病理常規(guī)HE切片質(zhì)量問題原因及措施

楊陽

關(guān)鍵詞：病理學(xué)檢測(cè);HE切片;質(zhì)量問題;發(fā)生原因;處理措施

【中圖分類號(hào)】 G644.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A ? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）06--01

Key words：pathological detection;HE section;quality problem;cause of occurrence;treatment measures

HE切片其實(shí)就是應(yīng)用蘇木精-伊紅染色切片，輔助病理科進(jìn)行相關(guān)檢查，屬于最常見制作組織切片方法，更是真實(shí)顯現(xiàn)人體病變組織真實(shí)情況的重要環(huán)節(jié)[1]。從實(shí)際檢驗(yàn)可發(fā)現(xiàn)，HE切片質(zhì)量水平直接影響病理診斷準(zhǔn)確性與可靠性。在病理檢驗(yàn)期間，相關(guān)人員必須遵循嚴(yán)格要求采集病變組織，并對(duì)組織進(jìn)行準(zhǔn)確染色，制作相應(yīng)切片，才能保障切片實(shí)際質(zhì)量[2]。但從實(shí)際工作可發(fā)現(xiàn)，部分病理科工作人員的工作經(jīng)驗(yàn)較少，日常操作存在不當(dāng)現(xiàn)象，經(jīng)常有染色不均、模糊不清、薄厚不均、對(duì)比不明顯等多種不良現(xiàn)象，所以最終病理學(xué)診斷結(jié)果受到影響。本文主要分析病理常規(guī)HE切片質(zhì)量問題原因及措施，報(bào)道內(nèi)容如下。

1.資料與方法

1.1臨床資料

2020年7月到2021年12月，選取進(jìn)行病理常規(guī)檢查的HE切片5000張進(jìn)行研究，包含胃鏡標(biāo)本1421張，穿刺標(biāo)本2001張，宮頸活檢標(biāo)本987張，其他標(biāo)本591張。

HE切片使用標(biāo)準(zhǔn)[3]如下，（1）切片完整性較好，厚度處于4-6μm，切片薄厚度相對(duì)均勻，無刀痕、褶皺存在;（2）細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)染色分明，潔凈透明，紅藍(lán)顏色濕度，封固相對(duì)美觀，觀察難度偏低，可輔助臨床進(jìn)行準(zhǔn)確診斷。

1.2方法

HE切片質(zhì)量問題，（1）蘇木精染色過淡：蘇木精染色比較淡，所以細(xì)胞核染色有蒼白以及暗淡等多種表現(xiàn)。多因蘇木精染色期間液體在切片上的停留時(shí)間偏短、蘇木精有過度氧化問題、分化時(shí)間偏長(zhǎng)等問題發(fā)生，繼而影響蘇木精染色問題，無法滿足HE切片的使用標(biāo)準(zhǔn)。（2）伊紅著色偏淡：應(yīng)用伊紅溶液時(shí)，溶液PH值超出相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)要求，或因染色期間的藍(lán)化液過度殘留、切片過薄、乙醇脫水時(shí)間過長(zhǎng)等原因?qū)е隆＃?）脫蠟后有白色斑點(diǎn)：切片烤片這一環(huán)節(jié)中有持續(xù)時(shí)間不足、溫度偏低、切片并未充分烤干、切片中的二甲苯停留時(shí)間偏短、二甲苯應(yīng)用時(shí)間過長(zhǎng)，最終導(dǎo)致切片脫蠟不完全，導(dǎo)致脫蠟后的切片有白色斑點(diǎn)形成。（4）細(xì)胞核顏色改變：主要指細(xì)胞核存在紅色改變或是棕色改變這一現(xiàn)象，多因蘇木精染色液存在過度氧化現(xiàn)象，或?qū)嶋H應(yīng)用蘇木精進(jìn)行染色時(shí)存在切片返藍(lán)不足，或因伊紅染色問題誘發(fā)伊紅溶液覆蓋細(xì)胞核問題。（5）蘇木精染色偏深：實(shí)際染色過程中，有蘇木精染色過度偏深現(xiàn)象，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)位置受到擠占。導(dǎo)致該質(zhì)量問題發(fā)生的原因較多，如病理厚度超標(biāo)、切片在蘇木精染色這一環(huán)節(jié)的停留時(shí)間過長(zhǎng)、蘇木精的PH值偏高、切片及細(xì)胞質(zhì)共染。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究涉及的計(jì)數(shù)資料與計(jì)量資料錄入SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。

