血清DKK1、NGAL和MCP-1在2型糖尿病腎病患者中的表達及臨床意義*

馮小娟，薄維波，韋麗麗，周保成△

1.江蘇省連云港市婦幼保健院檢驗科，江蘇連云港 222042；2.江蘇省連云港市東方醫院檢驗科，江蘇連云港 222042

目前，全球的糖尿病(DM)患者已超過1.7億，并呈現出逐年增長的趨勢，而其中2型糖尿病(T2DM)患者占80%～90%[1]。我國成年人群DM患病率接近11%，DM已成為影響中老年人生活質量的主要慢性疾病之一[2]。糖尿病腎病(DN)是一種與糖脂代謝紊亂、血流動力學異常、遺傳易感性、炎癥細胞浸潤和免疫失調等多種綜合因素相關的DM慢性微血管并發癥，其主要病理改變是微血管病變引起的腎小球硬化、腎纖維化，易發展為終末期腎病(ESRD)，具有高致殘率和致死率[2-4]。2型糖尿病腎病(T2DN)相關生物標志物和新的治療靶點探尋是目前臨床的研究熱點。Dickkopf相關蛋白1(DKK1)、中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)是新近發現的腎臟損傷標志物。DKK1可抑制Wnt/β-catenin信號通路的傳導，與糖尿病微血管病變密切相關[5]；NGAL是脂質運載蛋白超家族成員之一，正常表達于腎小管上皮細胞、中性粒細胞、血管內皮細胞等，在炎性反應時呈高表達[6]；MCP-1是細胞趨化因子家族的一類小分子細胞因子，主要由浸潤的單核細胞、巨噬細胞、內皮細胞以及腎小管上皮細胞合成和分泌，參與腎臟炎癥損傷[7]。本文旨在探討血清DKK1、NGAL和MCP-1在T2DN患者不同分期中的表達水平及臨床意義，以期為T2DN的診斷和發病機制研究提供新的思路，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年連云港市婦幼保健院內分泌科收治的200例T2DM患者作為研究對象，其診斷符合相關標準[8]。按照尿清蛋白與肌酐比值(UACR)將患者分成3組，正常蛋白尿組(UACR<30 mg/g)65例，其中男35例，女30例；年齡(55.20±9.61)歲；T2DM病程(4.93±1.06)年；體質量指數(BMI)為(23.64±4.58)kg/m2。微量蛋白尿組(30 mg/g≤UACR≤300 mg/g)70例，其中男40例，女30例；年齡(53.61±8.67)歲；T2DM病程(5.60±1.62)年；BMI(24.62±3.58)kg/m2。大量蛋白尿組(UACR>300 mg/g)65 例，其中男40例，女25 例；年齡(56.30±9.78)歲；T2DM病程(5.92±1.64)年；BMI(23.67±5.12)kg/m2。另選取同期70例健康體檢者作為正常對照(NC)組，其中男40例，女30例；年齡(54.21±9.69)歲；BMI為(23.88±5.74)kg/m2。所有研究對象均排除肝臟疾病、腦血管疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病、惡性腫瘤等。各組年齡、性別、BMI等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，納入的研究對象簽署知情同意書。

1.2儀器與試劑 血清DKK1、NGAL 和MCP-1檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗)購自上海撫生實業有限公司，檢測設備為瑞士帝肯TECAN 150型酶標儀；空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯 (TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和尿清蛋白、尿肌酐檢測試劑盒購自浙江伊利康生物技術有限公司，檢測設備為日本東芝TBA-FX800生化分析儀；糖化血紅蛋白(HbA1c)檢測試劑盒(高效液相色譜法)購自深圳普門科技股份有限公司，檢測設備為普門H9糖化血紅蛋白檢測儀；以上指標檢測均采用原裝配套試劑、校準品和質控品，且在有效期內使用，所有項目經過校準，質控在控。

1.3方法 所有研究對象抽取空腹靜脈血3 mL，3 000 r/min離心30 min分離血清，置于-80 ℃保存，用于檢測DKK1、NGAL、MCP-1、FPG、TC、TG、BUN、CREA、HDL-C、LDL-C、HbA1c。同時留取研究對象晨尿用于檢測尿清蛋白和尿肌酐，計算UACR。

2 結 果

2.1各組血壓、UACR及血生化指標檢測結果比較 各組收縮壓、舒張壓、UACR、BUN、CREA、FPG、HbA1c、TG、TC、HDL-C、LDL-C水平比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；正常蛋白尿組、微量蛋白尿組、大量蛋白尿組收縮壓、舒張壓、BUN、CREA、FPG、HbA1c、TG、TC、LDL-C水平均高于NC組，HDL-C水平均低于NC組，差異有統計學意義(P<0.05)；大量蛋白尿組UACR、BUN、CREA水平均高于微量蛋白尿組及正常蛋白尿組，舒張壓、HbA1c、TC水平均高于正常蛋白尿組，HDL-C水平低于正常蛋白尿組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 各組血壓、UACR及血生化指標檢測結果比較

續表1 各組血壓、UACR及血生化指標檢測結果比較

2.2各組血清DKK1、NGAL和MCP-1水平比較 與NC組比較，正常蛋白尿組、微量蛋白尿組、大量蛋白尿組血清DKK1、NGAL和MCP-1水平升高；且微量蛋白尿組血清DKK1、NGAL和MCP-1水平明顯高于正常蛋白尿組，大量蛋白尿組血清DKK1、NGAL和MCP-1水平明顯高于微量蛋白尿組與正常蛋白尿組,差異有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 各組血清DKK1、NGAL和MCP-1水平比較

