整合素ανβ6蛋白在NSCLC 組織中的表達變化及其臨床意義

李曉旻，劉珂崎

雅安市人民醫院心胸外科，四川雅安625000

在我國，肺癌的發病率和病死率均居所有惡性腫瘤的首位。非小細胞肺癌（NSCLC）是肺癌最為常見的類型，占所有肺癌的80%以上［1-2］。NSCLC 早期癥狀不典型，大多數患者確診時已屬中晚期。盡管近年來外科手術、藥物治療等手段均取得了較大進展，但肺癌患者的5 年生存率仍然不能令人滿意。因此，尋找新的生物標志物和治療靶點對NSCLC 早期診斷、靶向治療至關重要。整合素是介導細胞與細胞外基質、細胞與細胞之間的跨膜蛋白，是由α和β 兩個亞基組成的異二聚體，目前已發現18 種α 亞基、9 種β 亞基，按照不同的組合構成20 余種整合素［3］。有研究報道，當腫瘤細胞發生遷移時，整合素與細胞外基質的親和力發生改變，這種表型改變能夠促使細胞骨架形成，增強腫瘤細胞的侵襲能力［4］。ανβ6是整合素家族中的重要成員，在正常組織中表達很低甚至不表達。但當組織形態發生改變或修復時，尤其是癌變過程中，整合素ανβ6 蛋白表達明顯增加，如乳腺癌、結腸癌、胃癌、子宮內膜癌、卵巢癌、肝癌、宮頸癌、口腔黏膜癌等［4-6］。有研究認為，整合素ανβ6蛋白在腫瘤侵襲、轉移和化療耐藥中發揮重要作用［7］。但目前整合素ανβ6 蛋白在NSCLC 中的作用尚不明確。本研究觀察了整合素ανβ6 蛋白在NSCLC 組織中的表達變化，并分析其表達與患者臨床病理特征和預后的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年1月—2017年12月雅安市人民醫院收治的初診NSCLC患者142例。所有患者經組織病理檢查明確診斷。納入標準：①符合NSCLC 診斷標準；②初診，入院前未接受任何抗腫瘤治療；③預計生存期≥3 個月；④臨床資料完整。排除標準：①合并肺結核、肺氣腫等其他肺部疾病者；②合并其他部位惡性腫瘤者；③合并嚴重肝腎功能不全者；④合并免疫系統功能障礙者。其中，男94 例、女48 例，年齡38～72 歲（＜60 歲85 例、≥60 歲57 例）；腫瘤直徑：＜3 cm 54 例，≥3 cm 88 例；病理類型：鱗狀細胞癌56例，腺癌74例，其他12例；T分期：T1、2期39 例，T3、4期103 例；組織分化程度：高分化42例，中分化52 例，低分化48 例；發生淋巴結轉移78例，遠處轉移43 例，血管侵犯53 例。本研究經雅安市人民醫院醫學倫理委員會批準（審批編號：201410412），患者或其家屬知情同意并簽署書面知情同意書。

1.2 整合素ανβ6 蛋白表達檢測 采用免疫組化法。收集手術切除的NSCLC 組織及其配對的癌旁組織（距腫瘤組織邊緣超過5 cm，并經組織病理檢查明確為正常肺組織），中性甲醛固定24 h，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，常規石蠟包埋，4 μm 厚切片。然后將切片置于67 ℃烘箱烤片2 h，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，檸檬酸鹽緩沖液中加熱抗原修復，3%過氧化氫室溫孵育10 min，以阻斷內源性過氧化物酶活性。5%山羊血清室溫封閉1 h，滴加整合素ανβ6一抗，4 ℃孵育過夜。次日，滴加生物素標記的山羊抗兔IgG 二抗，室溫孵育2 h。DAB 顯色，蘇木素復染，1%鹽酸乙醇分化，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，顯微鏡下觀察。

所有切片由兩位經驗豐富的病理科醫生采用雙盲法獨立閱片。整合素ανβ6 蛋白陽性表達定位于細胞膜或細胞質，呈淺黃色、棕黃色或棕褐色顆粒狀。以染色強度和陽性細胞比例綜合評價整合素ανβ6 蛋白陽性表達。每張切片隨機選取5 個高倍鏡視野（200×），評估染色強度，計數每視野細胞總數和陽性細胞數，計算陽性細胞比例。染色強度評分：未著色、淺黃色、棕黃色和棕褐色分別計0～3分。陽性細胞比例評分：無陽性細胞及陽性細胞比例＜25%、25%～50%、≥50%分別計0～3 分。染色強度評分和陽性細胞比例評分乘積≥3 即為整合素ανβ6蛋白陽性表達。

1.3 隨訪 以門診復查和電話結合的方式定期隨訪，共隨訪3年，第一年每6個月隨訪1次，之后每年隨訪1 次，隨訪截至2020 年12 月。統計患者疾病進展和生存狀況，計算3年無進展生存率和總生存率。

