新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)提高不同檢測系統(tǒng)間總膽紅素檢測結(jié)果的一致性

何成欽，劉艷婷，楊 娜，肖光軍△，陳 姝，龔國忠，曹 丹，趙明才

1.四川省遂寧市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川遂寧 629000；2.四川省遂寧市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川遂寧 629000

總膽紅素(TBIL)檢測是各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室均普遍開展的常規(guī)生化檢測項(xiàng)目，其檢測結(jié)果常用于診斷患者有無溶血及評(píng)估其肝、膽系統(tǒng)在膽色素代謝中的功能狀態(tài)[1-2]。目前，臨床實(shí)驗(yàn)室TBIL檢測主要以釩酸鹽法、重氮法、化學(xué)氧化法、酶法和干化學(xué)法為主[3]，雖然大部分試劑生產(chǎn)廠家提供的試劑對(duì)TBIL的檢測結(jié)果能溯源至美國國家標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)研究院(NIST)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)SRM 916a，但相關(guān)研究顯示，TBIL的檢測結(jié)果在不同檢測方法、不同試劑間均存在一定差異，且部分檢測系統(tǒng)間的結(jié)果差異隨標(biāo)本TBIL水平升高而增加，同時(shí)TBIL見光易分解，其校準(zhǔn)品儲(chǔ)存和使用不當(dāng)則將進(jìn)一步加大檢測系統(tǒng)間的結(jié)果差異，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室間的檢測結(jié)果無法實(shí)現(xiàn)互認(rèn)，不利于患者的診療及預(yù)后評(píng)估，也為患者的轉(zhuǎn)診造成了一定影響[3-5]。故本研究以配套檢測系統(tǒng)賦值的新鮮血清作為校準(zhǔn)品對(duì)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)進(jìn)行多點(diǎn)校準(zhǔn)，分析校準(zhǔn)前后兩檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果的一致性，探討新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)在提高不同檢測系統(tǒng)間TBIL檢測結(jié)果一致性中的可行性。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 收集遂寧市中心醫(yī)院新生兒科、兒科患兒常規(guī)生化檢測后剩余的新鮮血清標(biāo)本56份，然后將每份標(biāo)本混勻后分成兩份，一份標(biāo)本用于新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)前兩檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果的比對(duì)。另一份標(biāo)本則用于校準(zhǔn)后兩檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果的比對(duì)，每份標(biāo)本盛裝于1.5 mL離心管中，編號(hào)后避光保存于-80 ℃超低溫冰箱中備用。同時(shí)，收集TBIL水平在20～500 μmol/L的不同水平新鮮血清標(biāo)本5份，用于配套檢測系統(tǒng)賦值和校準(zhǔn)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)[6]。所有新鮮血清標(biāo)本均無溶血、脂血，且人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體、丙型肝炎病毒(HCV)抗體及乙肝表面抗原(HBsAg)檢測結(jié)果均為陰性。

1.2儀器與試劑 配套檢測系統(tǒng)由Roche Cobas C702全自動(dòng)生化分析儀及其配套的重氮法TBIL檢測試劑(批號(hào)：50333801)與生化復(fù)合校準(zhǔn)品(批號(hào)：41006701)組成；待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)由日立7600全自動(dòng)生化分析儀、四川邁克實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)的釩酸鹽法TBIL檢測試劑(批號(hào)：1220101)與配套的生化復(fù)合校準(zhǔn)品(批號(hào)：1020081)組成，項(xiàng)目檢測參數(shù)嚴(yán)格按照試劑盒說明書設(shè)置；水平2(批號(hào)：45782)和水平3(批號(hào)：45783)液體生化多項(xiàng)質(zhì)控品由美國伯樂公司提供。

