奶水牛分娩前后血漿瘦素及抗氧化等指標的變化及意義

畢方方，唐陽國，方治山，何寶祥，杜玉蘭

（1.廣西大學行健文理學院，廣西南寧 530005；2.廣西大學動物科技學院，廣西南寧 530005；3.廣西畜牧研究所，廣西南寧 530001）

奶水牛分娩是一個非常重要的生理活動，從此開始泌乳，奶水牛在此后數周內經歷物質代謝的巨大挑戰。雖然奶水牛分娩前后的血液生化指標動態變化研究已有少量報道（劉明江等，2011；杜玉蘭等，2010；韋志堅等，2010），而瘦素（LEP）和氧化/抗氧化指標動態變化的報道較少（BAN-TOKUDA等，2006），因此，為了積累奶水牛分娩前后健康檢查或疾病診斷資料開展以下試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 試驗選擇南寧市某規模化奶水牛養殖場預產期前1～2周的11頭摩拉水牛，3～11歲，2～6胎次，由相同飼養員在半開放式牛舍和圍欄運動場內飼養，每天喂飼料2次、擠奶2次，自由飲水，保持牛舍干凈、衛生環境良好。飼料使用干奶期過渡料和產后全價料。

血樣采集：采血從分娩前1周開始[（產前7±3）d]到產后6周，每周1次，共采8次。清晨采食前保定，尾靜脈采血，血樣置于盛有肝素鋰抗凝劑的10 mL試管內，分離血漿，分裝EP管密封，-80℃低溫冰箱保存，試驗結束后立即檢測。

1.2 檢測試劑盒與方法 牛LEP檢測試劑盒購自武漢默沙克生物科技有限公司，檢測方法為ELISA法。總抗氧化能力（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）、超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（TAC）和丙二醛（MDA）檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。各指標檢測方法嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計分析 試驗數據采用SPSS軟件19.0進行方差分析，用一般線性模型重復測量法分析各周間的差異顯著性，用Excel作圖顯示動態變化曲線；采用Pearson法分析被檢指標間的相關性。P＜0.05表示組間差異顯著，P＜0.01表示組間差異極顯著。

2 結果

2.1 平均值檢測 LEP、CAT、GPX、SOD、TAC和MDA的檢測結果見表1，包括極小值、極大值、平均值、標準差和變異系數。

表1 奶水牛產前1周至產后6周LEP等指標的血漿含量（n=88）

2.2 動態變化 由圖1可知，LEP從產前1周到產后2周內出現1次波峰，然后出現次波峰；TAC從產前1周到產后3周出現1次波峰，然后出現次波峰（圖1A）。MDA與CAT先降后升，低谷分別出現在產后1周和產后3周；產后5周分別接近或達到峰值（圖1B）。GPX的變化似“U”型，低谷在產后3周，而SOD的變化與TAC的相似（圖1C）。日產奶量在產后2周內迅速上升，此后上升幅度很小，漸趨于穩定，見圖1D。各指標的血漿水平在時間點之間均有顯著差異。

圖1 奶水牛分娩前后各指標血漿水平（11頭）

2.3 相關性 本試驗88份血樣中未發現LEP與其他指標間有顯著相關性。在其余指標中，SODTAC（r=0.332，P ＜ 0.002）、CAT-GPX（r=0.370，P ＜ 0.000）間存在正相關，MDA-SOD（r=-0.363，P＜0.001）間存在負相關。

3 討論

LEP是一種主要由脂肪細胞分泌的多肽類激素，具有調節能量分配、采食，影響繁殖、免疫等多種功能，檢測血漿LEP水平具有諸多臨床意義。本試驗檢測了11頭奶水牛分娩前后的血漿LEP水平，發現其平均值（1.26 ng/mL）接近以前水牛的報道值（2.14 ng/mL）（杜玉蘭等，2012），但遠低于另一報道的血清水平（5.14～25.24 ng/mL）（李恭賀等，2011）。國外對水牛的報道較少，Ban-Tokuda（2007）報道，血漿水平在2～ 25 ng/mL之間（BAN-TOKUDA 等，2006）。

試驗發現，體況較差的奶牛產后早期LEP水平也會出現與體況不一致的升高（“虛高”），它并不代表此時奶牛的脂肪量突然增加，而可能是一種促進脂肪動員的緊急信號，此期LEP水平異常升高，將促進體脂動員，導致采食量下降，發生酮?。℉EB等，2018）。但水牛分娩前后血漿LEP水平的動態檢測尚未見到報道。本試驗報道了奶水牛分娩前后血漿LEP的變化特點，發現其在分娩前1周至產后6周內略呈下降趨勢，期間出現2次較大波動（“虛高”）。根據研究經驗看，這些波峰可能是體內能量急缺的信號，要求此時體脂急速動員，以保持體內能量平衡。我們曾做過水牛分娩前后血脂（韋志堅等，2010）、血糖與酮體等指標的動態檢測，結果發現，奶水牛產后1周時血糖水平最低（杜玉蘭等，2010），結合本試驗產奶量變化認為水牛產后2周內能量急缺。

在本試驗檢測的氧化與抗氧化指標中，MDA作為脂質過氧化產物，其水平在產后1周最低（圖1B），此后開始升高，這可能與奶水牛啟動泌乳、促進體脂動員、非酯化脂肪酸（NEFA）氧化、過氧化產物積累有關。在廣西奶水牛產后主要脂類指標的動態監測中發現，血漿NEFA水平分娩當天開始下降，產后1周時最低，然后波浪式上升至產后第7周達頂峰，之后下降（杜玉蘭等，2012），此時的血脂低水平可能與MDA低有關。此外，是否是奶水牛啟動泌乳時首先消耗血液中的NEFA，待其降低后再進行體脂動員，這種情況有待繼續研究。試驗期間，TAC、GPX、SOD和CAT血漿水平均在產后3周達最低值，之后逐漸升高，說明產后3周內機體儲存的抗氧化酶等被急劇消耗，然后經過機體適應性調節、產后采食量增加，此后抗氧化水平逐漸升高。本試驗表明，奶水牛產后3周時抗氧化水平最低，提示此時的抗病力最弱，我們推測此時間點在不同水牛群也許有遲有早，也應該是水牛產后的共同特征，有待以后繼續研究。

本試驗未發現LEP與其他指標間有顯著相關性，Pradeep（2016）發現，水牛精漿中LEP與MDA水平呈正相關，也未發現LEP與抗氧化指標的相關性。本試驗發現，奶水牛血漿SOD與MDA負相關，與TAC正相關，也在我們預想之中。CAT與GPX間存在顯著正相關，因為它們均屬抗氧化酶，以不同機理擔負著抗氧化功能，反應出它們之間的聯系比較緊密；SOD與TAC聯系的更緊密也說明抗氧化酶SOD活性越高，機體總抗氧化能力就越強，這也符合一般共識。該試驗提示，奶水牛分娩后隨著泌乳、代謝改變，氧化與抗氧化物質處在動態博弈中，增加抗氧化能力，提供合成這些抗氧化酶的營養物質十分必要。

本試驗動態檢測了奶水牛分娩前后血漿LEP和部分氧化、抗氧化指標水平，發現其動態變化特征和部分指標間的相關性，這些檢測數據對判斷奶水牛產后健康狀況有一定的參考意義，也為奶水牛分娩和產后能量代謝研究、產后飼養管理提供參考依據。