北柴胡及醋北柴胡標準湯劑質量差異性分析

宋 馳，葛 威，鄒佳莉，王 悅，譚娟娟，貢濟宇

北柴胡及醋北柴胡標準湯劑質量差異性分析

宋 馳，葛 威，鄒佳莉，王 悅，譚娟娟，貢濟宇*

長春中醫藥大學 藥學院，吉林 長春 130117

建立北柴胡及醋北柴胡標準湯劑質量評價方法，比較二者質量的差異性。制備北柴胡及醋北柴胡標準湯劑各20批，對醋制前后標準湯劑的pH值及出膏率進行考察；建立北柴胡醋制前后標準湯劑HPLC指紋圖譜方法和多指標成分含量測定方法，并結合化學計量學和統計學方法對二者差異進行分析。北柴胡醋制后標準湯劑pH值降低，出膏率降低；建立了北柴胡及其醋制品標準湯劑指紋圖譜，分別確定了16個共有峰，指認了其中5個共有峰；北柴胡標準湯劑相似度為0.976～0.995，醋北柴胡標準湯劑相似度為0.946～0.996。主成分分析將北柴胡及其醋制品標準湯劑歸為2類，正交偏最小二乘法-判別分析找出二者共7個差異色譜峰，分別為峰1、4（柴胡皂苷c）、6、7（柴胡皂苷a）、9（柴胡皂苷b2）、10（柴胡皂苷b1）及13（柴胡皂苷d），為北柴胡及醋北柴胡標準湯劑差異化合物。多指標成分含量測定結果表明北柴胡醋制前后指標成分含量具有顯著差異（＜0.05），北柴胡醋制后標準湯劑中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c及柴胡皂苷d含量較低，柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量較高。建立了科學和實用的北柴胡及醋北柴胡標準湯劑質量評價方法，也為北柴胡與其醋制品相關制劑的鑒別和質量控制提供參考。

北柴胡；醋制；標準湯劑；指紋圖譜；正交偏最小二乘法-判別分析；柴胡皂苷；質量控制

中藥標準湯劑是以中醫理論為指導、臨床應用為基礎的單味中藥飲片水煎劑，用于標準化不同的臨床用藥形式是否與傳統湯劑一致，亦可作為配方顆粒、經典名方等產品的物質基準[1]。建立規范、高效的標準湯劑制備工藝，并依照可量化的標準對其進行質量評價，將為中藥應用的標準化、科學化提供重要的技術支持與參考。

北柴胡為傘形科柴胡屬多年生草本植物柴胡DC.的干燥根[2]，又名韭葉柴胡、津柴胡，為大宗藥材。具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣的功效，主要化學成分為皂苷類、多糖類、黃酮類、揮發油、有機酸及植物甾醇等[3-5]。

現代藥理研究表明，柴胡對于散熱、消炎、抗腫瘤、抗抑郁、保肝及免疫調節等具有良好的治療效果[6-10]。北柴胡有熬制法、酒炒制、蜜制、醋炒、鱉血制、炒制法等炮制方法，其中以醋制最常用，且被《中國藥典》2020年版收載。

明代李梃《醫學入門》認為：醋可引藥入肝，醋柴胡重在養肝柔肝，起到緩和升散、解表退熱之功效，可用于治療腹痛、月經不調等癥[11]，在現有研究中，柴胡入藥煎煮時，原生柴胡皂苷a、柴胡皂苷d會轉化為次生柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2，柴胡皂苷b2可抗炎、增強免疫、抑制脂肪分解、刺激PGE2合成[12]。

目前，對北柴胡的研究多集中在不同產地、不同加工方法與藥材質量的相關性，以及對炮制前后北柴胡飲片的藥效及質量評價研究，而北柴胡臨床制劑多為湯劑、散劑及顆粒劑，已失去原飲片所具有的顯微與性狀鑒別特征，即無法從傳統鑒別方法進行檢查與鑒別，不利于臨床用藥質量的控制。因此，對北柴胡及醋北柴胡的標準湯劑進行全面的質量控制與評價具有重要意義。

