肺結(jié)核患者外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達及臨床意義

張莎娜 黃成靜 李旭 胥俊越 趙亞虹 李弈

結(jié)核病是一種由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，可發(fā)生于多種臟器，嚴重威脅人類健康，其中以肺部結(jié)核感染最常見[1]。中國作為全球肺結(jié)核(pulmonary tuberculosis，PTB)高負擔國家之一，在2018年新發(fā)病例和死亡數(shù)均位居第二位，已成為中國突出的公共衛(wèi)生問題之一[2]。因此，對PTB的發(fā)病機理及防治工作進行研究十分必要。細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4，CTLA4)是一種CD28家族受體，通過與B細胞激活抗原7(B cell activating antigen 7，B7)分子結(jié)合抑制T細胞增殖[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)，CTLA4在鑒別診斷活動性結(jié)核與潛伏性結(jié)核感染患者上具有較高的敏感度和特異度[5]。T細胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3，TIM-3)是一種由淋巴細胞亞型輔助性T細胞1(Helper T cell 1，Th1)、Th17以及自然殺傷細胞表達的I型跨膜蛋白[6]。代嬌等人[7]發(fā)現(xiàn)，活動性PTB患者血清TIM-3及外周血單個核細胞中TIM-3 mRNA水平均高于潛伏期PTB及健康體檢者[7]。因此，本研究通過檢測PTB患者外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3水平，探究其對PTB患者的診斷價值，以期為臨床診斷和防治PTB提高參考。

資料與方法

一、一般資料

選取2018年1月～2020年1月在全院各科室收治的PTB患者78例作為研究對象(試驗組)，均為痰涂片抗酸染色查結(jié)核菌陽性或痰結(jié)核菌培養(yǎng)陽性者，其中男50例，女28例，年齡25～65歲，平均年齡(51.17±7.35)歲。另選取同期在本院進行體檢的健康者80例作為對照組，男54例，女26例，年齡28～64歲，平均年齡(48.86±7.62)歲。兩組受試者性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.203, t=1.939,P>0.05)。

試驗組納入標準：①所有患者均符合中華醫(yī)學會結(jié)核分會制定的《肺結(jié)核診斷和治療指南》診斷標準[8]；②患者年齡≥18歲；③自愿參加本試驗；④均為初治菌陽PTB患者，且臨床上未經(jīng)正規(guī)抗結(jié)核藥物化療、沒有長期服用免疫類藥物；⑤有完整的臨床資料；⑥均無耐藥。排除標準：①嚴重的精神障礙或人類免疫缺陷病毒感染等；②本身患有心、肝、腎或造血系統(tǒng)等嚴重疾病；③有系統(tǒng)性免疫缺陷癥(系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎等)的患者；④入院24 h內(nèi)死亡或出院的患者；⑤既往患有PTB等疾病；⑥近期使用過免疫抑制劑治療的患者；⑦妊娠期或哺乳期患者。對照組納入標準：①體檢健康者；②受試者年齡≥18歲；③臨床資料完整；排除標準同試驗組。本研究經(jīng)本院道德倫理委員會批準通過，所有樣品采集均取得患者及家屬知情同意并簽字，符合《世界醫(yī)學協(xié)會赫爾辛基宣言》。

二、主要試劑和儀器

三、研究方法

1 樣本采集與保存 受試者入院后使用真空EDTA管采集外周全血8 mL，3000 rpm/min離心15 min，取出上層血漿。向剩余樣本中加入PBS 3 mL，混勻。取5～6 mL淋巴細胞分離液注入15 mL離心管，然后用滴管將混勻血樣貼壁、緩慢注射淋巴細胞分離液中，3000 rpm/min離心15 min。取出離心管中呈乳白色的液體，加入3 mL PBS，混勻，3000 rpm/min離心15 min；重復一次。棄上清，加入1 mL PBS混勻，分別分裝成200 μL細胞混懸液至流式管中。

四、統(tǒng)計學方法

結(jié) 果

一、一般資料比較

表1 一般資料比較

二、兩組間外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平比較

與對照組相比，試驗組外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平均升高(P<0.05)(見圖1，表2)。

圖1 兩組間外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平比較

表2 兩組間外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平比較

三、二元Logistic回歸分析菌陽PTB存在的影響因素

以是否存在菌陽PTB為因變量，以受試者外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平為自變量，進行二元Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平偏高與菌陽PTB的存在相關(P<0.05)(見表3)。

表3 二元Logistic回歸分析菌陽PTB存在的影響因素

四、ROC分析外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平對PTB的診斷價值

ROC分析結(jié)果顯示，外周血T淋巴細胞CTLA4診斷發(fā)生PTB的曲線下面積(Area under the curve，AUC)為0.825(95%CI：0.753～0.897)，截斷值為0.595%，敏感度為82.10%，特異度為85.00%。外周血T淋巴細胞TIM-3診斷發(fā)生PTB的AUC為0.837(95%CI：0.770～0.904)，截斷值為33.326%，敏感度為82.16%，特異度為81.20%。聯(lián)合檢測診斷發(fā)生PTB的AUC為0.883(95%CI：0.823～0.943)，敏感度為88.50%，特異度為90.00%(見圖2)。

圖2 ROC分析外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3表達水平對PTB的診斷價值

討 論

綜上所述，PTB患者外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3水平均升高，對PTB的發(fā)生具有一定診斷價值，可能作為潛在的診斷PTB的生物標志物。本研究未設立菌陰PTB患者作為觀察組進行比較，外周血T淋巴細胞CTLA4、TIM-3水平與PTB的關系有待進一步探究。