老年宮頸癌合并糖尿病患者細胞凋亡相關因子Fas和Bcl-2的表達及臨床意義

蘇峙宇 劉立紅 劉暢 陳方旭 艾浩 (錦州醫科大學附屬第三醫院,遼寧 錦州 121001)

宮頸癌是女性常見的一種惡性腫瘤，研究顯示，宮頸癌的發病率近年來也呈現上升趨勢〔1～3〕。糖尿病也是臨床上老年人發病較多的慢性疾病，患者需要時刻并長期控制血糖水平。宮頸癌合并糖尿病患者在進行治療時更需要時刻注意相關因子及指標是否達標，否則會對患者的生命安全、治療后生活質量產生嚴重影響〔4～7〕。Fas是一種跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族成員，與FasL組成的信號通路在細胞凋亡中起重要作用〔8，9〕。Bcl-2是一種膜整合蛋白，可以阻止細胞色素c從線粒體釋放到細胞質從而可以抑制細胞凋亡〔10〕。本研究旨在探討老年宮頸癌合并糖尿病患者細胞凋亡因子Fas、Bcl-2的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年6月至2021年6月錦州醫科大學附屬第三醫院收治的200例老年宮頸癌合并糖尿病患者為研究組，年齡60～87歲，平均(69.83±7.07)歲，平均體重(68.25±11.96)kg。納入標準：(1)自愿參加本次研究；(2)發現腫瘤前存在明確的糖尿病史，且由宮頸刮片細胞學檢查、陰道鏡檢查等確診為宮頸癌的患者；(3)血常規其他指數正常；(4)患者臨床資料齊全，具有正常的閱讀及溝通能力，能夠與醫護人員正常理解及溝通。排除標準：(1)存在重要臟器功能不全者；(2)存在自身免疫性疾病及其他部位惡性腫瘤者；(3)有精神疾病，無法進行正常溝通交流者；(4)發現宮頸癌后在治療過程中并發糖尿病者。選取同期在我院收治的186例老年宮頸癌患者(宮頸癌組)及進行健康體檢的201例女性健康人群(對照組)，平均年齡(70.52±7.03)歲，平均體重(66.08±13.16)kg。本研究中全部宮頸癌患者按照國際婦產科聯盟(FIGO)病理分期標準，其中宮頸癌組Ⅰ期40例，Ⅱ期65例，Ⅲ期68例，Ⅳ期13例，平均年齡(69.04±6.72)歲，平均體重(68.97±15.17)kg；研究組Ⅰ期37例，Ⅱ期73例，Ⅲ期81例，Ⅳ期9例；3組年齡、體重無統計學差異(P>0.05)。

1.2Fas、Bcl-2陽性水平檢測 免疫組織化學SP法，取各組宮頸組織，制成石蠟切片，切片于60℃干燥箱中烘干過夜，常規二甲苯脫蠟，梯度酒精入水，使用0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖液微波加熱進行切片的抗原修復，使用10%羊血清室溫孵育30 min，分別加入Fas及Bcl-2的抗體，4℃孵育過夜，隔日用1倍TBS洗滌3次，每次5 min，隨后加入對應二抗于37℃孵育1 h，隨后用1倍TBS洗滌3次，每次5 min，加入現配的二氨基聯苯胺(DAB)溶液，蘇木素復染1 min，用中性樹膠封片。本研究中以乳腺癌組織作為Fas、Bcl-2陽性對照，以正常宮頸組織作為陰性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS)為空白對照。結果判定標準：免疫組化染色以細胞質或細胞核染成黃色或棕褐色為陽性；判斷標準：每張切片選擇5個高倍視野(放大400倍)進行觀察，對染色深淺評分，無色或藍色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。計數每張切片中的陽性細胞數，每次計數200個，共計數3次，取平均值，按照顏色計算分值，陽性細胞比例≤5%為0分，6%～20%為1分，21%～50%為2分，≥51%為3分。按照陽性細胞分值與染色分值的乘積進行分類，0分為陰性(-)，否則為陽性。