1.3方法

1.3.1新鮮血清的賦值 使用配套檢測系統(tǒng)檢測收集的5份不同TBIL水平的新鮮血清標(biāo)本，每份標(biāo)本檢測3次，計(jì)算其均值，該均值即為配套檢測系統(tǒng)對(duì)新鮮血清標(biāo)本的賦值[6]。新鮮血清標(biāo)本賦值后，2～8 ℃避光保存，并于1 h內(nèi)對(duì)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)完成校準(zhǔn)。賦值前對(duì)儀器進(jìn)行常規(guī)保養(yǎng)，然后使用Roche生化復(fù)合校準(zhǔn)品對(duì)配套檢測系統(tǒng)校準(zhǔn)，且室內(nèi)質(zhì)控在控。

1.3.2待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn) 使用新鮮賦值血清對(duì)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)進(jìn)行多點(diǎn)校準(zhǔn)前，對(duì)TBIL檢測參數(shù)中的校準(zhǔn)參數(shù)進(jìn)行修改，其他參數(shù)不做修改，具體修改如下：Calibration Type由“Linear”改為“Spline”，Point由“2”改為“6”，Span由“2”改為“3”，同時(shí)將儀器中生化復(fù)合校準(zhǔn)品TBIL的賦值刪掉，另外新設(shè)置5個(gè)水平的校準(zhǔn)品(校準(zhǔn)品1～5)，并將經(jīng)配套檢測系統(tǒng)賦值的5份新鮮血清標(biāo)本按水平從低到高的順序依次輸入校準(zhǔn)品1～5賦值處。設(shè)置各水平校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)架位置，新鮮賦值血清混勻后與純化水分別放置于校準(zhǔn)架的相應(yīng)位置，選擇校準(zhǔn)類型為“Full”后對(duì)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)TBIL檢測項(xiàng)目進(jìn)行多點(diǎn)校準(zhǔn)，儀器自動(dòng)繪制工作曲線。

1.3.3新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)前后檢測結(jié)果的一致性評(píng)估 使用新鮮賦值血清對(duì)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)進(jìn)行多點(diǎn)校準(zhǔn)前， 每天從-80 ℃超低溫冰箱中將收集的新鮮血清標(biāo)本取出8份(編號(hào)1～8)放置于室溫避光環(huán)境中，恢復(fù)至室溫并充分混勻后，參照EP9-A2文件[7]的方法，按1～8 、8～1 的順序分別在配套檢測系統(tǒng)和待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)中完成TBIL水平的檢測，每份標(biāo)本的檢測結(jié)果取兩次檢測的均值，連續(xù)7 d共檢測56份標(biāo)本。使用新鮮賦值血清對(duì)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)進(jìn)行多點(diǎn)校準(zhǔn)后，每天從-80 ℃超低溫冰箱中取出另一套新鮮血清標(biāo)本中的8份(編號(hào)1～8)在待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)中按1～8、8～1的順序完成TBIL的水平檢測，每份標(biāo)本的檢測結(jié)果取兩次檢測的均值，連續(xù)7 d共檢測56份標(biāo)本。收集數(shù)據(jù)，并參照EP9-A2文件[7]中的方法進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，然后以配套檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果為X、待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果為Y進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)前后兩檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果的線性回歸方程Y=bX+a和R2，并通過回歸方程計(jì)算待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)在不同醫(yī)學(xué)決定水平(Xc)處的預(yù)期偏倚(SE)及其95%置信區(qū)間(95%CI)[7-8]。依據(jù)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T403-2012確定TBIL檢測的允許總誤差(TEa)為±15%，并以SE≤1/2TEa為臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)前后兩檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果的一致性。SE=[(b-1)X+a] ×100/X[7]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel 2010軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。

2 結(jié) 果

2.1新鮮血清標(biāo)本的賦值及對(duì)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn) 使用配套檢測系統(tǒng)對(duì)5份新鮮血清標(biāo)本進(jìn)行賦值，各標(biāo)本3次檢測的均值依次為27.7、109.4、235.5、361.4、468.0 μmol/L，以此為各標(biāo)本TBIL的水平，并使用這5份新鮮血清標(biāo)本對(duì)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)，儀器自動(dòng)繪制工作曲線。

