結核分枝桿菌培養陽性、外周血結核感染T細胞斑點試驗陰性病例的臨床特征分析

付紅繼，杜鳳玲

（1. 宜都市第一人民醫院感染性疾病科，湖北 宜都 443300 ；2. 宜都市中醫醫院呼吸科，湖北 宜都 443300）

結核病是臨床上常見的慢性傳染病，由結核分枝桿菌（mycobacterium tuberculosis）感染所致。目前結核病在全球范圍內的發病率和致死率不容樂觀，該病是導致人類死亡的十大因素之一。結核病的危險程度相較于艾滋病來說有過之而無不及，被廣大醫生稱之為傳染病中的頭號殺手。此病對患者的身心健康危害極大，因此臨床上建議對此病進行及早診斷和治療，避免患者的病情惡化[1]。進行病原學檢查是臨床上診斷結核病的“金標準”。酶聯免疫斑點試驗在結核病的診斷中應用廣泛（至今為止已在臨床上應用近20年），具有重要的診斷價值。但臨床上有少數患者進行結核分枝桿菌培養的結果呈陽性，但進行外周血結核感染T 細胞斑點試驗（T cell spottest of tuberculosis，T-SPOT.TB）的結果卻呈陰性，這給結核病的診斷帶來了一定困難。為提高結核病臨床診斷的準確率，本研究分析并總結了進行結核分枝桿菌培養結果呈陽性、外周血T-SPOT.TB結果呈陰性病例的臨床特征?，F報告如下。

1 資料和方法

1.1 基線資料

本文的研究對象是2019 年1 月至2020 年1月期間我院收治的65 例進行結核分枝桿菌培養結果呈陽性、外周血T-SPOT.TB 結果呈陰性的患者及65 例進行結核分枝桿菌培養結果呈陽性、外周血T-SPOT.TB 結果呈陽性的患者。其納入標準是：病情符合結核病的診斷標準，且經綜合檢查得到確診；進行結核分枝桿菌培養的結果呈陽性；病歷資料完整；知曉本研究內容，并簽署了知情同意書。其排除標準是：合并有其他嚴重的器質性疾?。淮嬖谡J知功能障礙；病歷資料缺失或中途退出本研究；病情持續惡化。將其中進行結核分枝桿菌培養結果呈陽性、外周血T-SPOT.TB 結果呈陰性的65 例患者設為觀察組，將其中進行結核分枝桿菌培養結果呈陽性、外周血T-SPOT.TB 結果呈陽性的65 例患者設為對照組。在觀察組患者中，有男35 例，女30 例；其年齡為20 ～82 歲，平均年齡為（55.62±5.62）歲。在對照組患者中，有男32 例，女33 例；其年齡為21 ～80 歲，平均年齡為（55.17±5.38）歲。兩組患者的基線資料相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 結核分枝桿菌培養 采集標本（包括痰液標本、胸腔積液標本、腹水標本、尿液標本、糞便標本、組織標本等），用羅氏培養基對標本進行培養，對培養結果進行準確的記錄，之后對培養得到的菌株進行分離及鑒定。

1.2.2 外周血T-SPOT.TB 檢測所用的試劑盒為上海復星科技有限公司提供的試劑盒，基本操作流程如下：采集患者的外周靜脈血5 mL，將血液標本置于枸櫞酸鈉抗凝試管中。分離外周血單核細胞，將細胞置于包被干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）的抗體微孔板上，用培養基濾過蛋白和結核分枝桿菌特異性抗原早期分泌的靶向抗原，在37 ℃的環境中培養24 h。洗去具有抗原致敏效應的T 淋巴細胞，加入生物素標記的二抗，經酶聯顯色后于細胞因子分泌處形成斑點。檢驗醫師通過記錄斑點數，對T 淋巴細胞的數量和結核分枝桿菌特異性抗原的致敏效應進行檢測，結果判斷如下：當空白對照孔內斑點數＜6 時，任何實驗孔內斑點數減去空白孔斑內點數的結果≥6，則表示試驗結果呈陽性，反之則表示試驗結果呈陰性；當空白對照孔內斑點數≥6 時，任何實驗孔內斑點數超過空白孔內斑點數的2 倍，則表示試驗結果呈陽性，反之則表示試驗結果呈陰性。

1.3 觀察指標

比較兩組患者結核病的類型（肺結核和其他結核?。?。對兩組患者的年齡、體質指數、病程、有無吸煙史、有無飲酒史、有無原發性疾病等一般資料進行對比分析，總結導致結核分枝桿菌感染患者進行T-SPOT.TB 結果呈陰性的危險因素。比較兩組患者的各項血生化指標，包括白細胞計數、血小板計數、淋巴細胞計數、血紅蛋白和血漿白蛋白。白細胞計數、血紅蛋白的水平、血小板計數和血漿白蛋白的水平采用TOSHIBA accute-40 血細胞計數儀進行檢測，淋巴細胞計數采用希森美康公司生產的sf3000 全自動生化儀進行檢測。

1.4 統計學方法

用SPSS 21.0 軟件處理本研究中的數據，計量資料用±s表示，用t檢驗，計數資料用% 表示，用χ2 檢驗，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者結核病類型的對比

