蜂蜜中氯霉素殘留檢測(cè)研究進(jìn)展

王巖

摘 要：氯霉素是一種抗菌性能良好的廣譜抗生素，但因其毒副作用嚴(yán)重，已被各國禁止在動(dòng)物源性食品中使用，近年來蜂蜜中氯霉素殘留超標(biāo)情況屢見報(bào)道，可見蜜蜂養(yǎng)殖過程中氯霉素非法使用的現(xiàn)象仍然存在。基于此，本文綜述了蜂蜜中氯霉素殘留的檢測(cè)方法及其研究進(jìn)展，著重介紹了酶聯(lián)免疫法、色譜和質(zhì)譜聯(lián)用法等，對(duì)其優(yōu)缺點(diǎn)和發(fā)展趨勢(shì)進(jìn)行了展望，旨在為蜂蜜中氯霉素殘留檢測(cè)方法的選擇和運(yùn)用提供參考。

關(guān)鍵詞：蜂蜜;氯霉素;殘留;檢測(cè)方法

Research Progress on Residue Analysis of Chloramphenicol?in Honey

WANG Yan

（Baoji Food and Drug Inspection and Testing Center， Baoji 721000， China）

Abstract： Chloramphenicol is a broad-spectrum antibiotic with good antibacterial properties. However， because of its serious toxic and side effects， chloramphenicol has been forbidden to be used in animal-derived food in many countries. In recent years， there are many news about chloramphenicol residue in honey. It suggests that the illegal use of chloramphenicol in bee farming industry still exists. Based on this， this article have summered the detection method and research progress of chloramphenicol residue in honey，such as immunoassays ， GC-MS， LC-MS， etc， And their advantages， disadvantages and development trends are prospected， in order to provide reference for the selection and application of chloramphenicol residue detection method in honey.

Keywords： honey; chloramphenicol; residue; detection method

蜂蜜作為一種天然的營養(yǎng)佳品，含有糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素等多種營養(yǎng)成分，不僅能夠補(bǔ)充日常所需營養(yǎng)，還能起到潤肺止咳、消積通便等作用，是一款老少咸宜的滋補(bǔ)品，越來越受到人們的青睞。

氯霉素是首次用化學(xué)合成法生產(chǎn)的廣譜抗生素，對(duì)于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌具有很好的抑制作用，由于其效高價(jià)廉，曾經(jīng)在獸醫(yī)臨床上被廣泛使用，用于治療和控制蜜蜂、家畜家禽、水產(chǎn)品養(yǎng)殖過程中的傳染性疾病[1]。近年來的研究表明，氯霉素在動(dòng)物體內(nèi)代謝緩慢，有抑制骨髓造血功能等危害[2]，毒副作用嚴(yán)重，因此各國已禁止氯霉素在動(dòng)物源性食品中使用。

1 蜂蜜中氯霉素殘留現(xiàn)狀及限量要求

近年來，隨著人們生活水平的提高，蜂蜜的需求量逐年增加，蜜蜂養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展已成規(guī)模，蜂蜜的品質(zhì)安全是該產(chǎn)業(yè)能否持續(xù)健康發(fā)展的決定性因素，而蜂蜜中氯霉素的殘留超標(biāo)情況已經(jīng)成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)[3]。

1994年，聯(lián)合國糧農(nóng)組織就禁止在食用性動(dòng)物養(yǎng)殖中使用氯霉素[4]，我國食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)要求蜂蜜中不得檢出農(nóng)獸藥殘留，中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第250號(hào)要求禁止在食品動(dòng)物中使用氯霉素。盡管如此，在蜂蜜中檢出氯霉素殘留超標(biāo)的現(xiàn)象仍然存在。2016—2019年，陜西省蜂蜜中氯霉素檢出陽性率為2.44%[5]。2016—2017年，云南省蜂蜜中氯霉素檢出陽性率為30.3%[6]。由此可見，蜂蜜中氯霉素殘留超標(biāo)情況不容忽視。