本研究收集具有代表性的20批北柴胡飲片，制備北柴胡與醋北柴胡標準湯劑各20批，對醋制前后標準湯劑的pH值及出膏率進行考察；建立北柴胡醋制前后標準湯劑HPLC指紋圖譜方法和多指標成分含量測定方法，并結合化學計量學和統計學方法對二者差異進行分析，以期建立科學和實用的北柴胡及醋北柴胡標準湯劑質量評價方法，為北柴胡與其醋制品相關制劑的鑒別和質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2030高效液相色譜儀，包括DGC-20A型在線脫氣系統，SIL-20A型自動進樣系統，UV檢測器，日本島津公司；AB135-S型1/10萬電子分析天平、AL204型1/1萬分之一電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司；KQ-500E型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；KES-W22CS208H型電陶爐，深圳市康佳智能電器科技有限公司；SCIENTZ-12N型冷凍干燥機，寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.2 試藥

對照品柴胡皂苷a（批號P03M9F50593，質量分數≥98%）、柴胡皂苷c（批號P17A8F41958，質量分數≥98%）、柴胡皂苷d（批號Z08A8L33357，質量分數≥98%）、柴胡皂苷b1（批號58558-08-0，質量分數≥97%）及柴胡皂苷b2（批號58316-41-9，質量分數≥95%），均購自上海源葉生物科技有限公司；乙腈、甲醇、磷酸，色譜級，賽默飛世爾科技有限公司；氨水，25%～28%，西隴科學股份有限公司；屈臣氏蒸餾水，廣州屈臣氏食品飲料有限公司。20批北柴胡飲片來源于河南省南陽市（S1～S5）、吉林省伊通縣（S6～S10）、山西省運城市（S11～S15）及陜西省（S16～S20）共4個產地，經長春中醫藥大學中藥鑒定教研室蔡廣知副教授鑒定，均來源于傘形科柴胡屬植物柴胡DC.的干燥根，信息見表1。

2 方法與結果

2.1 醋北柴胡飲片的制備

參照《中國藥典》2020年版四部[13]醋炙法（通則0213），取20批北柴胡飲片，加醋（每100 kg柴胡，加20 kg醋）拌勻，悶透3.5 h置炒藥機內炒至表面呈淡棕黃色，微有醋香氣，經檢測北柴胡和醋北柴胡飲片質量均符合《中國藥典》2020年版一部要求。

2.2 北柴胡及醋北柴胡飲片指標性成分含量測定

參照文獻方法[14-15]測定20批北柴胡及醋北柴胡飲片指標性成分含量，結果見表2。20批北柴胡飲片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質量分數分別為9.02～38.02、0.89～4.95、9.24～35.37、0.11～6.49、2.36～3.39 mg/g，均值分別為28.50、2.66、26.36、3.64、3.01 mg/g。20批醋北柴胡飲片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質量分數范圍分別為5.70～33.09、1.91～3.57、5.90～29.97、1.76～8.04、4.43～6.61 mg/g，均值分別為24.93、2.83、22.69、4.38、5.86 mg/g。

表1 北柴胡飲片樣品信息

Table 1 Information of prepared slices of B. chinense

樣品批號產地樣品批號產地樣品批號產地 S1Chj1-20170811河南省南陽市S8Chd3-20171013吉林省伊通縣S15Chj1-20170915山西省運城市 S2Chj1-20170812河南省南陽市S9Chd3-20171014吉林省伊通縣S1619010041陜西省 S3Chj1-20170813河南省南陽市S10Chd3-20171015吉林省伊通縣S1719010042陜西省 S4Chj1-20170814河南省南陽市S11Chj1-20170911山西省運城市S1819010043陜西省 S5Chj1-20170815河南省南陽市S12Chj1-20170912山西省運城市S1919010044陜西省 S6Chd3-20171011吉林省伊通縣S13Chj1-20170913山西省運城市S2019010045陜西省 S7Chd3-20171012吉林省伊通縣S14Chj1-20170914山西省運城市