2.3相關性分析 Pearson相關分析結果顯示，UACR與血清DKK1、NGAL和MCP-1水平均呈正相關(r=0.421、0.563、0.681，P<0.05)。

2.4T2DN發生的影響因素分析 單因素Logistic回歸分析結果顯示，T2DM病程、BMI、UACR、HDL-C、DKK1、NGAL和MCP-1是T2DN發生的影響因素(P<0.05)，見表3。將單因素Logistic回歸分析中差異有統計學意義的指標作為自變量納入多因素Logistic回歸分析模型，結果顯示，UACR、DKK1、NGAL和MCP-1水平升高是T2DN發生的獨立危險因素(P<0.05)，而HDL-C水平升高則是T2DN發生的獨立保護因素(P<0.05)，見表4。

表3 單因素Logistic回歸分析結果

表4 多因素Logistic回歸分析結果

續表4 多因素Logistic回歸分析結果

3 討 論

T2DN是T2DM患者常見的微血管并發癥，嚴重影響了患者的生活質量，在我國T2DN發病率為20%～40%，呈逐年上升趨勢[9]。目前認為，T2DN主要是由于免疫系統、內分泌系統、炎癥因子、氧化應激、脂代謝紊亂等因素共同作用引起細胞結構異常、胰島素抵抗及血管內皮功能紊亂而導致的。由于T2DN存在復雜的代謝紊亂，臨床較難進行早期診斷，患者常在確診之前腎小球結構已經發生不可逆的改變，一旦發展為ESRD，治療將更加棘手，是T2DM患者死亡的主要原因之一，因此及早確診對于延緩T2DN的進展意義重大[10]。當前臨床主要使用UACR、血清BUN和CREA對腎臟的濾過和排泄功能進行判斷，但這些指標個體間存在較大差異，并且容易受到較多外界因素影響[11]。近年來，多種生物標志物的發現為T2DN的診療提供了新的思路。

DM介導的腎臟纖維化是導致ESRD的原因之一，高水平葡萄糖通過促進腎臟細胞外基質的累積和系膜細胞纖維化因子的表達，增加腎小球微結構的重塑，從而導致腎臟功能障礙[12]。DKKl是一種分泌性糖蛋白，其通過增加β-catenin的降解來抑制Wnt/β-catenin信號通路[13]，該信號通路在高糖環境下介導了腎臟纖維化，是引起ESRD的重要原因。LIN等[14]通過細胞培養首次發現DKKl表達減少避免了DM誘導的腎小球損傷、腎臟微環境纖維基質的沉積以及尿蛋白排泄，另外，該研究進一步通過動物實驗發現DN小鼠血清DKKl水平升高，腎小球系膜細胞、足細胞和管狀細胞中DKKl的表達均顯著上調，表明腎組織的多個細胞群均可表達DKKl。MCP-1是一種炎癥趨化因子，可由腎臟細胞分泌，其在炎癥狀態下可促使單核細胞向病變部位聚集，加速血管硬化和腎臟纖維化[15]。T2DM本身也是一種炎性反應，在高糖環境下，MCP-1使腎小球結構損傷，導致腎臟纖維化，最終發展成為T2DN[16]，因此，MCP-1可作為T2DN患者早期診斷的標志物。NGAL是一種靈敏的腎臟損傷標志物，通常在中性粒細胞、腎小管上皮細胞、支氣管上皮黏液細胞中呈現低表達，但在受損腎臟上皮細胞中表達顯著上調[17]。劉洪等[18]研究表明，T2DN患者血清NGAL水平明顯升高，且隨著病情加重逐漸升高，NGAL可作為T2DM早期診斷的標志物。WOODSON等[19]通過動物實驗研究發現，在腎臟缺血再灌注損傷模型中，腎小管上皮細胞NGAL表達水平明顯升高。以上研究均提示NGAL在T2DN的發生和進展中起到重要作用。

本研究結果顯示，正常蛋白尿組、微量蛋白尿組、大量蛋白尿組血清DKK1、NGAL和MCP-1水平均明顯高于NC組(P<0.05)；同時隨著蛋白尿水平的增加，血清DKK1、NGAL和MCP-1水平逐漸升高，提示血清DKK1、NGAL和MCP-1參與T2DN的發生、發展過程，可作為預測T2DN的有效指標，同時也可用于預測T2DN的進展，與PARK等[20]的研究結果類似。Pearson相關分析結果顯示，UACR與血清DKK1、NGAL和MCP-1水平均呈正相關(r=0.421、0.563、0.681，P<0.05)，進一步說明隨著T2DN病情的加重，血清DKK1、NGAL和MCP-1水平會逐漸升高，因此，在臨床診療中可通過血清DKK1、NGAL和MCP-1水平的高低對T2DN的嚴重程度進行初步判斷。本研究發現，UACR、DKK1、NGAL和MCP-1水平升高是T2DN發生的獨立危險因素(P<0.05)，而HDL-C水平升高則是T2DN發生的獨立保護因素(P<0.05)。王沖等[21]在研究中提出HDL-C能降低腎臟纖維化的發生風險，RYSZ 等[22]發現HDL-C具有防止腎小球動脈粥樣硬化或減少動脈粥樣硬化斑塊體積的作用。

綜上所述，T2DN患者血清DKK1、NGAL和MCP-1水平均明顯升高，且隨著患者病情的加重其水平有增高趨勢。檢測血清DKK1、NGAL和MCP-1水平可以預測腎臟受損程度，對T2DN的診治具有重要的參考價值。