循環腫瘤DNA超深度測序在肺結節惡性評估的應用研究

黃冬云 許文景

【摘要】目的：針對當前循環腫瘤DNA超深度測序用于疑似肺結節惡性患者的效果開展深入分析，為疑似肺結節惡性患者的診斷以及后續治療提升指明改進方向。方法：選擇我院2020年6月到2021年12月疑似肺結節惡性患者為研究對象，對其進行循環腫瘤DNA超深度測序以及金標準診斷，分析判斷研究循環腫瘤DNA超深度測序在肺結節惡性評估的應用價值。結果：循環腫瘤DNA超深度測序診斷的靈敏度為92.45%，特異度為50.00%，準確度為90.91%。結論：循環腫瘤DNA超深度測序可以為肺結節惡性患者的病情評估提供積極意義。

【關鍵詞】循環腫瘤DNA超深度測序;診斷精準度;靈敏度;特異度;肺結節惡性

【中圖分類號】R521 【文獻標識碼】A 【文章編號】2026-5328（2022）02--01

循環腫瘤DNA作為當前腫瘤標識物，在惡性疾病診斷、治療過程中發揮著積極價值。疑似肺結節惡性患者可以通過循環腫瘤DNA超深度測序，識別該腫瘤標志物，進一步為提供診斷指導方向[1]。針對循環腫瘤DNA的靶向捕獲、深度測序，未來會是一個很有前景的臨床腫瘤基因檢測方案，將會在未來臨床上有著積極的使用2]。現列舉55例疑似肺結節惡性患者進行回顧性討論。具體報告如下：

1.資料及方法

1.1一般資料

所有患者均簽署知情同意書，經醫學倫理委員會批準，研究人員結合納排標準后，選擇我院2020年6月到2021年12月55例疑似肺結節惡性患者為研究對象。患者：男性30例，女性25例;年齡為28-64歲，平均年齡（45.45±3.66）歲。

1.2方法

首先采集疑似患者的靜脈血液，然后抽提血漿游離DNA，并且用抽提好的DNA來構建文庫。用捕獲試劑盒來對文庫進行雜交捕獲。在這個 Panel 當中，包括按照 hg19 參考基因組序列，設計目標區域。這些區域可以用于檢測點突變、和插入缺失突變。同時，對于 ALK 和 ROS1 這兩個基因中常見的、易發生融合基因突變的位點，也設計了相應的捕獲探針，來更好地檢測到融合基因突變。捕獲完畢的文庫用高保真聚合酶進行擴增，然后對 PCR 擴增產物進行純化。擴增好的文庫，用 HiSeq 2000 測序儀，進行讀長100堿基的雙端測序，這里要特別說明一下，ctDNA 的測序是非常深的，一般情況下，會測到上萬倍、甚至幾萬倍的測序深度。在Aaron 的文章當中，平均每個ctDNA 樣本測2.1G的數據。也就是說，測序的數據量相當于捕獲目標區域大小的17000倍。把測序得到的序列，進行生物信息學分析。在ctDNA的數據分析當中，有一些與傳統的捕獲測序分析過程不一樣的參數設定。

1.3 指標判定

診斷準確率=循環腫瘤DNA超深度測序為肺結節惡性人數/真肺結節惡性人數x100%。敏感性=循環腫瘤DNA超深度測序為肺結節惡性人數/（真肺結節惡性人數+假陰性人數）x100%。特異性=循環腫瘤DNA超深度測序為陰性人數/（真陰性人數+假肺結節惡性人數）x100%。

2.結果

分析55例疑似肺結節惡性患者循環腫瘤DNA超深度測序診斷結果，發現其陽性診斷人數為50例，陰性人數為5例。實際金標準診斷中55例疑似肺結節惡性患者中，存在53例陽性，2例陰性。所以，循環腫瘤DNA超深度測序診斷的靈敏度為92.45%，特異度為50.00%，準確度為90.91%。具體情況見下表1：

3.討論

正常細胞和腫瘤細胞都會破裂，細胞破裂之后，細胞中的DNA就會被釋放到體液當中去。進入血液的這部分DNA，就稱為血液游離DNA[3]。cfDNA片段的長度范圍在100bp～240bp之間，大部分集中在170bp左右。測序時把cfDNA抽提出來，建成DNA測序的文庫，再用探針雜交、或者PCR擴增等方法，把其中與腫瘤相關的DNA富集出來，進行高通量測序[4]。

分析循環腫瘤DNA超深度測序在肺結節惡性評估情況，可以發現，循環腫瘤DNA超深度測序診斷的靈敏度為92.45%，特異度為50.00%，準確度為90.91%。

綜上所述，循環腫瘤DNA超深度測序在肺結節惡性評估過程中存在積極價值，其在未來的一段時間內將在臨床上得到更大的價值與意義，進一步為臨床惡性疾病的診斷提供價幫助。

參考文獻：

[1]呂爽，李卉，巴雅力格，孫巖巖，呼群.高通量基因測序技術檢測外周血循環腫瘤DNA基因突變在非小細胞肺癌中的應用[J].現代腫瘤醫學，2019，27（13）：2291-2295.

[2]Gahee Park，Joo Kyung Park，Dae-Soon Son，Seung-Ho Shin，Yeon Jeong Kim，Hyo-Jeong Jeon，Jae Lee，Woong-Yang Park，Kwang Hyuck Lee，Donghyun Park. Utility of targeted deep sequencing for detecting circulating tumor DNA in pancreatic cancer patients[J]. Scientific Reports，2018，8（1）.

[3]周春蓮，徐偉文.基于深度測序的循環腫瘤DNA檢測在腫瘤診治中的應用進展[J].中國新藥雜志，2017，26（20）：2401-2405.

[4]梁會營. 基于靶向外顯子深度測序的轉移性乳腺癌患者循環腫瘤DNA定量檢測及其臨床應用研究[D].南方醫科大學，2016.

課題編號：YZ20200071