TGF-β1、HIF-1α 在輸卵管妊娠中的表達和意義

金力榮，楊麥青，徐洪波，魏燕妮

（1.昌邑市人民醫院產科，山東 昌邑 261300；2.昌邑市人民醫院病理科，山東 昌邑 261300；3.濰坊市人民醫院病理科，山東 濰坊 261041；4.昌邑市人民醫院輸血科，山東 昌邑 261300；5.濰坊護理職業學院健康管理系，山東 濰坊 261041）

當受精卵植入子宮腔外時，就會發生異位妊娠，其是婦產科常見的急腹癥。在美國，異位妊娠的患病率為1%～2%，占妊娠相關死亡的2.7%[1]。而異位妊娠中以輸卵管妊娠最為常見，嚴重者可以因破裂導致孕婦死亡[2，3]。因此，早期發現和診斷異位妊娠對于孕早期的產婦尤其重要。轉化生長因子β（TGF-β）由3 種亞型（TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3）組成，TGF-β1是一種多功能細胞因子，參與調節維持機體細胞分化、凋亡和免疫穩態過程[4-6]。任何原因引起的TGF-β1水平改變，均會導致機體免疫穩態的失衡，從而導致各種疾病的發展[7-9]。在慢性腎炎、骨折愈合、癌癥等疾病形成過程中都發現有TGF-β1表達水平的改變[8-10]。低氧誘導因子1（HIF-1）已被證明是低氧反應基因表達的關鍵轉錄調節因子，在氧平衡調節過程中起著重要的作用，它有2 個亞基HIF-1α 和HIF-1β，而HIF-1α 決定其生理活性[11，12]，調節多種血管生成因子的基因表達，在葡萄胎代謝、新生血管形成等過程中至關重要，并參與多種疾病的發生[13-16]。本研究通過檢測輸卵管妊娠患者血清TGF-β1表達水平，分析其與臨床病理參數的關系和與HIF-1α 表達的相關性，來探索TGF-β1、HIF-1α在輸卵管妊娠的作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月-2021 年9 月昌邑市人民醫院產科就診并經過臨床診斷的輸卵管妊娠患者40 例（停經6～8 周）設為實驗組，將同期進行產檢的30 名健康產婦設為對照組。納入標準：所有納入對象均是漢族，Torch 檢查無異常；年齡20～45 歲；肝功、甲狀腺功能、心臟、肺功能均正常。排除標準：存在高血壓病、糖尿病、免疫性疾病者；生殖器解剖異常者；腫瘤史者。兩組年齡、產次、孕次、體質指數、血壓比較，差異無統計學意義（P＞0.05），可對比，見表1。所有納入對象均知情同意并簽署知情同意書。

表1 兩組一般資料比較（）

表1 兩組一般資料比較（）

1.2 方法 抽取受試者空腹血5 ml，靜置1 h，離心后做好標記將血清置于-80℃冰箱凍存備用。應用貝克曼庫爾特AU5800 全自動生化分析儀檢測血清人絨毛膜促性腺激素β 亞單位（β-hCG）、孕酮（P）水平；采用雙抗體夾心ABC-ELISA 法檢測血清TGF-β1、HIF-1α 水平。ELISA 試劑盒購買自武漢賽培生物科技有限公司，操作時嚴格按照說明書進行，使用美國全自動酶聯檢測儀450 nm 測定吸光度，根據標準曲線及標準公式計算受試樣本的濃度。

1.3 統計學方法 采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據分析。計量資料以（）表示，采用t檢驗；計數資料以（n）表示，采用χ2檢驗；采用Pearson 相關性分析TGF-β1、HIF-1α的關系；采用ROC 曲線評估TGF-β1、HIF-1α 對輸卵管妊娠的診斷靈敏度；以P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組TGF-β1、β-hCG、P、HIF-1α 水平比較 實驗組血清TGF-β1、HIF-1α、β-hCG、P 水平低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組TGF-β1、β-hCG、P、HIF-1α 水平比較（）

表2 兩組TGF-β1、β-hCG、P、HIF-1α 水平比較（）

2.2 血清TGF-β1、HIF-1α 低表達與臨床病理參數的關系 TGF-β1、HIF-1α 低表達與血清β-HCG、P 有關（P＜0.05）；而與年齡、孕次、產次、收縮壓、舒張壓、體質指數無關（P＞0.05），見表3。

