屠宰場犬新孢子蟲和弓形蟲的感染情況調查

王英華 ， 靳 冬 ， 楊玉榮

(1.河南省動物疫病預防控制中心 河南省重大動物疫病監測預警及防控重點實驗室 ， 河南 鄭州 450008 ； 2.河南農業大學牧醫工程學院 ， 河南 鄭州 450000)

犬新孢子蟲和弓形蟲是呈世界性分布的重要寄生蟲[1]。犬是犬新孢子蟲的主要終末宿主，可以排泄出對環境有抵抗力的卵囊。犬新孢子蟲是導致牛流產的重要原因[2-3]。弓形蟲病屬人獸共患病，由于犬與人及貓的關系密切，因此犬弓形蟲病的感染情況可以反映當地弓形蟲病的流行特點。犬可以通過吞食被弓形蟲卵囊污染的泥土，或采食含弓形蟲包囊的生肉而感染弓形蟲。犬還可以經機械傳播途徑將弓形蟲卵囊傳染給人類[4]。

目前，我國寵物犬的弓形蟲血清學流行率為11.1%[5]，尚未從犬的組織中分離到弓形蟲。青海(31%，25/80，牧羊犬)、烏魯木齊(17%，5/29，寵物犬)、黑龍江(20%，95/476，鄉村犬)和河南(9%，7/78，牛場犬)均有關于犬感染犬新孢子蟲的報道[6-9]。本試驗旨在了解吉林、河南、安徽三省犬新孢子蟲和弓形蟲的血清流行病學情況，并分離弓形蟲。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 吉林、河南、安徽三省的屠宰場采集425份犬心臟(表1)，收集心臟血液樣品，分離血清。第1批樣品(96份)采集于2013年10月份，第2批樣品(329份)采集于2014年4月份。

1.1.2 試劑 改良凝集試驗(Modifiedagglutination test，MAT)和犬新孢子蟲凝集試驗(Neosporaagglutination test，NAT)抗原，均由美國農業部J.P.Dubey課題組贈送。

1.2 方法

1.2.1 血清學檢測 采用MAT[10]檢測425份犬血清樣品中的弓形蟲抗體。采用NAT[11]檢測96份血清樣品中的犬新孢子蟲抗體。所有標本以1∶25效價作為2種寄生蟲的最低陽性判斷閾值，分別以1∶25、1∶50、1∶100、1∶200的稀釋倍數來檢測血清抗體。另外，弓形蟲補充1∶10的稀釋度。

1.2.2 動物接種試驗 從第1批樣品中選取弓形蟲抗體陽性(MAT≥10)心臟(n=14)，取心肌50 g(小犬心臟取30 g)分別用胃蛋白酶消化，并用小鼠做生物學測定[9]。主要操作步驟：組織用生理鹽水沖洗后勻漿，與鹽酸胃蛋白酶溶液混合，37 ℃消化60 min，皮下注射5只小鼠(含2只IFN-γ基因敲除小鼠)，所有接種小鼠正常飼養并每天觀察癥狀。死亡或發病小鼠，取肺臟進行涂片檢測弓形蟲速殖子。未出現癥狀的小鼠于接種后41 d采血通過MAT(1∶100稀釋度的血清)檢測弓形蟲抗體。所有接種小鼠于接種后48 d進行安樂死，取腦組織做壓片，檢測腦組織中是否有弓形蟲包囊[12]。

2 結果

96份樣品中檢測出6份犬新孢子蟲陽性樣品，占6.25%；其中2份樣品滴度為1∶25，3份滴度為1∶50，1份滴度為1∶100，并且所有陽性樣品的犬年齡都在1歲以上(P<0.05)。6份陽性樣品均來自吉林的43份樣品(占13.9%)，而河南和安徽的53份樣品中沒檢測出陽性抗體(P<0.05)(表1)。

425份樣品中檢測出弓形蟲陽性的樣品共35份(占8.24%)，其中15份樣品滴度為1∶25，14份滴度為1∶50，6份樣品滴度為1∶100，未檢測出滴度為1∶200及以上的樣品(表1)。35份陽性樣品中34份陽性樣品的犬年齡都在1歲以上(P<0.05)，且均來自吉林(P<0.05)。3.13%(3/96)的樣品存在犬新孢子蟲和弓形蟲犬交叉感染。14份弓形蟲陽性心肌樣品，未觀察到弓形蟲包囊或住肉孢子蟲包囊，接種小鼠后，小鼠未呈現弓形蟲感染的臨床癥狀，血清抗體呈現弓形蟲抗體陰性，未分離出弓形蟲活蟲株。

表1 吉林、河南和安徽三省屠宰犬犬弓形蟲和犬新孢子蟲的血清流行病學調查

3 討論

先天性傳播、采食含有病原的組織器官和吞食卵囊是感染犬新孢子蟲病的3種途徑。犬先天性感染犬新孢子蟲病少見報道，多數犬是在出生后感染的，而且年齡大的犬陽性率高于幼齡犬[1,13]。本調查中6份犬新孢子蟲陽性樣品均來自吉林(均>1歲)，而河南和安徽的樣品中沒檢測出陽性抗體，可能與來自這兩省的犬年齡大多數<1歲有關(有53份樣品，其中<1歲的犬有50只)。關于犬吞食犬新孢子蟲卵囊而感染犬新孢子蟲病的報道也少見。本調查中的犬主要來源于鄉村，食物以剩飯為主，也捕食鼠、鳥，但還未從小動物體內分離出活的蟲體[1]。給犬飼喂患犬新孢子蟲病的牛、羊橫紋肌、肝臟、胎盤及大腦，均能排出犬新孢子蟲卵囊，但不是所有排出卵囊的犬血清抗體都是陽性[1]。犬不食生肉可有效預防犬新孢子蟲病。

我國犬新孢子蟲病的流行范圍在17%～31%[6-9]。與歐洲、美洲及大洋洲犬新孢子蟲的流行情況(2%～100%)比較，亞洲國家的犬新孢子蟲抗體陽性率(0%～31%)較低[1]，本調查結果顯示，犬的陽性率為6.25%。犬新孢子蟲感染懷孕恒河猴，胎兒體內均可分離到犬新孢子蟲速殖子[14]，由此推斷，犬新孢子蟲經胎盤傳播也可能發生在人類。

與我國其他地區犬弓形蟲抗體陽性率(1.3%～40.3%)比較[5,12]，本調查中犬弓形蟲抗體陽性率為8.24%。由于不同的調查結果選取的檢測方法和臨界值不同，所以這些結果并沒有嚴格的可比性。本試驗沒有成功分離出弓形蟲，可能與弓形蟲在心臟分布的數量有關。犬肉可食用，生食犬肉或食用未完全煮熟的犬肉可能會感染犬新孢子蟲和弓形蟲，應當引起公共衛生安全的重視，加強檢疫和監督。