2 蜂蜜中氯霉素殘留檢測(cè)常見方法

目前，蜂蜜中氯霉素殘留檢測(cè)常見的方法有微生物法、免疫分析法、色譜法和其他新技術(shù)等。

2.1 微生物法

微生物法是利用氯霉素對(duì)特定菌株的抑菌作用來篩查食品中是否含有氯霉素的方法，常見的檢驗(yàn)方法有杯碟法、棉簽法、紙片法、瓊脂擴(kuò)散法等[7]。其中，棉簽法在實(shí)踐中應(yīng)用最為廣泛，方法是用棉簽蘸取動(dòng)物源食品樣本的組織液，將其放在涂滿枯草桿菌的培養(yǎng)基中保溫過夜，觀察四周是否出現(xiàn)抑菌圈，若出現(xiàn)則表明樣本中含有氯霉素殘留。該方法簡(jiǎn)便易行，耗時(shí)較短，但特異性和靈敏度較差，對(duì)所有的抗生素均有此反應(yīng)。杯碟法與棉簽法相比，能排除一些抗生素的干擾，如青霉素、土霉素等，特異性更強(qiáng)，靈敏度更高，檢出限可達(dá)0.25 mg·kg-1[8]。

2.2 免疫分析法

免疫分析法是一種利用抗原抗體特異性結(jié)合，且具有可逆性的氯霉素檢測(cè)方法，常見的檢測(cè)方法有酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫層析技術(shù)、放射免疫分析法等。

酶聯(lián)免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是檢測(cè)蜂蜜中氯霉素的主要分析方法，其原理是將氯霉素與大分子載體蛋白結(jié)合制成人工抗原，與抗體進(jìn)行特異性反應(yīng)，形成酶標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物，在酶的催化作用下，使底物水解產(chǎn)生一種有色物質(zhì)，根據(jù)特定波長下有色物質(zhì)吸光度和氯霉素濃度制成標(biāo)準(zhǔn)曲線來測(cè)定其含量的一種方法。劉桃[9]等以抗氯霉素單克隆抗體為抗原，氯霉素-辣根過氧化物為標(biāo)記物建立了直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定蜂蜜樣品中氯霉素，檢出限為0.15 ng·g-1，回收率在97.58%～100.94%，批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于11%，表明方法穩(wěn)定且準(zhǔn)確度高。

楊娟等[10]利用膠體金免疫快速檢測(cè)試紙條檢測(cè)蜂蜜中氯霉素殘留，整個(gè)過程只需25 min，準(zhǔn)確率高達(dá)99.5%。許勝男[11]等建立了磁固相萃取前處理和膠體金免疫層析試紙條聯(lián)用技術(shù)，檢測(cè)蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限為0.2 ng·g-1，不但降低了檢測(cè)成本，還具有操作簡(jiǎn)便、快捷等特點(diǎn)，具有良好的應(yīng)用前景。

陳小雪等[12]用放射免疫分析法檢測(cè)食品中氯霉素殘留量，最低檢測(cè)限為0.15 μg·kg-1，方法準(zhǔn)確、選擇性高。但因其具有明顯的放射性污染源，會(huì)對(duì)周圍的人員和環(huán)境造成危害，使用較為局限。

2.3 色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是利用不同的色譜柱，對(duì)樣品中的氯霉素殘留先分離后檢測(cè)的一種檢測(cè)方法，常見的有高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。

高效液相色譜法是以液體為流動(dòng)相，利用高壓輸液系統(tǒng)，使樣品在色譜柱中進(jìn)行分離后檢測(cè)的一種分析方法，具有靈敏度高、分離速度快、可靠性高等特點(diǎn)。徐麗艷[13]等用Oasis HLB固相萃取柱凈化，乙酸乙酯提取的方法，采用高效液相色譜法檢測(cè)蜂蜜中氯霉素殘留，檢測(cè)限為0.1 mg·kg-1。肖婉娜[14]等建立了高效液相色譜法檢測(cè)蜂蜜中氯霉素的方法，檢出限為0.625 μg·kg-1，在0.10～10.00 μg·mL-1線性關(guān)系良好。

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是以氣相色譜作為進(jìn)樣和分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)的一種分析方法，既具有氣相色譜法快速高效的特點(diǎn)，又能利用質(zhì)譜檢測(cè)器進(jìn)行定性鑒定和結(jié)構(gòu)分析，是一種比較成熟的分析方法。主要采用EI源（電子轟擊源）和NCI源（負(fù)離子化學(xué)源），其中NCI源氣相色譜質(zhì)譜法的檢出限可以達(dá)到0.1 μg·kg-1[15]。有研究表明，采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)蜂蜜中氯霉素，回收率可達(dá)83%～104%，檢出限為0.05 μg·kg-1，定量限為0.2 μg·kg-1[16]。

