Yes 相關轉錄調節因子1、程序性死亡受體1在上皮性卵巢癌中的表達及其與腫瘤侵襲程度的相關性分析

白小英，趙瑾，閆飛艷，陳琳

西安醫學院第二附屬醫院婦科，西安 710038

上皮性卵巢癌是臨床婦科常見疾病之一，近年來，發病率呈上升趨勢，且逐漸年輕化，嚴重威脅女性健康與生命安全[1]。上皮性卵巢癌早期多無特異性臨床癥狀，多數患者就診時已是晚期，治療效果不甚理想。相關報道指出，卵巢癌患者5年生存率不足30%[2]。故尋找有助于卵巢癌早期篩查特異性生物分子標志物及新治療靶點對患者尤其重要，是改善其預后的關鍵。Yes相關轉錄調節因子1（Yes associated transcriptional regulator 1，YAP1）是HIPPO信號通路家族重要成員之一，可通過激活HIPPO信號通路提高卵巢上皮細胞的轉錄活性[3]。程序性死亡受體1（programmed cell death 1，PDCD1，也稱PD-1）是CD28家族成員之一。相關報道發現，PD-1與疾病預后密切相關[4]。但目前有關YAP1、PD-1在上皮性卵巢癌中的表達及其與腫瘤侵襲程度的相關性報道較少見。故本研究通過檢測上皮性卵巢癌組織中YAP1、PD-1的表達，探討上述因子表達與腫瘤侵襲程度的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年9月至2020年12月西安醫學院第二附屬醫院收治的上皮性卵巢癌患者的病歷資料。納入標準：①符合上皮性卵巢癌相關診斷標準[5]；②具有完整的臨床資料；③依從性良好，無中途退出；④無其他惡性疾病。排除標準：①術前進行放療、化療等治療；②合并意識障礙、交流障礙或心理障礙；③合并先天性心臟疾病；④心、腦、肝、腎等臟器功能嚴重不全。根據納入、排除標準，共納入106例上皮性卵巢癌患者，年齡34～61歲，平均（48.16±6.85）歲；國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期73例；淋巴結轉移39例；分化程度：G1級 61例，G2～3級 45例；浸潤深度：T1～2期 32 例，T3～4期 74 例。另選取接受手術治療的62例生殖系統良性疾病患者作為對照組，年齡33～62歲，平均（47.69±5.47）歲。兩組患者年齡比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。取上皮性卵巢癌患者的上皮性卵巢癌組織及對照組患者的正常卵巢組織。本研究經醫院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

兔抗人YAP1、PD-1多克隆抗體均購自英國Abcam公司；SP免疫組化試劑盒、二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。標本均在手術后立即采集，用10%甲醛溶液固定后，常規脫水石蠟包埋。根據SP免疫組化染色法對YAP1、PD-1蛋白進行檢測，檢測過程嚴格按照說明書進行。一抗陰性對照使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替。

結果判斷：YAP1陽性染色定位于細胞核或細胞質，PD-1陽性染色定位于細胞質或細胞膜。每張切片取5個高倍視野，根據染色程度和陽性細胞百分比進行評分。染色程度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；陽性細胞百分比：無陽性細胞為0分，陽性細胞＜10%為1分，10%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。兩項分數相乘，總分＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.3 觀察指標

①比較上皮性卵巢癌組織及正常卵巢組織中YAP1、PD-1表達情況。②分析不同臨床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中YAP1、PD-1表達情況。③分析上皮性卵巢癌組織中YAP1、PD-1表達的相關性及與腫瘤侵襲程度的相關性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析法；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 YAP1、PD-1表達情況的比較

上皮性卵巢癌組織中YAP1、PD-1陽性表達率均明顯高于正常卵巢組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 上皮性卵巢癌組織與正常卵巢組織中YAP1、PD-1表達情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中YAP1、PD-1表達情況的比較

FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為G1級、有淋巴結轉移、浸潤深度為T3～4期上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中YAP1陽性表達率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為G2～3級、無淋巴結轉移、浸潤深度為T1～2期患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）；FIGO分期為Ⅲ～Ⅳ期、漿液性腫瘤、浸潤深度為T3～4期上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中PD-1陽性表達率分別明顯高于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、非漿液性腫瘤、浸潤深度為T1～2期患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表2）

表2 不同臨床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌組織中YAP1、PD-1表達情況的比較（n=106）

2.3 上皮性卵巢癌組織中YAP1、PD-1表達相關性及與腫瘤侵襲程度的相關性

上皮性卵巢癌組織中YAP1、PD-1表達無相關性（r=1.175，P＞0.05）；但YAP1、PD-1與腫瘤侵襲程度均呈正相關（r=0.657、0.671，P＜0.05）。

3 討論

上皮性卵巢癌主要由上皮細胞異常病變或癌基因突變引發[6]。有關其發病機制尚未明確，認為可能與遺傳、環境等因素有關。上皮性卵巢癌患者整體預后較差，經治療后，仍有部分患者預后無明顯改善，尤其是晚期患者。故及時診治對患者尤其重要。

YAP1是HIPPO信號通路中較為關鍵的調節蛋白，當HIPPO被激活后，YAP1會發生磷酸化，主要聚集在細胞質中[7-8]。當HIPPO信號通路失活后，YAP1會轉移至細胞核中，促進雙調蛋白、結締組織生長因子等生長相關基因的表達[9]。陳晗等[10]研究發現，YAP1具有調節器官大小、維持細胞增殖與凋亡動態平衡等作用。本研究中，上皮性卵巢癌組織中YAP1陽性表達率明顯高于正常卵巢組織，且與分化程度、臨床分期、淋巴結轉移及腫瘤浸潤程度有關，提示YAP1可能與上皮性卵巢癌發生發展有關，分析其原因可能是因為HIPPO信號通路失活，導致YAP1轉移至細胞核，進而促進靶基因表達、腫瘤細胞增殖與轉移[11]。

PD-1屬于一種免疫抑制分子，其配體有程序性死亡受體配體1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也稱PD-L1）、PD-L2，最初是由凋亡小鼠T細胞雜交瘤克隆而來，與細胞凋亡密切相關。PD-1信號通過多種機制抑制T細胞免疫[12]。Dwivedi等[13]發現，阻斷PD-1/PD-L1后可增加效應T細胞活性來增強腫瘤抑制。病理狀態下，腫瘤微環境可誘導PD-1表達增高，其配體通過與PD-1結合，使PD-1通路在腫瘤微環境中持續激活，抑制T細胞活化，誘導T細胞凋亡。在乳腺癌、腎癌等多種惡性腫瘤中PD-1的高表達介導了腫瘤的免疫逃逸及患者不良預后[14]。本研究結果顯示，上皮性卵巢癌組織中PD-1陽性表達率明顯高于正常卵巢組織，且其陽性表達率與上皮性卵巢癌患者臨床分期、腫瘤組織類型及浸潤程度有關，說明PD-1在上皮性卵巢癌進展中具有重要作用，可作為診斷卵巢癌的有效指標之一。進一步分析上皮性卵巢癌組織中YAP1、PD-1表達相關性發現，兩者在上皮性卵巢癌組織中的表達無相關性，但由于本研究樣本量偏少，后續需進一步擴大研究證實。而分析YAP1、PD-1表達與腫瘤侵襲程度的相關性發現，YAP1、PD-1與腫瘤侵襲程度呈正相關。推測其原因可能是由于YAP1表達增高可促進HIPPO信號通路激活，PD-1高表達抑制腫瘤浸潤淋巴細胞的增殖與活化并誘導效應T細胞凋亡，進而加劇腫瘤細胞增殖，腫瘤浸潤程度加深[15]。

綜上所述，上皮性卵巢癌中YAP1、PD-1呈異常表達，且與腫瘤浸潤程度有關，可能參與了腫瘤細胞發生、發展，可作為臨床診斷上皮性卵巢癌的輔助診斷指標。