分別在6個(gè)試管中，先加入5%硝酸鈉0.5 mL，搖勻后靜置6 min，再加入10%硝酸溶液0.3 mL，搖勻后靜置6 min，最后加入4% 氫氧化鈉溶液4.0 mL，使用60%乙醇溶液，定容至10 mL，放置15 min。將加入0.0 mL蘆丁的溶液設(shè)置為空白對(duì)照組。采用紫外可見分光光度計(jì)，在波長(zhǎng)為516 nm處測(cè)定這六組標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。用Microsoft Excel軟件來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，縱坐標(biāo)為吸光度，橫坐標(biāo)為濃度，得出線性回歸方程。

2.2測(cè)量市售銀杏葉黃酮類化合物含量

2.2.1提取市售銀杏葉中黃酮類化合物的方法

稱取干燥的銀杏葉粉末（過80目篩）3 g，精密稱定，各取平行3份，置于250 mL玻璃具塞三角瓶中，按料液比（1：7）[12]加入21 mL無水乙醇，在超聲功率為500 W的條件下提取60 min后過濾，濾液備用。

2.2.2不同濃度乙醇溶液提取市售銀杏葉黃酮類化合物

改變乙醇濃度為50%、60%和70%，按照2.2.1方法提取市售銀杏葉黃酮類化合物。

2.2.3測(cè)量市售銀杏葉黃酮類化合物含量

分別吸取2.2.1和2.2.2的濾液，按2.1.2中的步驟操作，然后測(cè)定在510 nm條件下提取液的吸光值，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算其產(chǎn)率，選擇提取率最高的方案。

2.3測(cè)量自摘銀杏葉黃酮類化合物含量

采用超聲輔助乙醇法提取自摘銀杏葉黃酮類化合物，操作方法同2.2。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1蘆丁標(biāo)樣測(cè)定數(shù)據(jù)分析

根據(jù)2.1.2方法測(cè)定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度，得到表1的數(shù)據(jù)。

由Microsoft Excel繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖1），其回歸方程為：y=1.1571x+0.0154，R²=0.9935。

3.2黃酮類化合物含量測(cè)定結(jié)果

3.2.1不同乙醇濃度提取市售銀杏葉黃酮類化合物的結(jié)果

根據(jù)2.2.3方法測(cè)定市售銀杏葉黃酮類化合物的含量，得到表2的數(shù)據(jù)。

結(jié)果：70%濃度水平的乙醇溶液提取量最強(qiáng)，提取率可達(dá)0.340%。

3.2.270%乙醇提取市售銀杏葉與自摘銀杏葉黃酮類化合物的結(jié)果

根據(jù)3.2.1的結(jié)論，采用2.3實(shí)驗(yàn)方式進(jìn)行市售銀杏葉與自摘銀杏葉黃酮類化合物含量測(cè)定。得到表3的數(shù)據(jù)。

結(jié)果：由表3可知，用溶劑為70%乙醇分別提取兩種銀杏葉，市售銀杏葉比自摘銀杏葉的黃酮類化合物含量高，其最高提取率為0.345%。

4結(jié)論

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果知，在1：7的料液比、500 w的超聲功率、60 min超聲時(shí)間情況下，70%的乙醇溶液提取陜西省西安市市售的銀杏葉得到的黃酮類化合物含量較高。自摘銀杏葉的黃酮含量低可能與其生長(zhǎng)環(huán)境和采摘時(shí)間等因素有關(guān)，我們采摘銀杏葉的時(shí)間為九月，采摘的銀杏葉已經(jīng)有部分發(fā)黃，雖然在打粉前將發(fā)黃葉片剪去，但是與市售的銀杏葉對(duì)比，自摘的銀杏葉黃酮類化合物含量少。

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