2.結(jié)果

500張切片中，一共有23張HE切片發(fā)生質(zhì)量問題。見表一。

3.討論

本文統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示，共有23張切片出現(xiàn)質(zhì)量問題，問題類型一共有五種。（1）蘇木精染色過淡：發(fā)生該問題后，及時(shí)實(shí)施切片重新染色，適當(dāng)延長(zhǎng)蘇木精的浸泡時(shí)間，縮短切片分化時(shí)間，還可利用濃度1.5%的醋酸溶液重新調(diào)整切片PH值，增強(qiáng)蘇木精的細(xì)胞核染色針對(duì)性，減少細(xì)胞質(zhì)共染現(xiàn)象的發(fā)生。（2）伊紅著色偏淡：針對(duì)這一問題，切片染色之前需提前測(cè)試伊紅溶液的實(shí)際PH值，保證數(shù)值<5，盡可能將PH值控制在4.6-5.0范圍中，保證染色效果達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。所所用伊紅染色屬于水溶性液體，容易被外界影響，比如殘留自來水混入、醋酸溶液揮發(fā)等，均可升高伊紅溶液的PH值，對(duì)實(shí)際著色效果造成影響，所以可將這類伊紅溶液更換成濃度0.2%的醋酸化伊紅醇溶液，并在染伊紅之前給予濃度95%的乙醇溶液浸泡。但切片必須進(jìn)行充分藍(lán)化，有效清除弱堿性溶液，然后進(jìn)行下一步檢測(cè)操作。在獲取切片后，還需檢查切片厚度，及時(shí)發(fā)現(xiàn)切片太薄這一問題，預(yù)防乙醇脫水時(shí)間過程導(dǎo)致的顏色稀釋問題。（3）脫蠟后有白色斑點(diǎn)：為預(yù)防該質(zhì)量問題的發(fā)生，需保證切片烘烤時(shí)間充足，有效清除切片中存在的水分。若存在切片烘烤時(shí)間超長(zhǎng)現(xiàn)象，切片有一定幾率發(fā)生脫落問題，后續(xù)進(jìn)行處理是難以補(bǔ)救的，只能更換新的切片。給予二甲苯進(jìn)行脫蠟時(shí)，必須保證時(shí)間充足。若有脫蠟不完全現(xiàn)象，可進(jìn)行適當(dāng)加溫或適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間，用于脫蠟環(huán)節(jié)的二甲苯必須定時(shí)更換，比如500ml二甲苯的切片處理量不能超過500張。（4）細(xì)胞核顏色改變：為預(yù)防該質(zhì)量問題，需提前做好蘇木精質(zhì)量檢查。若有過度氧化現(xiàn)象或是變質(zhì)現(xiàn)象發(fā)生，及時(shí)更換成質(zhì)量合格的蘇木精，染色期間必須提供返藍(lán)溶液浸泡，保證藍(lán)化時(shí)間合格且充足。（5）蘇木精染色偏深：發(fā)生該問題后分析原因并針對(duì)性處理，如切片過厚則需重新切片，非切片過厚導(dǎo)致則需進(jìn)行重新染色。

由上可知，明確HE切片質(zhì)量問題的發(fā)生原因并預(yù)防，可提升切片質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)：

[1]徐立，胡瑞斌，李兆波，等.STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠胰腺及肝臟石蠟切片HE染色改進(jìn)方法[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2019，35（9）：1122-1124.

[2]陳余朋，張聲，唐堅(jiān)清.加熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)技術(shù)對(duì)HE染色淋巴瘤核固縮的影響[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2021，37（1）：104-106.

[3]菅曉婷，付超，岳丹，等.實(shí)驗(yàn)小鼠脂肪組織石蠟切片制作方法的改進(jìn)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2020，36（6）：742-743.