表2 北柴胡飲片及醋北柴胡飲片中指標成分含量

Table 2 Content of index components in prepared slices of B. chinense and vinegar-processed B. chinense

樣品柴胡皂苷a/(mg?g?1)柴胡皂苷c/(mg?g?1)柴胡皂苷d/(mg?g?1)柴胡皂苷b1/(mg?g?1)柴胡皂苷b2/(mg?g?1) 北柴胡醋北柴胡北柴胡醋北柴胡北柴胡醋北柴胡北柴胡醋北柴胡北柴胡醋北柴胡 S131.2631.433.512.7028.1829.570.121.833.355.20 S232.9731.042.942.8229.6328.491.591.973.074.90 S332.9533.094.952.8328.9729.971.221.762.944.43 S431.8031.122.842.7528.7529.390.111.883.344.92 S531.0931.192.752.7027.5229.201.101.883.354.94 S637.7031.112.483.1334.5525.885.635.152.886.25 S738.0230.802.853.2035.3725.542.074.993.186.23 S837.6731.522.723.5732.3226.233.085.062.766.33 S937.5130.702.593.0132.0125.971.557.973.396.36 S1037.6330.732.643.5031.6725.992.868.042.366.46 S1135.0830.563.643.4334.0328.344.435.353.386.16 S1235.2630.462.903.3234.2628.834.607.203.356.47 S1335.1630.993.053.3134.6428.723.165.193.356.25 S1434.7131.193.373.3533.7129.364.727.133.356.61 S1535.1030.852.823.3233.8228.945.265.152.816.05 S169.075.700.901.919.365.905.933.592.536.20 S179.566.220.961.939.996.526.123.672.585.54 S189.435.740.891.939.845.906.493.592.815.15 S199.027.002.241.919.247.516.353.072.716.17 S209.067.082.191.929.307.596.453.162.786.54

2.3 北柴胡及醋北柴胡標準湯劑的制備

參照相關指導原則[16-17]中標準湯劑的制備方法，分別取20批北柴胡飲片100 g，浸泡30 min，武火轉文火煎煮2次，第1次加7倍量水煎煮30 min，第2次加6倍量水，煎煮20 min。經300目絹布趁熱濾過，合并2次濾液，進行分裝，?20 ℃預冷凍后，置于冷凍干燥機中冷凍干燥，即得北柴胡標準湯劑凍干粉，編號為CHD1～CHD20。同法制備醋北柴胡標準湯劑凍干粉，編號為VCHD1～VCHD20。

2.4 物性參數測定

2.4.1 pH值測定 分別測定各批次北柴胡及醋北柴胡標準湯劑pH值，結果見表3。20批北柴胡標準湯劑pH值范圍在7.95～8.27，均值為8.06，北柴胡標準湯劑顯堿性；20批醋北柴胡標準湯劑pH值范圍在6.70～7.87，均值為7.56，北柴胡醋制后標準湯劑pH值降低。

2.4.2 出膏率測定 出膏率以標準湯劑凍干粉量計，按公式出膏率＝標準湯劑凍干粉質量/飲片投料量。北柴胡標準湯劑和醋北柴胡標準湯劑出膏率計算結果見表3。結果表明，20批北柴胡標準湯劑出膏率范圍在12.02%～21.54%，均值為18.14%。20批醋北柴胡出膏率范圍在10.15%～20.45%，均值為17.11%，北柴胡醋制后標準湯劑出膏率降低。

表3 北柴胡及醋北柴胡標準湯劑pH值和出膏率

Table 3 pH value and ointment rate of CHD and VCHD

樣品pH值出膏率/%樣品pH值出膏率/%樣品pH值出膏率/% CHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHD S18.277.84 20.2120.09 S87.976.70 20.5319.46 S157.977.87 18.7818.45 S28.237.83 20.0020.15 S97.966.70 21.1418.86 S168.117.84 12.48 10.88 S38.167.84 19.9220.45 S107.976.70 20.3519.78 S178.107.85 12.46 10.15 S48.237.84 19.5219.68 S117.957.86 19.2618.07 S188.087.85 12.02 11.04 S58.197.86 20.0219.89 S127.967.85 18.5518.45 S198.097.84 13.25 10.53 S67.976.72 21.5419.38 S137.977.82 19.0517.68 S208.077.83 13.45 10.23 S77.966.71 21.0520.03 S147.967.86 19.1518.86