1.3流式細胞技術測定細胞凋亡指數(AI) 取宮頸組織，置于盛有PBS的小燒杯內，使用眼科剪及眼科鑷將其反復剪碎及撕扯后過濾(160目尼龍網篩)制成單細胞懸液，通過細胞計數板調整細胞濃度為1×109cells/L。取1 ml單細胞懸液，離心后去上清，加入1 ml PBS重懸細胞，并重復離心去上清，使用70%乙醇4℃固定細胞1～2 h，隨后800 r/min，離心5 min，棄上清后使用PBS漂洗1次，離心去上清，加入50 μg/ml碘化丙啶(PI)1 ml，4℃避光染色30 min，用流式細胞儀檢測，計算AI。

1.4統計學方法 使用SPSS22.0統計學軟件進行t檢驗、χ2檢驗及方差分析。

2 結 果

2.1各組細胞凋亡因子Fas和 Bcl-2陽性表達水平比較 研究組、宮頸癌組中四期患者Fas、Bcl-2陽性率與對照組有顯著差異(P<0.001)。研究組整體Fas、Bcl-2陽性率與對照組陽性率差異顯著(χ2=136.643、132.717，均P<0.001)，與宮頸癌組有顯著差異(χ2=3.940、3.963，均P<0.05)，見表1。

2.2各組AI比較 3組AI有統計學差異(F=601.987，P<0.05)，其中宮頸癌組(6.15±3.05)顯著高于對照組(2.09±0.88；t=18.078，P<0.001)，但明顯低于研究組(9.56±2.06；t=12.951，P<0.001)。

表1 各組Fas、Bcl-2陽性率比較〔n(%)〕

3 討 論

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤之一，是女性癌癥死亡的主要原因之一，臨床表現為接觸性出血、陰道異常出血及陰道排液增多等癥狀。宮頸癌的發病高峰期一般在60周歲以上，老年婦女的性生活停止或減少，出現接觸性出血較少，即早期癥狀并不明顯，而確診時一般已處于中晚期〔1～3〕。宮頸癌治療常用的方法包括但不限于手術、放療、化療等綜合應用。但由于老年患者年齡偏大、機體抵抗力差、合并疾病多、手術范圍大等一系列原因使得手術風險增大〔2〕。糖尿病是一種多病因的代謝類疾病，其特征是高血糖。老年患者一般是2型糖尿病，即非胰島素依賴型糖尿病，患者仍然分泌一定量的胰島素，但其降低血糖的能力降低，機體對葡萄糖的利用能力隨著年齡也呈下降趨勢。糖尿病患者需要通過控制脂肪、糖等成分的攝入來穩定血糖水平，但合并宮頸癌患者，考慮其是一種消耗性疾病，不能對脂肪、糖進行過度限制〔4,5,7〕，因此對老年宮頸癌合并糖尿病患者血清的相關指標進行測定，有利于臨床上掌握對該類患者治療及護理條件〔5,6〕。

細胞凋亡又稱細胞程序性死亡，是一種與有絲分裂相反的方式調節細胞群體穩定的重要方式。細胞凋亡對腫瘤的發生、抗癌藥物的治療及細胞間信息傳遞同樣有重要作用。有研究表明當宮頸上皮細胞發生不典型增生時，也會伴隨細胞凋亡的增加，而宮頸癌患者AI減少，表明宮頸癌的發生發展與細胞凋亡之間有密切相關性〔14～17〕。隨著疾病的進展及細胞內相關基因表達的變化，細胞凋亡受到抑制，導致宮頸上皮細胞平衡被破壞，從而引發癌變。Fas與Bcl-2均在細胞凋亡及宮頸組織發生癌變的過程中發揮了重要作用〔9～13〕。

有研究表明糖尿病患者更容易并發癌癥〔18,19〕，本研究結果表明Fas、Bcl-2不僅參與老年宮頸癌發生發展過程，同時對宮頸癌組織細胞凋亡發揮一定影響作用，而Fas、Bcl-2在合并糖尿病的老年宮頸癌患者組織的細胞凋亡中參與度更高，但其具體機制還需要深入研究。