2.2新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)前后檢測結(jié)果的比較 校準(zhǔn)前，待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)和配套檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果線性回歸方程的b值為0.888 6，不在0.97～1.03內(nèi)，且待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)的結(jié)果偏倚隨TBIL水平的升高而增大，見圖1、2；校準(zhǔn)后，待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)和配套檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果線性回歸方程的b值為1.012 8，在0.97～1.03內(nèi)，且待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)的結(jié)果偏倚均<1/2TEa，見圖3、4。

圖1 校準(zhǔn)前配套檢測系統(tǒng)與待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)TBIL檢測結(jié)果線性回歸圖

2.3新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)前后兩檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果的一致性 根據(jù)回歸方程計(jì)算新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)前后待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)在17.1、34.2、171.0、342.0 μmol/L 4個(gè)Xc處的SE、預(yù)期值及其對(duì)應(yīng)的95%CI，結(jié)果見表1。

圖2 校準(zhǔn)前兩檢測系統(tǒng)間TBIL檢測結(jié)果的偏倚圖

圖3 校準(zhǔn)后配套檢測系統(tǒng)與待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)TBIL檢測結(jié)果的線性回歸圖

圖4 校準(zhǔn)后兩檢測系統(tǒng)間TBIL檢測結(jié)果的偏倚圖

表1 新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)前后待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)的SE、預(yù)期值及對(duì)應(yīng)的95%CI

3 討 論

檢測系統(tǒng)是由儀器、試劑、校準(zhǔn)品、操作程序等共同組成，但因各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室的條件存在一定差異，而全自動(dòng)生化分析儀和檢測試劑盒的生產(chǎn)廠家眾多，導(dǎo)致目前大部分臨床實(shí)驗(yàn)室仍采用非配套檢測系統(tǒng)進(jìn)行常規(guī)生化項(xiàng)目的檢測[9]。由于非配套檢測系統(tǒng)未建立完整的溯源鏈，繼續(xù)使用試劑盒的配套校準(zhǔn)品及其標(biāo)示值對(duì)項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)，將影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，可能使實(shí)驗(yàn)室間的檢測結(jié)果缺乏一致性，從而無法實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)，故如何實(shí)現(xiàn)不同檢測系統(tǒng)結(jié)果的一致性仍是目前臨床實(shí)驗(yàn)室急需解決的實(shí)際問題[6,10]。

本研究結(jié)果顯示，兩檢測系統(tǒng)分別使用試劑盒配套校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)時(shí)，其回歸方程的b值為0.888 6，不在0.97～1.03內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果存在較大的系統(tǒng)誤差，待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)的偏倚隨標(biāo)本TBIL水平的升高而呈增大的趨勢，與王楊等[3]、于智君等[4]的研究結(jié)果一致。因線性回歸分析顯示R2>0.95，說明進(jìn)行比對(duì)的標(biāo)本水平范圍合理，其線性回歸方程的b值和a值可靠，可通過回歸方程計(jì)算待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)在不同Xc處的SE[7-8]。新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)前待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)在17.1、34.2、171.0、342.0 μmol/L這4個(gè)Xc處的SE均>1/2TEa，且SE隨TBIL水平的升高而呈逐漸升高趨勢，說明兩檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果缺乏一致性，這與王楊等[3]的研究結(jié)果存在一定差異，可能與其選擇以SE≤±10%為臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)，也側(cè)面反映了方法比對(duì)試驗(yàn)中所選擇的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)將影響結(jié)果的評(píng)價(jià)。