CHD-北柴胡標準湯劑 VCHD-醋北柴胡標準湯劑，圖2～4及表4、5同

CHD-standard decoction ofVCHD-vinegar-processed, same as figures 2—4 and tables 4, 5

2.5 北柴胡及醋北柴胡標準湯劑指紋圖譜研究

2.5.1 色譜條件 Thermo Hypersil Gold色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.01%磷酸水溶液，梯度洗脫：0～10 min，26%乙腈；10～65 min，26%～46%乙腈；65～90 min，46%～70%乙腈；檢測波長210 nm；體積流量1 mL/min；柱溫30 ℃；進樣量10 μL。色譜圖見圖1。

2.5.2 對照品溶液的制備 精密稱取柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2對照品適量，加甲醇溶解，制成含柴胡皂苷a 0.431 mg/mL、柴胡皂苷c 0.211 mg/mL、柴胡皂苷d 0.512 mg/mL、柴胡皂苷b10.266 mg/mL及柴胡皂苷b20.212 mg/mL的混合對照品儲備液，備用。

1-柴胡皂苷c 2-柴胡皂苷a 3-柴胡皂苷b2 4-柴胡皂苷b1 5-柴胡皂苷d

2.5.3 供試品溶液的制備 精密稱取各北柴胡及醋北柴胡標準湯劑凍干粉1 g，于具塞錐形瓶中，加入含5%濃氨試液的甲醇溶液25 mL，超聲30 min，濾過，用甲醇20 mL分2次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘渣加60%乙腈水溶液溶解，轉移至10 mL量瓶中，加60%乙腈水溶液至刻度，搖勻，0.22 μm微孔濾膜，濾過，即得。

2.5.4 精密度考察 取CHD1樣品溶液，按“2.5.1”項下色譜方法重復進樣6次，記錄色譜圖，以7號峰（柴胡皂苷a）為參照峰，計算各共有峰與參照峰的相對保留時間的RSD值均小于0.21%，相對峰面積RSD值均小于4.48%，表明儀器的精密度良好。

2.5.5 重復性考察 取同一批北柴胡標準湯劑凍干粉，按“2.4.3”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進樣，計算各共有峰與參照峰的相對保留時間的RSD值均小于0.74%，相對峰面積的RSD值均小于4.04%，表明該方法的重復性良好。

2.5.6 穩定性考察 取CHD1樣品溶液，分別于供試品溶液制備后0、4、8、12、24 h，按“2.5.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖，計算各共有峰與參照峰相對保留時間的RSD值均小于0.88%，相對峰面積的RSD值均小于3.79%，表明供試品溶液在室溫下24 h內穩定性良好。

2.5.7 指紋圖譜的建立 分別取北柴胡和醋北柴胡標準湯劑凍干粉，按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件分別依次進樣測定，記錄色譜圖信息。采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件（2012版）進行評價，設置CHD1號樣品色譜圖為參照圖譜，采用平均數法，進行多點校正和色譜峰匹配，經全譜峰匹配后得到北柴胡標準湯劑指紋圖譜（圖2-A）；同法設置VCHD1號樣品色譜圖為參照圖譜，建立醋北柴胡標準湯劑指紋圖譜（圖2-B）。建立的北柴胡標準湯劑和醋北柴胡標準湯劑的指紋圖譜，分別匹配了16個共有峰，通過對照品比對（圖1），指認了其中5個共有峰，峰4（柴胡皂苷c）、7（柴胡皂苷a）、9（柴胡皂苷b2）、10（柴胡皂苷b1）及13（柴胡皂苷d）。

