動物疫苗生產用的新生牛血清管理策略

李世明　胡燕杰　張麗

摘? 要：新生牛血清屬于疫苗、診斷試劑、單抗的重要原料以及各類血液制品生產用的重要原輔材料，其具備細胞培養、疫苗制備期間所需的各類必需的天然成分。在現代畜牧業迅速發展的同時，不同區域間的動物流動性有所提升，這也導致動物的患病概率逐漸增大。在此背景下，對動物疫苗生產用的新生牛血清管理策略展開研究尤為重要。基于此，本研究從新生牛血清質量的重要性出發，指出了在新生牛血清生產管理期間出現的問題，并科學探討了管理策略，以加強對新生牛血清在動物疫苗生產中的質量控制。

關鍵詞：動物疫苗;新生牛血清;管理策略

中圖分類號：Q813.11+R392-33 文獻標志碼：B 文章編號：1001-0769（2022）04-0080-05

近些年來，隨著各類動物疾病的發病率不斷提高，諸如禽流感、布氏桿菌病、口蹄疫、非洲豬瘟等疫病，這對動物的健康構成了嚴重威脅，在此背景下，也使畜牧業受到不小的經濟損失。因此，加強對動物重大疫病的預防和管控已經勢在必行，制備相應的動物血清屬于開展實驗室診斷的基礎，以新生牛血清為例，其屬于動物疫苗生產期間細胞培養基中的重要成分，只有添加相應比例的血清成分，才能夠為細胞生長提供所需的激素及生長因子[1]。現階段，市場上使用的新生牛血清產品較為繁多，總體上具有質量差異大、來源廣泛、檢驗方式落后等問題，對后續動物疫苗的生產帶來不利影響，這也導致新生牛血清的應用效果、動物來源的安全性存在隱患。因此，探討強化對動物血清制備的質量控制極為關鍵。

1? 新生牛血清質量的重要性分析

牛血清采自新鮮的牛血液，在經過自然層析、離心后可得到去除了血細胞、纖維蛋白的淡黃色透明的上清液。上清液的這種制作方式主要目的是提供基本營養物質、激素和各種生長因子、結合蛋白、促接觸和伸展因子，使細胞貼壁免受機械損傷，對培養中的細胞起到某些保護作用。牛血清屬于一種淺黃色澄清、無溶血、無異物，稍黏稠的液體，含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質對促進細胞的生長或抑制生長活性起到生理平衡作用。在進行細胞培養時，必須確保新生牛血清的質量，基于牛血清的相關成分，要明確其對細胞所產生的影響。其中，結合動物血清的應用狀況，以新生牛血清較為常見，它可以在組織培養、細胞培養中發揮重要作用[2]。

在醫學科學研究不斷進步的前提下，對細胞培養所用的血清質量提出了更為嚴格的要求，實踐階段更加重視相應材料的質量標準，遵循《中華人民共和國藥典》通則3604新生牛血清檢測要求。在對新生牛血清檢測期間，要關注pH、滲透壓、摩爾濃度、蛋白質含量、血紅蛋白、細菌內毒素等方面的檢查，基于《中華人民共和國獸藥典》（簡稱《中國獸藥典》）中“新生牛血清”規定，pH在7.00～8.50、滲透壓在250～330 mOsmol/kg、總蛋白含量在35～50 g/L、血紅蛋白≤200 mg/L、內毒素≤10 EU/mL;在實施無菌檢測、支原體檢測時，需滿足陰性標準;執行病毒檢測時，不得檢出牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛腺病毒（bovine adenovrus，BAV）、牛細小病毒（bovine parvovirus，BPV）、牛副流感病毒3型（bovine parainfluenza virus type 3，BPIV3）、牛呼腸病毒（bovine reoviruses，BReV）、牛輪狀病毒（bovine rotavirus，BRV）[3]。此外，新生牛血清能夠為細胞增殖提供養分，在診斷試劑方面也有用武之地，例如，針對近些年來出現的非洲豬瘟病毒、新型冠狀病毒等，可以為對應病毒的各類體外診斷試劑盒生產提供幫助。需要注意的是，針對國內外牛血清的質量標準，在實際應用期間存在差異，國內外牛血清質量標準對比見表1。

2? 動物疫苗生產用的新生牛血清管理時出現的問題

基于“全國新生牛血清質量管理研討會”的會議精神，相關管理部門明確了我國牛血清生產企業的現狀和未來的發展要求，并對《全國牛血清生產企業達標檢查手冊》進行修訂。調查發現，當前市場上應用到的新生牛血清來源并不固定，質量也處于參差不齊的狀態，加上不同批次的質量、檢測方法等存在明顯的差異，均會對動物疫苗的生產質量帶來嚴重影響[4]。在較為嚴重的情況下，甚至會由于產品污染、質量不佳而導致實驗不合格，會極大程度上增加生產成本，對動物疫苗質量構成威脅。因此，有效控制新生牛血清的質量、保證應用效果已經成為解決動物疫苗安全問題的關鍵。