1.4 統計學方法 采用SPSS21.0 統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-Rank檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NSCLC 組織與癌旁正常組織整合素ανβ6 蛋白表達比較 NSCLC 組織整合素ανβ6 蛋白陽性表達率為64.79%（92/142），癌旁正常組織未見陽性表達。NSCLC 組織整合素ανβ6 蛋白陽性表達率明顯高于癌旁正常組織（χ2=136.080，P＜0.05）。

2.2 NSCLC 組織整合素ανβ6 蛋白表達與患者臨床病理特征的關系 見表1。

表1 NSCLC組織整合素ανβ6蛋白表達與患者臨床病理特征的關系［例（%）］

2.3 NSCLC 組織整合素ανβ6 蛋白表達與患者預后的關系 NSCLC 患者ανβ6 蛋白陽性表達者與陰性表達者3 年無進展生存率分別為70.40%、84.00%，NSCLC 患者ανβ6 蛋白陽性表達者3 年無進展生存率低于其陰性表達者（χ2=4.526，P＜0.05）。NSCLC 患者ανβ6 蛋白陽性表達者與陰性表達者3年總生存率分別為78.00%、94.00%，NSCLC 患者ανβ6 蛋白陽性表達者3 年總生存率低于其陰性表達者（χ2=5.975，P＜0.05）。

3 討論

在全球范圍內，肺癌是導致男性癌癥相關死亡的首要原因，在女性癌癥死因中居第二位。NSCLC是肺癌最為常見的類型，包括鱗狀細胞癌、腺癌、大細胞癌等不同亞型。在過去的十五年中，隨著遺傳學和分子生物學技術快速發展，NSCLC 的治療手段發生了巨大變化，如免疫療法、分子靶向治療等［8］，但NSCLC 患者生存獲益并未得到顯著改善。因此，尋找新的生物標志物和治療靶點對NSCLC 早期診斷、靶向治療至關重要。

整合素是介導細胞與細胞外基質、細胞與細胞之間的跨膜蛋白，是由α 和β 兩個亞基組成的異二聚體。整合素可參與細胞與細胞外基質、細胞與細胞之間的相互作用，能夠影響細胞增殖、分化、黏附、遷移等生物學過程［9-10］。近年研究發現，整合素蛋白異常表達能夠促進腫瘤細胞增殖和分化等，從而參與腫瘤惡性進展。隨著對整合素作用機制研究的不斷深入，靶向整合素為腫瘤治療提供了新的方向［11］。整合素ανβ6是一種特殊的整合素亞型，在正常上皮或良性腫瘤中不表達，僅在胚胎發生、組織修復和上皮惡性腫瘤中表達［12］。整合素ανβ6 能夠通過多種途徑參與調控腫瘤細胞的惡性生物學行為。在胃癌細胞中，誘導整合素ανβ6蛋白表達可促進腫瘤細胞分泌MMP-9 并降解細胞外基質，從而為腫瘤細胞的惡性增殖提供了良好的外部環境［13］。在結腸癌細胞中，整合素ανβ6蛋白異常表達可通過抑制線粒體凋亡途徑促進結腸癌細胞的惡性增殖。有研究報道，整合素α2β 在NSCLC 組織中的表達顯著增加，有望成為Ⅰ期NSCLC 和區分良惡性肺結節的生物標志物［14］。正常情況下，整合素α11 在肺泡上皮細胞中不表達，而在肺癌細胞中表達增加，并能促進肺癌細胞增殖和遷移，有望成為NSCLC 患者預后不良的預測指標［15］。由此推測，整合素ανβ6蛋白異常表達有可能促進NSCLC 進展并與患者預后不良密切相關。但目前整合素ανβ6 蛋白在NSCLC 發生、發展中的作用尚不完全清楚。

本研究結果發現，NSCLC 組織整合素ανβ6 蛋白陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，提示整合素ανβ6 蛋白高表達可能參與NSCLC 的發生、發展。進一步研究發現，NSCLC 組織整合素ανβ6 蛋白陽性表達與腫瘤直徑、T 分期、組織分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移、血管侵犯等有關，而與性別、年齡、病理類型無關。提示整合素ανβ6 蛋白高表達能夠促進NSCLC 惡性進展，有可能成為NSCLC 的治療靶點。在結直腸癌中，整合素ανβ6 和ETS-1 或真核翻譯起始因子4E的組合可用于評估患者不良預后［16］。據此推測，整合素ανβ6 蛋白表達上調可能亦與NSCLC 患者預后不良有關。本研究結果顯示，NSCLC 患者ανβ6 蛋白陽性表達者3 年無進展生存率和3 年總生存率均低于其陰性表達者，提示整合素ανβ6 蛋白陽性表達與NSCLC 患者預后不良有關。這可能與整合素ανβ6 蛋白表達上調能夠通過多種途徑促進NSCLC 細胞侵襲和遷移，從而導致腫瘤惡性進展有關。

綜上所述，NSCLC 組織整合素ανβ6 蛋白陽性表達明顯升高，且其表達與腫瘤惡性進展和患者預后不良密切相關。