圖2 北柴胡標準湯劑(A) 和醋北柴胡標準湯劑(B) 指紋圖譜

2.5.8 相似度評價 20批北柴胡標準湯劑（CHD1～CHD20）相似度計算結果為0.990、0.989、0.991、0.994、0.989、0.992、0.993、0.995、0.995、0.991、0.989、0.979、0.983、0.984、0.987、0.979、0.976、0.978、0.979、0.978；20批醋北柴胡標準湯劑（VCHD1～VCHD20）相似度計算結果為0.996、0.996、0.992、0.994、0.995、0.973、0.957、0.958、0.976、0.956、0.987、0.988、0.992、0.985、0.946、0.973、0.973、0.966、0.971、0.967，結果均大于0.90，表明北柴胡和醋北柴胡標準湯劑整體相似性均較好，所建立的指紋圖譜可用于北柴胡和醋北柴胡標準湯劑質量評價研究。

2.6 基于指紋圖譜的北柴胡與醋北柴胡標準湯劑差異性分析

2.6.1 主成分分析（principal component analysis，PCA） PCA是在盡可能保持原有數據信息的前提下，通過降維處理達到簡化指標的目的，目前已被廣泛用于中藥質量標準研究的數據統計分析中。以北柴胡和醋北柴胡標準湯劑指紋圖譜中的16個共有峰峰面積為變量，借助SIMICA 14.0軟件，采用無監督模式法PCA進行分析，北柴胡和醋北柴胡標準湯劑被分為2組，見圖3，表明北柴胡醋制前后標準湯劑質量存在一定差異。

2.6.2 正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal partial least square method-discriminant analysis，OPLS-DA） 為進一步找出影響北柴胡與醋北柴胡標準湯劑差異的主要變量，在PCA聚類結果基礎上，建立有監督模式識別分析法OPLS-DA模型，樣本得分矩陣見圖4-A，模型對自變量擬合指數2＝0.961，對因變量擬合指數2＝0.962，模型預測指數2＝0.945，說明該模型有較好的解釋能力和預測能力，可用于區分北柴胡和醋北柴胡標準湯劑。圖4-B為OPLS-DA模型的變量重要性投影值（variable importance in projection，VIP），VIP值的大小代表了各指標成分對模型貢獻率的大小，值越大貢獻越大，表明該色譜峰對于北柴胡和醋北柴胡標準湯劑的分類貢獻越大，同時也是導致北柴胡和醋北柴胡標準湯劑相區分的差異成分。以VIP＞1為界限進行篩選，結合北柴胡和醋北柴胡標準湯劑指紋圖譜中的16個共有峰峰面積檢驗分析，結果共確定7個差異性色譜峰，分別為峰1、4（柴胡皂苷c）、6、7（柴胡皂苷a）、9（柴胡皂苷b2）、10（柴胡皂苷b1）及13（柴胡皂苷d）。

圖3 PCA得分圖

圖4 OPLS-DA得分圖(A) 和VIP值(B)

2.7 北柴胡及醋北柴胡標準湯劑含量測定研究

2.7.1 線性關系考察 精密移取“2.5.2”項下各對照品溶液適量，稀釋成一系列不同質量濃度的對照品溶液，按照“2.5.1”項下色譜條件進行測定，以對照品質量濃度為橫坐標（），以對照品峰面積為縱坐標（）繪制標準曲線，進行線性回歸，得到5種成分的回歸方程，結果分別為柴胡皂苷a＝3 153.1－22 544，2＝0.999 6，線性范圍204.67～1228.00 μg/mL；柴胡皂苷c＝2 428.8－1 056.3，2＝0.999 4，線性范圍30.83～185.00 μg/mL；柴胡皂苷d＝3 431.6－4 363.2，2＝0.999 5，線性范圍150.83～905.00 μg/mL；柴胡皂苷b1＝2 576.0－435.47，2＝0.999 5，線性范圍6.65～133.00 μg/mL；柴胡皂苷b2＝2 620.1＋146.96，2＝0.999 3，線性范圍5.30～106.00 μg/mL。

2.7.2 精密度考察 取CHD1樣品溶液，按“2.5.1”項下色譜方法重復進樣6次，計算柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2峰面積RSD值分別為0.68%、2.00%、1.98%、2.00%、0.97%，表明儀器的精密度良好。