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是以液相色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)的蜂蜜中氯霉素殘留常見的檢測(cè)方法，也是食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18932.19—2003、GB 31658.2—2021等規(guī)定的蜂蜜、動(dòng)物性食品中氯霉素殘留法定的檢測(cè)方法，具有準(zhǔn)確度高、靈敏度高、選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)，常與固相萃取、分子印跡、QuEChERS等凈化方法聯(lián)用，以去除蜂蜜中的基質(zhì)干擾，提高檢測(cè)效率。于浩洋等[17]采用MCX固相萃取柱凈化，建立超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限為0.08 μg·L-1，回收率可達(dá)102.7%～105.6%。趙軍溪等[18]采用全自動(dòng)固相萃取超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限可達(dá)0.05 μg·kg-1。李正元等[19]建立了QuEChERS提取與高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中氯霉素殘留，解決了固相萃取法前處理過程中固相萃取柱堵塞的問題，在0.5～200.0 μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率可達(dá)81%～120%，簡(jiǎn)便快捷，靈敏度高。

2.4 其他新技術(shù)

表面增強(qiáng)拉曼散射法是一種新型的氯霉素檢測(cè)方法，其原理是利用吸附在粗糙金屬表面分子的拉曼散射信號(hào)可被放大這一特性，以金、銀、銅納米粒子等作為基底，檢測(cè)食品中的氯霉素殘留。孫文等[20]利用自聚合法合成的金納米粒子，將氯霉素分子通過氫鍵吸附在其基底上，優(yōu)化激發(fā)光波長，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蜂蜜中氯霉素分子的高靈敏度檢測(cè)，檢測(cè)限可達(dá)10-10 mol·L-1，回收率在88.00%～101.12%，方法快速簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確率高。

生物傳感器法又稱生物芯片法，是利用生物分子之間的相互反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為光信號(hào)、電信號(hào)等進(jìn)行檢測(cè)的一種方法。FERGUSON等[21]采用表面等離子共振生物傳感器法檢測(cè)蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限為0.02 g·kg-1。

毛細(xì)管電泳法是利用帶電組分在高壓電場(chǎng)中遷移效率不同而進(jìn)行分離的檢測(cè)方法。分離速度快，分析成本低，但測(cè)定低限較高，陳天豹等[22]采用毛細(xì)管電泳法結(jié)合紫外檢測(cè)器檢測(cè)蜂蜜中氯霉素殘留，回收率大于89.6%，但檢測(cè)限僅為10 μg·L-1，靈敏度較差，無法滿足低濃度氯霉素殘留的檢測(cè)。

3 結(jié)語

從近幾年對(duì)蜂蜜中氯霉素殘留檢測(cè)情況來看，盡管我國早已禁止在食用性動(dòng)物中使用氯霉素，但是仍在陜西、云南、深圳[23]等地蜂蜜中檢出氯霉素超標(biāo)，說明蜜蜂養(yǎng)殖業(yè)依然存在非法使用氯霉素的現(xiàn)象。目前隨著科技的進(jìn)步和檢測(cè)水平的提高，在蜂蜜和其他食品中氯霉素的檢測(cè)方法有很多，其中酶聯(lián)免疫法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是比較常見的幾種分析方法，也是食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的法定檢測(cè)方法，具有靈敏度高，準(zhǔn)確度好和回收率高等特點(diǎn)。但同時(shí)也存在一些不足，如酶聯(lián)免疫法容易出現(xiàn)假陽性，色譜質(zhì)譜聯(lián)用法前處理較為煩瑣，所需儀器成本較高。因此，在今后的研究中，應(yīng)重點(diǎn)克服和解決酶聯(lián)免疫法和色譜質(zhì)譜聯(lián)用法中存在的問題，以期建立一種簡(jiǎn)便高效、靈敏度高、使用成本較低的蜂蜜中氯霉素檢測(cè)方法。

參考文獻(xiàn)

[1]蔣定國，楊大進(jìn).動(dòng)物性食品中氯霉素殘留檢測(cè)技術(shù)的研究概況[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2002，14（2）：44-47.

[2]姚駿，李沛然，暴悅梅，等.動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留檢測(cè)研究進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā)，2014，35（4）：118-120.