2.1 新生牛血清的來源廣泛且質量差異大

結合應用狀況，發現現階段使用的新生牛血清主要來自農場或者奶牛場淘汰的公牛牛犢，受限于地域環境、采集時間、采集方法等，最終獲得的新生牛血清質量存在較大差別[5]。即使是同一農場，每頭牛的健康狀況也并不相同，在缺乏健康診斷及健康追溯的條件下，難以保證新生牛血清的質量。此外，針對新生牛血清供應、采集多應用“初制血清”，對應的地點、范圍并不固定，這在某種程度上表明國家監管部門很難對其實施統一化管理，增大了血清采集規范化執行的難度。另外，新生牛血清原料的供應商整體上暴露出雜、亂、差的特點，并且缺乏嚴謹的質量控制、監測等作為支持，加上生產人員技術能力不足、設備配置簡單等，均會對質量控制造成負面干擾。

2.2 新生牛血清的生產質量控制難度較大

第一，生產方式落后且操作不規范。整個過程較為粗放，所用設施設備較為簡單，也難以保證該區域環境的整潔度。即使在采用自動灌裝的條件下，也可能導致新生牛血清被微生物所污染。第二，新生牛血清的批次差異大。由于其采集源頭較為廣泛，并且獲得的血清成分明顯存在差別，不同批次甚至是相同批次的血清所具有的特征也具有誤差，其最終能夠維持或促進細胞生長的效果存在差異。有時，生產廠家為了提高利潤，可能會將不同批次的血清簡單混合，這也會呈現出血清質量存在明顯差異的狀況，增大了對動物疫苗生產質量控制的難度。第三，有關新生牛血清質量檢驗項目并不完善。針對牛血清供應的廠家而言，其中不乏有小型企業，這些企業沒有過硬的實力，配備的檢測設備并不完善，且很難控制新生牛血清的源頭質量。第四，傳染源的檢測手段相對落后。由于對傳染源的檢測方式偏于落后，導致牛血清的供應商很難及時診斷出血清中是否存在相關的病毒性抗體，這也對后期動物疫苗生產帶來隱患。第五，偶然存在的造假情況。在涉及到經濟效益時，有些商家為了降低對應的生產成本，不惜采用以次充好的手段，這也明顯降低了新生牛血清的質量。同時，在實際使用期間，還可能存在相應標簽和質量不符合的狀況。

2.3 使用新生牛血清時缺乏對供應商進行管理與檢測

第一，在采購新生牛血清時，部分企業更加注重從價格的低廉性出發，通常會對質量有所忽視。涉及到對供應商的檢測與控制時，主要停留在早期階段的物料檢驗過程，未曾對生產期間的質量加以控制。在具體實踐期間，很難及時、精確地掌握對應廠家的血清采集過程，甚至包括源頭、生產質量監測都未曾進行了解與監督，對相關物料的質量管理表現為被動性特點[6]。第二，當前企業會按照《中華人民共和國生物制品原輔料質量標準規程》來執行，但涉及到的對應質量標準屬于質控的最低標準，如果企業直接將其視作依據，就可能會出現新生牛血清管理質量不嚴格的問題，這也反映出企業可能存在缺乏完善性內控質量標準的情況。第三，部分新生牛血清的檢測周期較長，有關檢測項目較為復雜，導致成本偏高。因此，企業為了降低所需費用，就可能會故意減少需檢測的項目，在此條件下，就難以滿足檢測的完善性需求，無法對關鍵環節實施嚴密把控。

3 動物疫苗生產用的新生牛血清管理策略

3.1 提升行業監管力度，保證新生牛血清的生產、銷售及使用均滿足規范

在具體操作中，需要加強對新生牛血清的生產管理，從系統化、規范化建設方面出發，保證監管控制的合理性與有效性。同時，維持好新生牛血清市場，在經過全面檢查且滿足最終的資格條件后，才能向其發放對應的資格認證書。最終，生產新生牛血清的廠家只有獲得相應的生產許可證、產品文號以后才有資格實施對新生牛血清的采集、生產與銷售。

3.2 積極提高對新生牛血清采集源頭的質量? 管控

從源頭層面出發，重視對新生牛血清采集源頭的控制，對采集地點、范圍等予以確定，并按照相應法律法規要求，確保該采集區已經過獸藥監管部門的登記與審核，并滿足批準采集實施條件。同時，在對新生牛犢進行血清采集前，還需要經過健康統計與追溯調查，結合專業獸醫實施衛生檢疫的結果，最終判斷其是否滿足條件。只有上述條件均滿足，并經過完善化的檢疫流程、獲得相應的檢測結果后，才具備提供新生牛血清的條件。

