“丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用”實(shí)驗(yàn)的改進(jìn)及分析★

陳舒麗，鄧秋紅，黎威巍，金科華，劉漢才

（湖北科技學(xué)院醫(yī)學(xué)部，湖北 咸寧 437100）

酶的抑制劑是與酶結(jié)合使酶催化活性降低或消失，但酶分子不發(fā)生變性的一類化合物。根據(jù)抑制劑與酶是否共價(jià)結(jié)合，可將酶的抑制作用分為可逆性抑制作用和不可逆性抑制作用[1]。競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用是可逆性抑制作用的一種，即抑制劑與底物競(jìng)爭(zhēng)同一酶的活性中心，使底物分子無(wú)法與酶的活性中心結(jié)合，從而抑制酶的活性。競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的抑制程度取決于抑制劑與酶的相對(duì)親和力和抑制劑與底物濃度的相對(duì)比例[2]。當(dāng)抑制劑濃度不變時(shí)，抑制程度隨底物濃度的增加而減弱，最終可以通過(guò)加大底物濃度，消除競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的抑制作用[3]。

丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用是生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)里面的一個(gè)研究酶的抑制作用的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)。琥珀酸脫氫酶是三羧酸循環(huán)過(guò)程中一個(gè)重要的酶，能催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的2H 由輔基FAD 接受還原成FADH2，然后琥珀酸氧化呼吸鏈將2H 傳遞給氧生成水[4]。丙二酸與琥珀酸結(jié)構(gòu)類似，是琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，如果有丙二酸存在時(shí)，此酶的活性受到抑制。丙二酸與琥酸脫氫酶的親和力遠(yuǎn)大于琥珀酸本身對(duì)它的親和力，當(dāng)丙二酸濃度僅為琥珀酸濃度的1/50 時(shí)，酶的活性便被抑制50%[5]，因此抑制作用很強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)中用甲烯藍(lán)（MB）作為受氫體。在隔絕空氣的條件下,脫下的氫被藍(lán)色的甲烯藍(lán)接受還原成無(wú)色的甲烯白（MBH+H），在總的反應(yīng)體系體積相同時(shí)，通過(guò)觀察甲烯藍(lán)顏色消退的快慢來(lái)衡量反應(yīng)體系內(nèi)部脫氫反應(yīng)的快慢，同時(shí)判斷丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶活性的抑制程度。……