蘆薈復配茶多酚和維C 對小鼠免疫力的影響

申開澤，萬慶家，熊 宇，張應龍，劉 莎

（1. 昭通學院農學與生命科學學院，云南昭通 657000；2. 云南萬綠生物股份有限公司，云南玉溪 653300）

免疫是機體至關重要的保護性生理功能，可有效識別危險信號，抵御外來病原微生物的入侵并清除體內有害物質，最終維持自身內環境的穩定狀態。免疫力下降，機體的抵抗能力也將隨之降低，從而引發疾病[1-2]。藥食兩用中藥具有多靶點、多途徑、多層次免疫增強作用的優勢[3]，因此是開發增強免疫功能產品的重要原料。庫拉索蘆薈（Aloe veraL.），主要含多糖、蒽醌、有機酸、蛋白質、氨基酸和微量元素等成分，經大量動物功能試驗研究證明具有較好的增強免疫力作用，有效用量折算為人體用量基本為每天1.2~3.0 g（以干物質計，折算多糖含量約為0.12~0.30 g）[4-8]。綠茶中富含的茶多酚也具有明顯的增強免疫力作用[9-11]。維C 的增強免疫力功能也已得到動物試驗[12-13]和臨床試驗[14-16]證實，同時維C 還是可根據生產需要適量添加的抗氧化食品添加劑。庫拉索蘆薈與茶多酚聯合使用能預防小鼠酒精性肝損傷[17]，庫拉索蘆薈還能促進維C 在人體內的吸收[18]，茶多酚與維C 有較好的協同作用[19]。基于此，試驗以庫拉索蘆薈提取物、茶多酚和維C 為主要功能原料，以結晶果糖和羅漢果甜苷為輔料制成復配物，并探究其對小鼠免疫力的影響，以期為后續的開發利用提供基礎的藥效學資料。

1 材料和方法

1.1 試驗樣品

庫拉索蘆薈提取物（200∶1），云南萬綠生物股份有限公司提供；茶多酚（98%），江蘇德和生物科技有限公司提供；維C，東北制藥有限公司提供。3種功能原料復配結晶果糖和甜菊糖苷制成蘆薈茶多酚維C 復配物，口服推薦量為每日1 次，每次8 g（含蘆薈多糖0.15 g，茶多酚0.3 g，維C 0.1 g），折合體重劑量為0.133 g/kg·bw，（按60 kg 成人計）。

1.2 試驗小鼠

采用體重為18~22 g 的SPF 級ICR 雌性小鼠，共200 只，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。試驗期間的動物生存環境溫度為20~25 ℃，相對濕度為54%~58%。

1.3 主要儀器與試劑

MS-TS 型分析天平、722S 型分光光度計，梅特勒-托利多國際有限公司產品；BBS-SDC 型潔凈工作臺，山東博科科學儀器有限公司產品；離心機、二氧化碳培養箱、Multiskan FC 酶標儀，賽默飛世爾公司產品；顯微鏡，上海點應光學儀器有限公司產品。

綿羊紅細胞（SRBC），北京博爾西科技有限公司提供；生理鹽水，上海百特醫療用品有限公司提供；Hank's 液，武漢卡諾斯科技有限公司提供；RPMI1640 培養液，武漢普諾賽公司提供；青鏈霉素，賽默飛世爾公司提供；刀豆球蛋白A（ConA）、Giemsa 染液，美國Sigma 公司提供；小牛血清，北京百奧萊博公司提供；1%冰醋酸、1 mol/L 的HCl 溶液、0.1%的碳酸鈉、磷酸鹽緩沖鹽溶液（PBS 緩沖液） （pH 值7.2~7.4），0.2 mol/L 的Tris-HCl 緩沖液，實驗室配制；SA 緩沖液、雞紅細胞、補體（豚鼠血清）、MTT、 YAC-1 細胞、都氏試劑、瓊脂糖、2.5% Triton，上海源葉生物科技有限公司提供；酸性異丙醇、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶I、甲醇（分析純），廣東光華科技股份有限公司提供；印度墨汁，上海哈靈生物科技有限公司提供。

1.4 樣品劑量選擇和前處理

分別按人體推薦量的5 倍，10 倍和30 倍設0.67，1.33，4.00 g/kg·bw 3 個劑量組（低、中、高）。分別取復配物6.70，13.30，40.00 g，用蒸餾水配制至200 mL，即得。

1.5 試驗方法

參照《保健食品檢驗與評價技術規范（2003 版）》[20]，將小鼠平均分為A~E 5 個大組，A 組開展碳廓清試驗；B 組采用MTT 法開展ConA 誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗，進行NK 細胞的活性測試；C 組開展臟/體比值、半數溶血值（HC50） 和抗體生成細胞數測定；D 組采用足跖腫脹法進行遲發型變態反應（Delayed type hypersensitivity，DTH） 試驗；E 組開展小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗。每個大組隨機分為4 個小組（每組10 只），即3 個劑量組和1 個對照組。各小組按20 mL/kg·bw 對小鼠進行灌胃，對照組用等量的蒸餾水，每日1 次，持續30 d。數據轉化和統計分析采用Excel，SPSS 軟件進行。