2.7.3 重復性考察 取同一批北柴胡標準湯劑凍干粉，按“2.5.3”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進樣，計算柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量RSD值分別為0.38%、3.07%、0.49%、1.78%、1.12%，表明該方法的重復性良好。

2.7.4 穩定性考察 取CHD1樣品溶液，室溫放置 0、2、4、8、12、24 h。按“2.5.1”項下色譜條件進樣，計算柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2峰面積RSD值分別為1.13%、0.95%、2.81%、1.01%、1.16%，表明供試品溶液在室溫下24 h內穩定性良好。

2.7.5 加樣回收率 取已知含量北柴胡標準湯劑凍干粉約0.5 g，精密稱定，共6份，按1∶1加入對照品，按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進行測定，計算柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2的平均回收率分別為97.63%、96.12%、97.00%、96.17%、96.71%，符合相關規定，表明方法準確度良好。

2.7.6 北柴胡及醋北柴胡標準湯劑指標成分的含量測定 分別取北柴胡和醋北柴胡標準湯劑凍干粉，按“2.5.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件測定并計算柴胡皂苷a，柴胡皂苷c，柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2的含量，結果見表4，20批北柴胡標準湯劑的柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質量分數分別為4.90～6.22、0.83～3.80、0.19～0.65、3.34～10.40、20.76～34.99 mg/g，均值分別為5.56、2.16、0.38、7.24、28.09 mg/g。20批醋北柴胡標準湯劑的柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質量分數范圍分別在3.21～6.09、0.58～3.38、0.08～0.54、5.31～10.79、21.07～49.67 mg/g，均值分別為4.30、1.67、0.17、8.10、31.81 mg/g。

表4 北柴胡及醋北柴胡標準湯劑中指標成分含量

Table 4 Multi-index components content of CHD and VCHD

批號柴胡皂苷a/(mg?g?1)柴胡皂苷c/(mg?g?1)柴胡皂苷d/(mg?g?1)柴胡皂苷b1/(mg?g?1)柴胡皂苷b2/(mg?g?1) CHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHDCHDVCHD S15.754.281.731.240.200.133.356.3220.8328.27 S25.633.611.651.160.190.124.266.6620.7621.07 S35.785.631.751.710.200.203.345.3120.8629.74 S46.205.902.242.140.210.204.136.6922.9122.15 S55.645.321.661.570.200.195.276.3120.8028.92 S65.733.591.550.720.470.166.248.1730.8124.13 S75.703.281.990.580.490.147.448.1631.5422.33 S86.223.482.200.620.560.167.776.1734.9923.45 S96.196.092.142.100.550.547.757.1934.8922.62 S105.543.212.000.580.430.146.729.1429.4121.89 S115.973.571.500.980.340.1010.409.2823.0629.76 S125.034.070.831.210.230.107.458.1525.5834.69 S135.513.451.221.170.290.088.378.2729.2428.63 S145.534.181.231.060.290.108.278.1629.4034.99 S155.054.191.350.780.260.107.569.1625.6835.24 S165.283.883.802.830.650.169.8110.7932.8338.86 S174.904.633.513.240.300.208.149.6830.0148.63 S185.193.943.602.910.560.159.459.6832.7839.76 S195.234.893.643.380.580.349.538.9032.7451.37 S205.164.753.603.370.560.159.509.7832.6549.67

2.7.7 北柴胡及醋北柴胡標準湯劑指標成分含量差異性分析 運用GraphPad Prism 8.0.1軟件，采用方差分析分別對北柴胡及醋北柴胡標準湯劑中5種指標成分含量進行統計學分析，＜0.05表示差異顯著，結果見表5。結果顯示，北柴胡醋制前后指標成分柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量均有統計學意義。北柴胡醋制后標準湯劑中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d含量較低，柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2含量較高（＜0.05）。

表5 北柴胡及醋北柴胡標準湯劑指標成分含量差異性分析(, n = 20)

Table5 Analysis of differences of index components in CHD and VCHD (, n = 20)

