槐定堿微球的質量評價

王瑞琳，樊彥會，侯偉娜，董雪婷

哈爾濱商業大學英才學院(哈爾濱 150076)

槐定堿(Sophoridine，SR)是從豆科植物苦豆子和山豆根中獲得的單一生物堿。槐定堿有抗心律失常，抗腫瘤微生物和肉毒素等藥理作用[1]。在藥理研究和臨床試驗中，槐定堿對肺癌、絨癌、惡性葡萄胎和消化道癌有一定治療作用[2-3]，槐定堿注射液作為一種新型廣譜抗癌藥物，在臨床試驗中發現其在體內分布廣泛，消除快，因而限制了其臨床應用。隨著研究的深入，其新劑型越來越多。制備槐定堿微球可以提高槐定堿的耐藥性，延長槐定堿藥物在體內的作用時間，從而提高抗癌效果，同時，槐定堿微球新劑型的研究也可以為生物堿的開發利用提供實驗數據。

1 實驗材料

1.1 藥物與試劑

槐定堿(純度>98%)、槐定堿對照品(純度>98%)、殼聚糖(脫乙酰度95%，黏度100～200mpa)、司盤80(分析純度)、戊二醛50%(分析純度)、液體石蠟、異丙醇(分析純度)、甲醇(色譜純)。

1.2 實驗儀器

KH-35A電恒溫干燥箱；AXTGL18M安信離心機；Waters 1525高效液相色譜儀；QUANTA-200型掃描電鏡；FTIR-650傅里葉變換紅外光譜儀；BL-22顯微鏡；79-2型雙向磁力攪拌器。

2 實驗方法

2.1 槐定堿微球制備

通過查閱相關文獻[4-6]，用乳化交聯法制備槐定堿微球。制備工藝[7]如下：精密量取一定量的液體石蠟和0.63g乳化劑司盤-80，將兩種試劑作為油相放入燒杯中，在40℃下用磁力攪拌器將其混合均勻。取殼聚糖50mg于燒杯中，用稀醋酸溶解，靜置脫氣。將40mg槐定堿原料藥溶于水，與殼聚糖混合，用磁力攪拌器將其混合均勻，作為水相。磁力攪拌器升溫至40℃后，將水相緩慢加入油相。乳化30min后加入0.3mL戊二醛固化，交聯3.5h。靜置后，取該溶液的上清液，用丙酮洗滌后再過濾。將上清液和洗滌液混合后得到合并液，洗滌后部分干燥得到微球。在制備槐定堿微球時，油相和水相的比例為3∶1。

2.2 制劑學評價

2.2.1 形態、粒徑及粒徑分布 在電子顯微鏡下觀察槐定堿微球的形態，采用顯微計數法[8]，計算槐定堿微球的平均粒徑[9]，統計其粒徑分布。

2.2.2 紅外光譜測定 對槐定堿原料藥、空白殼聚糖微球、槐定堿微球、槐定堿與空白殼聚糖微球物理混合物的紅外光譜進行測定并比較。

2.2.3 差示掃描量熱測定 機器預熱15min，用兩個空白鋁坩堝平衡機器，分別取適量樣品粉末(槐定堿、空白殼聚糖微球、槐定堿微球)約3～5g，輕輕放入右側坩堝中測量。分析氣體：氮氣，升溫速度：10℃/min，掃描范圍：25～250℃[10]。

2.2.4 外釋放度考察 色譜條件：色譜柱：Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)，流動相：0.05mol/L，磷酸二氫鉀(含0.2mL/L三乙胺)溶液-乙腈(90∶10)，流速：1mL/min，柱溫：30℃，進樣量：10μL，檢測波長：208nm。

2.2.5 穩定性初步考察 以光照、溫度和濕度為變量對槐定堿微球進行影響因素試驗；以槐定堿微球的外觀、包封率和載藥性為指標對其進行穩定性試驗和加速試驗。

3 實驗結果與分析

3.1 形態、粒徑及粒徑分布

槐定堿微球的形態如圖1所示(A、B為不同倍數下槐定堿微球樣品的SEM圖)，其球形圓整，分散性良好。由圖2微球的粒徑分布直觀圖可以看出微球的直徑大多數為4～12μm，利用顯微計數法測定約500個粒子粒徑，計算平均粒徑=8.951μm。

圖1 微球的粒徑分布直觀圖

圖2 微球的粒徑分布直觀圖

3.2 槐定堿紅外光譜

由圖3可看出槐定堿原料藥在1622cm-1處有明顯的槐定堿特征峰(三級酞胺Ⅰ帶峰)；殼聚糖在3429.74cm-1有CS的主要吸收峰(O-H伸縮)，經比較，槐定堿微球的圖譜與空白殼聚糖微球的圖譜一致，未出現槐定堿的特征峰，存在殼聚糖主要特征吸收峰，而物理混合物中槐定堿特征峰與殼聚糖特征峰均明顯，且無新峰生成、無峰位移。說明槐定堿被殼聚糖微球包進微球里，包裹的方式為機械包裹，兩者未發生化學變化。

圖3 槐定堿原料藥、槐定堿殼聚糖微球、殼聚糖空白微球、槐定堿與空白微球混合物的紅外光譜圖

3.3 差示掃描量熱法測定結果

由圖4的DSC圖譜可以看出，槐定堿原料藥在100～125℃間有吸熱峰，且峰形明顯，空白殼聚糖微球和載藥殼聚糖微球均在50～100℃間有吸熱峰，將槐定堿原料藥和槐定堿微球的吸熱峰位置作比較，槐定堿微球在100～125℃間無槐定堿原料藥吸熱峰出現，即槐定堿被殼聚糖微球物理包埋。

圖4 DSC圖譜

3.4 體外釋放度考察結果

通過專屬性實驗、精密度實驗、穩定性試驗、加樣回收率實驗，表明槐定堿微球的專屬性、精密度、穩定性均良好，由體外釋放度實驗數據可知槐定堿原料藥釋放速率很快，4h內基本釋放完全，而槐定堿微球在初期快速釋放，半個小時后釋放緩慢，24h內累計釋放量近75%，結果比較，說明槐定堿微球具有緩釋作用。

3.5 初步穩定性結果

通過研究光照、溫度、濕度對微球穩定性影響，得出槐定堿微球應在室溫環境中避光且干燥的條件下保存。將載藥微球置于密閉容器內，室溫放置三個月后，微球的外觀、包封率、載藥量和粒徑基本無變化，說明微球可以在室溫下密封保存。

4 結語

實驗以殼聚糖為載體將槐定堿制備成槐定堿微球，通過殼聚糖的修飾增了強靶向性，槐定堿與微球相互包埋減少了藥物的毒性，提高了藥物的穩定性。通過最優處方制備的槐定堿微球穩定性和分散性良好，體外釋放實驗表明槐定堿微球具有緩釋作用，可減少用藥周期。槐定堿微球的制備為臨床提供了一種低毒高效的靶向制劑，也為生物堿單體的用藥方式提供了可靠的經驗。