3.3 嚴格落實新生牛血清的質量管理控制標準

研究發現，針對生產新生牛血清的廠家依舊存在未曾準確執行新生牛血清質控標準的情況，在具體操作過程中，為了盡可能降低成本，有時甚至可能省略部分項目的檢查，這必然會增加新生牛血清質量安全風險。因此，為了避免上述現象的發生，需要加強對其質量的監督，并制定出明確的處罰規定。在執行期間，以《中國生物制品規程》《中國生物制品主要原輔材料質控標準》為依據，加強對新生牛血清的質量管控。從國家層面出發，則應提升行業的監管力度，嚴格按照操作規范去落實對新生牛血清生產過程的監督與檢測。此外，在對新生牛血清展開研究時，要從其血清成分、是否存在病毒等方面出發，保證研究過程更為深入，不斷提升新生牛血清的質量，使其滿足國家質控標準要求。根據國內牛血清的質量標準，依據《中華人民共和國藥典》三部（2020版）通則（3604 新生牛血清檢測要求），對胎牛血清質量標準主要參考第九版《歐洲藥典》（EP 9.0）和《美國藥典》（USP 40）胎牛血清相關規定。在對牛血清進行檢測期間，包括以下項目：①理化檢測;②微生物檢測（細菌、真菌、支原體、噬菌體）;③病毒檢測;④細胞增殖檢測，保障血清品質[7]。以牛血清中的常見病毒為例，其檢測項目見表2。

3.4 科學構建供應商審核機制、規范對血清供應商的質量管控

對使用新生牛血清的企業而言，則結合企業實際情況，科學建立起更為嚴格的供應商管理機制，確保在選擇新生牛血清時做到有據可依。第一，在選擇和確定新生牛血清供應商時，要確保物料采購、生產部門、質量管理部門人員共同參與，完成篩選與審核。在對血清供應商進行審查時，從企業的生產能力、質量管理、人員配置、物料管理等多方面出發，保證該供應商足夠可靠且具備相關資質，并盡可能與之建立起長久性的合作關系。第二，在確定好供應商后，還需提前對相關樣品實施檢驗和試用。通常來講，企業可向新生牛血清生產廠家獲取不同批次的樣品，用以檢驗上述血清是否滿足質量標準，并依據最終的試用結果決定是否采購。第三，使用企業可優先向牛血清供應商提供自身所需標準，正常狀態下，企業自身使用的牛血清質量甚至要超過國家規定的標準，為了保證生產出來的新生牛血清滿足使用要求，應控制檢測、包裝儲存、運轉等各個流程的質量，積極消除生產及運送過程中存在的隱患。第四，對新生牛血清的生產廠家實施定期或者不定期的檢查，通過前往現場對工作環境進行監督考察，了解生產企業的質量保障體系，觀察生產記錄、質量標準是否按照規范執行，掌握客戶反饋意見的處理結果，并結合上述內容予以綜合性評估，以便實現優選供應商、確定合理的采購比例。

3.5 建立健全血清質量監測項目、保證檢驗流程的完善性

為了確保供動物疫苗生產所用的新生牛血清能夠滿足標準，要積極建立健全的血清質量監測項目，在操作期間嚴格遵從獸藥GMP的相關規定，確保隨機抽樣達到標準[8]。另外，從企業內部而言，還應當建立起內控質量標準，保證各檢測項目足夠完善。基于新生牛血清的檢驗，主要涉及到蛋白質含量、支原體、大腸桿菌等方面的檢測，并確保其擁有支持細胞增殖的能力。針對上述不同項目，可按照隨機抽樣方法分別檢查，不斷提高檢測水平并確保檢驗的規范性。此外，針對已放置一定時間的新生牛血清，在使用前通常要進行綜合性判斷，例如，先從外觀來判斷是否出現較多沉淀、血清過于渾濁等情況，若存在上述情況就應舍棄。若外觀檢測沒有問題，則還需要實施蛋白質變性檢測、振蕩后觀察液體變化等，有效確保檢驗流程的完善性，為動物疫苗生產提供安全支持。

4? 結語

綜上所述，在明確新生牛血清的重要性后，為了強化其質量控制，可以采用提升行業監管力度，保證新生牛血清的生產、銷售及使用均能夠滿足規范，積極提高對新生牛血清采集源頭的質量管控，嚴格落實新生牛血清的質量管理控制標準，科學構建供應商審核機制、規范對血清供應商的質量管控，建立健全的血清質量監測項目、保證檢驗流程的完善性等方法，充分確保新生牛血清質量滿足要求，為動物疫苗生產帶來幫助。

參考文獻

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[8] 馬春英，王美皓，馬花，等.不同批次新生牛血清對CHO細胞培養效果的研究[J].西北民族大學學報（自然科學版），2021，42（2）：67-73.