[3]陳黎紅，張復(fù)興.新形勢(shì)下蜂業(yè)發(fā)展新思路-農(nóng)業(yè)部《全國養(yǎng)蜂業(yè)“十二五”發(fā)展規(guī)劃》解讀[J].農(nóng)業(yè)展望，2011，7（5）：39-43.

[4]莊無忌.各國食品與飼料中農(nóng)藥獸藥殘留大全[M].北京：中國對(duì)外經(jīng)濟(jì)貿(mào)易出版社，1995.

[5]劉青，梁曉聰，張巍，等.2016—2019年陜西省動(dòng)物源性食品中甲硝唑和氯霉素殘留狀況[J].衛(wèi)生研究，2021，50（6）：1019-1021.

[6]馬曉年，張秀清，陳俊秀，等.云南省市售蜂蜜中氯霉素和甲硝唑殘留檢測(cè)結(jié)果分析[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2018，9（14）：3665-3669.

[7]YAN C， ZHANG J， YAO L，et al.Aptamer-medi-ated colorimetric method for rapid and sensitive detection of chloramphenicol in food[J].Food Chemistry，2018，11（15）：124.

[8]焦彥朝，何家香，梅先芝.微生物檢定法測(cè)定鯉魚肌肉組織殘留氯霉素[J].中國飼料2000（5）：22-24.

[9]劉桃，韋倩妮，王弘，等.直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)蜂蜜中氯霉素殘留[J].食品科學(xué)，2018，39（16）：336-342.

[10]楊娟，曾欽微，趙洪木.蜂蜜原料中氯霉素和四環(huán)素族的快速檢測(cè)技巧[J].蜜蜂雜志，2018，38（10）：31-32.

[11]許勝男，余瓊衛(wèi)，袁必鋒，等.磁固相萃取與膠體金免疫層析試紙條聯(lián)用檢測(cè)食品中的氯霉素[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2016，32（4）：471-474.

[12]陳小雪，張林田，相大鵬，等.水產(chǎn)品中氯霉素殘留的放射免疫分析[J].檢驗(yàn)檢疫科學(xué)，2006，16（3）：19-21.

[13]徐麗艷.日本2002年度對(duì)進(jìn)出口蜂蜜中氯霉素的檢測(cè)分析方法[J].中國標(biāo)準(zhǔn)化，2002（8）：14.

[14]肖婉娜，何敏，陳怡佳.高效液相色譜法檢測(cè)蜂蜜中的氯霉素[J].農(nóng)產(chǎn)品加工，2018（6）：56-58.

[15]魏玲，李越，陳舜琮，等.蜂產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測(cè)方法的研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2013（4）：1095-1099.

[16]趙霞，王波，謝愷舟，等.動(dòng)物性食品中氯霉素類藥物殘留色譜和質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].分析實(shí)驗(yàn)室，2018，37（8）：978-985.

[17]于浩洋，祁珍禎，朱冰雅，等.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中氯霉素、氟甲砜霉素、甲砜霉素、甲硝唑[J].化學(xué)分析計(jì)量，2021，30（12）：63-68.

[18]趙軍溪.全自動(dòng)固相萃取-超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中的氯霉素[J].食品安全導(dǎo)刊，2021（3）：98.

[19]李正元，周杰.QEChERS提取與高效液相色譜-電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法快速檢測(cè)食品中氯霉素類物質(zhì)的殘留量[J].廣東化工，2020，47（18）：162-163.

[20]孫文，張芹，蘇倩倩.表面增強(qiáng)拉曼散射法檢測(cè)蜂蜜中氯霉素[J].食品科技，2017，42（9）：300-304.

[21]FERGUSON J，BAXTER A，YOUNG P，et al.Detection of chloramphenicol and chloramphenicol glucuronide residues in poultry muscle， honey， prawn and milk using a surface plasmon resonance biosensor and Qflex?kit chloramphenicol[J].Anal Chim Acta，2005，529（1/2）：109-113.

[22]陳天豹，鄧文漢，盧菀華，等.毛細(xì)管電泳法檢測(cè)蜂蜜中殘留的抗生素[J].色譜，2001，19（1）：91-93.

[23]楊東燕，王舟，周顥雋，等.2017年—2018年深圳市動(dòng)物性食品中氯霉素殘留水平調(diào)查研究[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2020，30（22）：2786-2788.