樣品質量分數/(mg?g?1) 柴胡皂苷a柴胡皂苷c柴胡皂苷d柴胡皂苷b1柴胡皂苷b2 CHD5.562±0.3992.160±0.9390.378±0.1607.238±2.17328.089±5.050 VCHD4.297±0.881*1.668±0.987*0.173±0.103*8.099±1.489*31.809±9.672*

與CHD比較：*＜0.05

*< 0.05CHD

3 討論

3.1 飲片的收集

北柴胡主產區和道地產區為陜西省，河北、河南、山西及吉林等地，本實驗收集的20批北柴胡來源于道地產區、主產區及集散地共4個產地，實驗取材在一定程度上能夠涵蓋藥材市場實際情況，使本實驗的標準湯劑具有較好的代表性，可用于后續質量評價研究。

3.2 指紋圖譜差異性分析

本研究分別建立北柴胡及醋北柴胡標準湯劑HPLC指紋圖譜，分別確認了16個共有峰，對指紋圖譜進行相似度評價，各批次相似度結果均良好。為進一步分析北柴胡與醋北柴胡標準湯劑，尋找二者差異性成分，本實驗引入化學計量學方法，通過PCA和OPLS-DA分析確定指紋圖譜中7個具有顯著差異的色譜峰，通過對照品指認峰4為柴胡皂苷c，峰7為柴胡皂苷a，峰9是柴胡皂苷b2，峰10為柴胡皂苷b1，峰13為柴胡皂苷d，峰1及峰6尚未知，后續將會進一步采用液質聯用手段對其進行鑒定，以便更好地對北柴胡及醋北柴胡標準湯劑進行質量控制。

3.3 含量測定差異性分析

北柴胡中皂苷類化合物是其主要化學成分，也是其發揮藥理藥效最重要的成分[18]。《中國藥典》、《香港中藥材標準》及各部分地方標準評價柴胡藥材多以柴胡皂苷a、柴胡皂苷d為質量檢測指標。中藥飲片是中藥制劑的原料藥，本研究對北柴胡飲片及醋柴胡飲片進行含量測定分析，北柴胡飲片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質量分數均值分別為28.50、2.66、26.36、3.64、3.01 mg/g。醋北柴胡飲片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2質量分數均值分別為24.93、2.83、22.69、4.38、5.86 mg/g。結果表明北柴胡飲片醋制后柴胡皂苷a、柴胡皂苷d含量下降，柴胡皂苷c含量無顯著變化、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量升高。

結合HPLC指紋圖譜差異分析，北柴胡及醋北柴胡標準湯劑中共7個差異性成分，為進一步驗證差異性結果，建立其中5個化學成分含量測定方法，對醋制前后標準湯劑含量結果對比分析研究。結果表明北柴胡醋制后標準湯劑中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d含量下降，柴胡皂苷b1、柴胡皂苷b2含量升高。

綜上研究表明，柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d、柴胡皂苷b1及柴胡皂苷b2含量在各工藝環節（飲片-醋制飲片-標準湯劑）均有變化，分析原因可能是醋制對各成分的含量存在影響，在質量傳遞過程中醋制北柴胡飲片可能會增強其有效成分的溶出，研究表明[19-20]柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d的苷元為環氧醚型，結構中含有13，28-環氧鍵，屬I型柴胡皂苷，在酸性環境中控制溫度等條件可使柴胡皂苷c轉化為柴胡皂苷h（II型柴胡皂苷）。同時有研究表明在水煎液中，柴胡皂苷a及柴胡皂苷d結構中13和28號位的氧醚環結構易斷裂，柴胡皂苷a、柴胡皂苷d會轉化為柴胡皂苷b1（II型柴胡皂苷）、柴胡皂苷b2（II型柴胡皂苷），柴胡皂苷d結構不穩定，會轉化為大量的柴胡皂苷b2，柴胡皂苷a相對于柴胡皂苷d較穩定，但柴胡皂苷a在中性環境中轉化產物主要是羥基柴胡皂苷a，且羥基柴胡皂苷a會轉化為柴胡皂苷b1，這與現有研究結果相一致[21-22]。