表3 輸卵管妊娠患者血清TGF-β1、HIF-1α 與臨床病理參數的關系（n）

2.3 血清TGF-β1與HIF-1α的相關性分析 TGF-β1低表達與HIF-1α 低表達呈正相關（r＝0.341，P＝0.016），見圖1。

圖1 TGF-β1 與HIF-1α的相關性分析

2.4 血清TGF-β1與HIF-1α 在輸卵管妊娠中的診斷效能分析 ROC 曲線分析顯示，血清TGF-β1低表達用于診斷輸卵管妊娠的曲線下面積是0.721（P＝0.002）；血清HIF-1α 低表達用于診斷輸卵管妊娠的曲線下面積是0.692（P＝0.006），見圖2。

圖2 血清TGF-β1、HIF-1α 低表達在診斷輸卵管妊娠中的ROC 曲線圖

表3（續）

3 討論

宮外孕的發病機制比較復雜，其危險因素包括盆腔炎病史、吸煙史、輸卵管手術史、既往異位妊娠史和不孕癥。異位妊娠是妊娠早期孕產婦死亡率的主要原因，任何妊娠早期出現陰道出血或下腹疼痛且尚未確定宮內妊娠的患者都應考慮宮外孕[1]。宮外孕中輸卵管妊娠約占其中的98%，輸卵管妊娠據著床部位的不同可以分為壺腹部妊娠、峽部妊娠、傘部妊娠和間質部妊娠[17，18]。由于輸卵管的管腔狹窄且管壁較薄，伴隨孕囊的生長，比較容易破裂，但輸卵管免疫細胞的組成、表型和活性的改變都有助于輸卵管妊娠的發生。

TGF-β1是TGF-β 亞型的一種，在多個方面上控制細胞的生長。在成人機體中，TGF-β1對免疫細胞的發育和成熟至關重要，維持免疫耐受和內環境的穩定，并調節免疫反應的各個方面。TGF-β1能夠顯著抑制Th 淋巴細胞的激活和增殖，在B 細胞和漿細胞生物學的調節中也起著關鍵作用，從而限制炎癥可能導致的組織破壞性反應[19]。有文獻報道[20]，TGF-β1在早期自然流產中表達降低，并且TGF-β1的表達與血清β-hCG、P 和雌激素水平有關，提示TGF-β1參與維持正常妊娠過程。本研究結果發現，實驗組血清TGF-β1低于對照組，且其與β-hCG、P的表達有關（P＜0.05），提示TGF-β1參與了輸卵管妊娠的發生、發展，其表達水平降低，可能通過致纖維化作用降低和改變炎細胞炎性因子的分泌，從而改變孕囊著床部位纖維組織修復和炎細胞浸潤的平衡，導致輸卵管妊娠的發生。

HIF-1α的水平主要靠氧氣濃度來調節。當細胞微環境氧氣濃度正常時，HIF-1α 可被泛素化降解，維持正常的表達水平，但當細胞缺氧時，HIF-1α的降解受阻，濃度就會升高，從而會啟動與低氧耐受相應的轉錄過程[14-16]。有研究報道[12-14]，HIF-1α 在癌癥、骨質疏松、心肌梗死等疾病中異常表達，參與了這些疾病的發生、發展，并且在高齡孕婦易流產疾病研究和妊高癥研究中也發現有HIF-1α的異常表達，說明HIF-1α 在妊娠過程中有一定的作用。本研究結果發現，實驗組血清HIF-1α 低于對照組，且其與β-hCG、P的表達有關（P＜0.05），提示HIF-1α 參與了輸卵管妊娠的發展過程。孕囊早期的血供對于維持孕囊正常發育起著重要的作用，血管形成不足會導致低氧影響孕囊的發育。HIF-1α 在輸卵管妊娠患者血清中顯著降低，提示輸卵管妊娠中這些異位孕囊所處的微環境不能有效調控低氧情況。此外，本研究相關性分析顯示，TGF-β1低表達與HIF-1α低表達呈正相關（r＝0.341，P＝0.016），說明TGF-β1與HIF-1α 在輸卵管妊娠中的作用是協同作用。ROC 曲線分析顯示，血清TGF-β1低表達用于診斷輸卵管妊娠的曲線下面積是0.721（P＝0.002）；血清HIF-1α 低表達用于診斷輸卵管妊娠的曲線下面積是0.692（P＝0.006），提示TGF-β1、HIF-1α 低表達對于輸卵管妊娠有一定的診斷意義。

綜上所述，輸卵管妊娠患者血清TGF-β1、HIF-1α的表達降低，TGF-β1、HIF-1α 低表達與β-hCG、P的表達有關，且血清TGF-β1、HIF-1α 低表達在輸卵管妊娠診斷中的敏感性較高。