高效液相色譜法同時測定腌漬蔬菜中5種食品添加劑的含量

◎ 牛 芳

（盤錦檢驗檢測中心，遼寧 盤錦 124000）

近年來層出不窮的食品安全事件提高了人們對食品安全問題的關注度，食品添加劑的安全性成為熱點話題，對于常用的食品添加劑更是人們關注的重點。

苯甲酸易穿透細胞膜進入細胞體內，干擾細胞的通透性，抑制細胞膜對氨基酸的吸收，并抑制細胞的呼吸酶活性，從而達到防腐目的，最佳防腐pH為2.5～4.0。過量食用苯甲酸會引起流口水、腹瀉、腹痛和心跳加快等，長期食用會導致過敏及累積中毒。山梨酸為酸性防腐劑，具有較高的抗菌性能，抑制霉菌的生長繁殖，主要是通過抑制微生物體內的脫氫酶系統，從而達到抑制微生物生長的作用，對細菌、霉菌、酵母菌均有抑制作用，是一種相對安全的食品防腐劑。脫氫乙酸利用離子破壁原理，離子有效滲透到細胞體內，抑制微生物呼吸，在酸性或堿性條件下有效，對光和熱比較穩定，在水中煮沸、加熱烘烤食品時不破壞、不變質、不揮發，在水溶液中逐漸降解為醋酸，對人體無毒，為廣譜防腐劑，對酵母菌、霉菌和細菌發育有很強的抑制作用，尤其是對常易引起食品腐敗的酵母菌、霉菌的抑制作用最強。糖精鈉作為食品甜味劑，對人體健康有害無益，在食品中的應用有明顯的超范圍、超量添加現象。安賽蜜作為食品甜味劑，經常食用安賽蜜添加超標的食品會對人體的肝臟和神經系統造成危害，特別是對老人、孕婦、小孩危害更為嚴重，如果短時間內大量食用，會引起血小板減少導致急性大出血[1]。因此，必須按限值控制用量。

腌漬蔬菜可以調節胃口、增強食欲、補充膳食纖維。食品腌漬方法有提高酸度腌漬法、糖腌漬法和鹽腌漬法3種。酸腌漬法有兩種，利用食用酸腌漬，常用于蔬菜類，如酸黃瓜、糖醋蒜；以及酸發酵腌漬法，主要有泡菜、酸菜。鹽腌漬法常用于魚、肉、蝦、蛋和蔬菜。糖腌漬法是用高濃度的糖腌漬食品，可以看出腌漬蔬菜涉及各種口味蔬菜食品，廣泛存在于人們的餐桌。食品添加劑具有增強食品貯存和轉運效果、改良和增進食品多種感官指標、保持且增強食品的營養功能、增強經濟和社會效益等多種功能。同時也帶來違法使用非食品添加劑，超限量、超范圍使用食品添加劑等現象[2]。生產廠家為達到更好的效果，往往會加入多種食品添加劑，現行國家標準中采用多個方法檢測，如果可以同時檢測多種食品添加劑，則可以提高工作效率，節約成本。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉和安賽蜜質量濃度均為1.00 g·L-1（純度均≥99.0%），配制成濃度為0 mg·L-1、5 mg·L-1、10 mg·L-1、50 mg·L-1、100 mg·L-1和200 mg·L-1的混合標準工作液；甲醇、乙酸銨，色譜級；冰乙酸、氨水、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅和無水乙醇，優級純；實驗室用水。

Agilent 1260高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測器、柱溫箱）；pH計；電子天平；離心機和超聲機；色譜柱為Agilent Ecilpse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品制備樣品為東北酸菜，購于盤錦本地市場，將整份試樣用勻漿機打碎，再攪拌均勻。

1.2.2 樣品前處理方法

準確稱取約2.00 g試樣于50 mL具塞離心管中，加亞鐵氰化鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL，混勻，于8 000 r·min-1離心10 min，水相轉移至50 mL容量瓶中，殘渣樣品再提取1次后定容[3]。取適量上清液過0.22 μm濾膜，待液相色譜上機測定[4]。

1.2.3 儀器條件

色 譜 柱 為Agilent Ecilpse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：A-甲醇，B-0.02 mol·L-1乙酸銨-冰乙酸溶液（pH=5.3），梯度洗脫（見表1）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：230 nm（苯甲酸、山梨酸、糖精鈉）、293 nm（脫氫乙酸）、214 nm（安賽蜜）；柱溫：35 ℃。

表1 梯度洗脫條件表

2 結果與分析

2.1 線性關系、相關系數、檢出限和定量限測定結果

安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸依次出峰，出峰時間依次為3.55 min、5.46 min、8.17 min、10.89 min和13.55 min。測定一系列不同質量濃度的混合標準溶液，以各化合物的質量濃度為橫坐標，以相對應的峰面積為縱坐標繪制標準曲線，以信噪比為3倍（3S/N）相對應的質量濃度為檢出限，以信噪比為10倍（10S/N）相對應的質量濃度為定量限，得到各化合物的線性關系、相關系數、檢出限和定量限，見表2。苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉和安賽蜜的線性關系、相關系數、檢出限和定量限均滿足檢測要求。

表2 線性關系、相關系數、檢出限和定量限表

2.2 精密度和準確度考察結果

取一定量的混合標準溶液做低、中、高3個水平加標回收試驗，每個樣品平行測定7次，計算5種化合物的回收率和精密度，結果見表3。苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉和安賽蜜的回收率分別在93.78%～99.75%、94.29%～100.06%、91.26%～99.72%、96.61%～99.97%和90.78%～99.74%，精密度分別在0.26%～1.82%、0.31%～1.64%、0.42%～2.62%、0.56%～2.09%和0.52%～3.13%，這表明所建立的分析方法的精密度和準確度均滿足檢測要求[5]。

表3 回收率和精密度表

3 結論

本文采用二極管陣列檢測器高效液相色譜法，同時測定腌漬蔬菜中的3種防腐劑和2種甜味劑，試驗得知本方法操作簡單，色譜分離效果和穩定性好，并可獲得較高的精密度和準確度，大大節約了試劑的消耗和縮短了分析時間，適合大批量樣品的快速測定，同時為其他醬腌菜樣品的快速測定提供了參考[6]。

快速檢測一直是食品檢測行業不斷探索的領域，既簡化了實驗準備過程，減少了試劑使用，又節省了樣品，縮短了檢測時間。復合防腐劑和復合甜味劑的使用是食品行業的現狀，不但提高了食品添加劑的使用效果，也降低了單一劑量的用量，但也為檢測行業帶來了新的挑戰。用一種簡單的處理方法同時處理幾個常用參數在實際工作中越來越受到歡迎。同時，檢測行業也希望出臺相應標準適應時下檢測需求，給檢測工作帶來更多的便利條件[7]。