北柴胡醋制后對二甲苯所致大鼠耳腫脹有拮抗作用[23-24]，同時能減輕CCl4造成的小鼠肝損傷，降低小鼠體內的谷草轉氨酶轉氨酶和谷丙轉氨酶。文獻報道[25]，柴胡皂苷b2具有同樣藥理活性，此外還具有抗凋亡[26]、抗腫瘤[27]、抗病毒[28]等藥理作用。由本研究結果推測，II型柴胡皂苷可能是發揮藥理作用的重要成分，I型柴胡皂苷向II型柴胡皂苷的轉化可能是引起北柴胡標準湯劑和醋北柴胡標準湯劑差異的主要原因之一，建議對二者質量控制時應考慮對I、II型柴胡皂苷的測定。

3.4 小結

中藥飲片標準湯劑作為臨床制劑的標準參照物，為衡量中藥配方顆粒是否與臨床湯劑基本一致的物質基準，用來標準化不同的臨床用藥形式，保障用藥的準確性和劑量的一致性，具有重大的現實意義。

北柴胡與醋柴胡的標準湯劑作為相關成型制劑與傳統湯劑的中間橋梁，在配方顆粒、中成藥、經典名方等制劑生產過程有著十分重要的地位。本研究從北柴胡及醋北柴胡標準湯劑的pH值、出膏率、HPLC指紋圖譜和多指標成分含量測定方法入手，全面對二者質量進行分析，建立了科學和實用的北柴胡及醋北柴胡標準湯劑質量評價方法，為二者相關制劑的鑒別和質量控制提供參考。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Quality difference analysis of standard decoction ofand vinegar-processed

SONG Chi, GE Wei, ZOU Jia-li, WANG Yue, TAN Juan-juan,GONG Ji-yu

College of Pharmacy, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China

To establish the quality evaluation method and investigate the quality differences of standard decoction of Chaihu () (CHD) and vinegar-processed(VCHD).Twenty batches of CHD and VCHD samples were prepared, the extract rates and pH were determined, respectively. Chromatographic fingerprints and multi-index content determination method of CHD and VCHD were generated from thehigh performance liquid chromatography (HPLC) and the quality differences were analyzed using the method of chemometrics and statistics.The extract rates and pH value of VCHD standard decoction was decreased. The fingerprints of the CHD and VCHD were established, a total of 16 common peaks were determined respectively, and five peaks were identified; The similarity of CHD and VCHD were 0.976—0.995 and 0.946—0.996, respectively. A clear classification among CHD and VCHD sample was observed in the score plot of the principal component analysis (PCA), then seven marker compounds were selected and identified by orthogonal partial least square discriminant analysis (OPLS-DA), including peaks 1, 4 (saikosaponin c), peaks 6, 7 (saikosaponin a), peak 9 (saikosaponin b2), peak 10 (saikosaponin b1), and peak 13 (saikosaponin d). Multiple-index content determination results showed that there was significant difference in the content of index components before and after vinegar processing of CHD (< 0.05). The contents of saikosaponin a, saikosaponin c and saikosaponin d were lower. Besides, saikosaponin b1and saikosaponin b2was higher in the standard decoction of VCHD.A scientific and practical quality evaluation method of CHD and VCHD was established, which also provided a reference for the identification and quality control of related preparations ofand its vinegar-processed products.

DC.; vinegar-processing; standard decoction; chromatographic fingerprints; orthogonal partial least squares-discriminant analysis;saikosaponin;quality control

R283.6

A

0253 - 2670(2022)08 - 2331 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.08.009

2021-11-06

國家中藥標準化項目（ZYBZH-Y-JL-25）；吉林省科技發展計劃項目（20210204078YY）

宋 馳（1998—），女，碩士研究生，研究方向為中藥分析學。E-mail: 2697733699@qq.com

貢濟宇，教授，博士生導師，主要從事中藥分析學研究。E-mail: gjy0431@126.com

[責任編輯 鄭禮勝]