2 結果與分析

2.1 復配物對試驗小鼠體重的影響

與對照組相比，5 個大組中的低中高各劑量組在試驗初期、中期和末期的小鼠體重及試驗期間體重增長，均無顯著性差異（p＞0.05），說明復配物對試驗動物體重及增長無明顯影響。

2.2 復配物對試驗小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響

復配物對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響見表1。

表1 復配物對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響（±s）/%

表1 復配物對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響（±s）/%

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由表1 可知，與對照組相比，各劑量對小鼠胸腺/ 體重比值和脾臟/ 體重比值無顯著性差異（p＞0.05），說明受試物對試驗小鼠的免疫器官臟器/體重比值無明顯影響。

2.3 復配物對試驗小鼠細胞免疫功能的影響

復配物對小鼠淋巴細胞增殖能力和遲發型變態反應能力的影響見表2。

表2 復配物對小鼠淋巴細胞增殖能力和遲發型變態反應能力的影晌（±s）

表2 復配物對小鼠淋巴細胞增殖能力和遲發型變態反應能力的影晌（±s）

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由表2 可知，以足跖腫脹法進行的小鼠遲發型變態反應能力試驗結果表明，l.33 g/kg·bw 和4.00 g/kg·bw劑量組的小鼠足跖腫脹度與對照組相比具有顯著性差異（p＜0.05），表明復配物具有增強小鼠細胞免疫的功能。但復配物各劑量組的OD（optical density）差值與對照組相比無顯著性差異（p＞0.05），說明復配物不能明顯改善小鼠淋巴細胞增殖能力。

2.4 復配物對小鼠體液免疫的影響

復配物對小鼠抗體生成細胞數和HC50的影響見表3。

由表3 可知，采用Jerne 玻片改良法進行小鼠抗體生成細胞數檢測，結果表明，高劑量組的溶血空斑數與對照組相比具有顯著性差異（p＜0.05）。該劑量組的小鼠半數溶血值（HC50） 與對照組比較也顯著提高（p＜0.05）。2 項試驗結果綜合說明復配物能顯著增強試驗小鼠的體液免疫。

表3 復配物對小鼠抗體生成細胞數和HC50 的影響（±s）

表3 復配物對小鼠抗體生成細胞數和HC50 的影響（±s）

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2.5 復配物對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響

復配物對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清和對雞紅細胞吞噬率的影響見表4。

表4 復配物對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清和對雞紅細胞吞噬率的影響（±s）

表4 復配物對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清和對雞紅細胞吞噬率的影響（±s）

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由表4 可知，小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能影響試驗以吞噬指數（a） 來表示復配物對碳廓清能力，與對照組比較，復配物各劑量組吞噬指數統計均無顯著性差異（p＞0.05）。同樣，小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗也顯示，各劑量組的吞噬率和吞噬指數與對照組相比也無顯著性差異（p＞0.05）。結果表明，復配物不能明顯增強腹腔巨噬細胞的吞噬功能。

2.6 復配物對小鼠NK 細胞活性的影響

復配物對小鼠NK 細胞活性的影響見表5。

表5 復配物對小鼠NK 細胞活性的影響（±s）

表5 復配物對小鼠NK 細胞活性的影響（±s）

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由表5 可知，各劑量組NK 細胞活性均高于對照組，并隨劑量增高呈一定的遞增關系，中、高劑量組與對照組比較有顯著性差異（p＜0.05），表明復配物有顯著提高小鼠NK 細胞活性的作用。

3 結論

以小鼠為對象全面開展蘆薈茶多酚維C 復配物的增強免疫力功能動物試驗。結果表明，與對照組比較，連續30 d 每天一次經口灌胃給予小鼠0.67，1.33，4.00 g/kg·bw 劑量的復配物，各劑量對小鼠體重增長、胸腺/ 體重比值、脾臟/ 體重比值無顯著影響，說明樣品對小鼠體重和免疫器官無明顯影響；同時，1.33，4.00 g/kg·bw 劑量能顯著提高小鼠遲發型變態反應能力和NK 細胞活性（p＜0.05），4.00 g/kg·bw 劑量能顯著提高抗體生成細胞數和小鼠半數溶血值（p＜0.05）。體液免疫功能和NK 細胞活性呈陽性，根據判斷標準[20]，可以判定庫拉索蘆薈提取物復配茶多酚和維C 具有增強免疫力功能。為以庫拉索蘆薈、茶多酚和維C 為功能原料進行增強免疫力功能保健食品的開發提供了理論和試驗基礎。為了進行相關產品的開發，后續開展體外機制研究、體內藥理學十分必要，還應開展多中心、大樣本的隨機對照人體試食研究，以進一步確證其功能。