在觀察組患者中， 肺結核患者有47 例（ 占72.31%）， 其 他 結 核 病 患 者 有18 例（ 占27.69%）。在對照組患者中，肺結核患者有63 例（占96.92%），其他結核病患者有2 例（占3.08%）。觀察組患者肺結核的發病率低于對照組患者，其他結核病的發病率高于對照組患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 導致結核分枝桿菌感染患者進行T-SPOT.TB 結果呈陰性的危險因素

在兩組患者中，有吸煙史、飲酒史及合并有原發性疾病患者的占比相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。觀察組患者中年齡≥65 歲患者的占比、體質指數≥24 患者的占比和病程≥6 個月患者的占比均高于對照組患者中此類患者的占比，差異有統計學意義（P＜0.05）。詳見表1?？梢姡w重過重、高齡和病程超過6 個月可能是導致結核分枝桿菌感染患者進行T-SPOT.TB 結果呈陰性的危險因素。

表1 導致結核分枝桿菌感染患者進行T-SPOT.TB 結果呈陰性的危險因素[ 例（%）]

2.3 兩組患者各項血生化指標的對比

兩組患者的白細胞計數及血小板計數相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。觀察組患者的淋巴細胞計數、血紅蛋白和血漿白蛋白的水平均低于對照組患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。詳見表2。

表2 兩組患者各項血生化指標的對比（± s

表2 兩組患者各項血生化指標的對比（± s

組別（n） 白細胞計數（×109/L）血紅蛋白（g/L）血小板計數（×109/L） 淋巴細胞計數（×109/L） 血漿白蛋白（g/L）觀察組（n=65） 7.65±3.51 120.26±5.05 232.56±6.52 0.98±1.85 32.50±5.62對照組（n=65） 7.45±3.23 132.92±5.67 233.64±6.67 1.86±1.62 35.62±5.75 t 值 0.338 13.443 0.934 2.885 3.129 P 值 0.736 ＜0.001 0.352 0.005 0.002

3 討論

目前臨床上診斷結核病的主要方式有免疫學檢查、影像學檢查、病理學檢查和病原學檢查等，不同的檢查方法均有其各自的優勢和不足。例如，進行病理學檢查需實施介入性操作，以此獲取組織標本，有引發氣胸和出血的風險，患者普遍難以接受；進行影像學檢查可對病灶的部位和大小進行直觀地觀察，但診斷的準確性不高且有射線輻射的風險；病原學檢查中的結核菌素皮膚試驗（tuberculin skin test，TST）為體內試驗，診斷的敏感性較低，且純蛋白衍生物很有多種蛋白成分，與卡介苗和非結核分枝桿菌（NTM）存在交叉反應，缺乏特異性[2-3]。病原學檢查中的T-SPOT.TB 為體外試驗?；颊甙l生結核分枝桿菌感染后，其外周血中會產生特異性活化的效應T 淋巴細胞，這些效應T 淋巴細胞經結核分枝桿菌特異性抗原ESAT-6、CFP-10 刺激后，可分泌IFN-γ，故進行T-SPOT.TB 時通過體外檢測IFN-γ 的分泌情況可判斷機體是否感染結核分枝桿菌。ESAT-6和CFP-10 只存在于結核分枝桿菌復合群和少見的幾種結核分枝桿菌中，在卡介苗和大多數NTM中缺失，故用T-SPOT.TB 診斷結核分枝桿菌感染有著較高的敏感性和特異性。本研究中，對觀察組患者和對照組患者進行結核分枝桿菌培養的結果均呈陽性，說明其體內均存在結核分枝桿菌活菌[4]。當進行T-SPOT.TB 的結果呈陽性時，也不能確診患者發生結核分枝桿菌感染，還要考慮其是否存在NTM 感染。因此，臨床上應將T-SPOT.TB 與菌種鑒定、病理學檢查等相結合來診斷結核分枝桿菌感染，特別是針對接受抗結核治療一段時間后肺部病灶無明顯吸收的患者，應考慮其是否發生NTM 感染[5]。臨床研究表明，T 淋巴細胞免疫反應與結核分枝桿菌的菌量負荷有著密切的聯系，活動性肺結核患者體內的T 淋巴細胞免疫反應會隨著結核分枝桿菌菌量的增高與減少而產生相應的變化。治療前，肺結核患者體內結核分枝桿菌的菌量負荷越大，其T 淋巴細胞免疫反應的水平就越高，治療后隨著患者體內結核分枝桿菌菌量負荷的減少，其T 淋巴細胞免疫反應的水平會逐漸下降[6-7]。綜上所述，結核病的診斷方式較多，但不少診斷方式的準確性和特異性一般，而T-SPOT.TB 在結核病的診斷中被證實具有較高的價值。

本研究的結果證實，與進行結核分枝桿菌培養結果呈陽性、外周血T-SPOT.TB 結果呈陽性的患者相比，進行結核分枝桿菌培養結果呈陽性、外周血T-SPOT.TB 結果呈陰性的患者肺結核的發病率較低，其他結核病的發病率較高，且其淋巴細胞計數、血紅蛋白和血漿白蛋白的水平均較低。體重過重、高齡和病程超過6 個月可能是導致結核分枝桿菌感染患者進行T-SPOT.TB 結果呈陰性的危險因素。