本研究發(fā)現(xiàn)，校準(zhǔn)前待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)在TBIL低水平處的偏倚較小，隨著TBIL水平的降低偏倚趨近于零，而高水平處偏倚則隨著TBIL水平的升高而逐漸增加，說明兩檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果可能并不呈線性關(guān)系，此時(shí)肖光軍等[11]使用的用外部校正因子來實(shí)現(xiàn)不同檢測系統(tǒng)結(jié)果一致性的方法可能不適用于本研究中的兩套檢測系統(tǒng)，故應(yīng)采用其他適宜的方法來提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。相關(guān)研究顯示，非配套檢測系統(tǒng)可使用國際公認(rèn)的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、參考方法或配套檢測系統(tǒng)賦值的新鮮血清來進(jìn)行校準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)溯源鏈的傳遞，從而提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，雖然對(duì)大部分臨床實(shí)驗(yàn)室來說，國際公認(rèn)的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和經(jīng)參考方法賦值的新鮮血清均較難獲得，但新鮮血清在不同檢測系統(tǒng)間不存在基質(zhì)效應(yīng)，是非配套檢測系統(tǒng)最佳的校準(zhǔn)品[6,10]，故本研究采用經(jīng)配套檢測系統(tǒng)賦值的新鮮血清對(duì)待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)。同時(shí)，因兩檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果可能并不呈線性關(guān)系，故本研究將TBIL的校準(zhǔn)類型由兩點(diǎn)校準(zhǔn)改為多點(diǎn)校準(zhǔn)，以進(jìn)一步提高兩檢測系統(tǒng)對(duì)不同水平標(biāo)本檢測結(jié)果的一致性和可比性。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)后，其線性回歸方程的b值由0.888 6變?yōu)?.012 8，已滿足b值在0.97～1.03內(nèi)的質(zhì)量要求，檢測結(jié)果偏倚及其在4個(gè)Xc處的SE均<1/2TEa，檢測結(jié)果具有一致性，說明新鮮賦值血清多點(diǎn)校準(zhǔn)可減小檢測系統(tǒng)間的系統(tǒng)誤差，使兩檢測系統(tǒng)間TBIL的檢測結(jié)果具有一致性。本研究校準(zhǔn)后，當(dāng)TBIL水平接近600 μmol/L時(shí)，待評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)的結(jié)果偏倚雖在可接受范圍內(nèi)，但與其他水平處的偏倚相比較明顯增加，可能與TBIL水平已接近配套檢測系統(tǒng)線性范圍的上限和校準(zhǔn)品5的水平較低有關(guān)，但該水平已遠(yuǎn)高于342.0 μmol/L這一Xc，該偏倚對(duì)新生兒病理性黃疸等疾病的診療影響較小，可在以后的研究中適當(dāng)調(diào)整5份新鮮賦值血清標(biāo)本的TBIL水平，以進(jìn)一步提高不同檢測系統(tǒng)間高水平標(biāo)本檢測結(jié)果的可比性。

綜上所述，應(yīng)用新鮮賦值血清作為非配套檢測系統(tǒng)的校準(zhǔn)品，可實(shí)現(xiàn)溯源鏈的傳遞，提高非配套檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性及不同檢測系統(tǒng)間檢測結(jié)果的一致性，且具有成本低、操作簡單的優(yōu)點(diǎn)，在實(shí)現(xiàn)區(qū)域檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)中具有較高的可行性。同時(shí)，試劑生產(chǎn)廠家和臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)關(guān)注不同檢測系統(tǒng)在低水平和高水平處檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，通過改變校準(zhǔn)類型、調(diào)整校準(zhǔn)品水平范圍等方法進(jìn)一步提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。本研究未對(duì)新鮮賦值血清兩點(diǎn)校準(zhǔn)與多點(diǎn)校準(zhǔn)對(duì)TBIL檢測結(jié)果一致性的影響進(jìn)行探討，也未在更多的檢測系統(tǒng)間進(jìn)行應(yīng)用和探討，因此所得結(jié)論仍需進(jìn)一步研究驗(yàn)證。