南海區第五人民醫院2014-2019年839株流感嗜血桿菌耐藥模式及流行特點研究

孔燕南 林錦喜 王孔專 陳影芳 奚克勤

528231南海區第五人民醫院檢驗科1，廣東佛山

528231南海區第五人民醫院腎內科2，廣東佛山

流感嗜血桿菌(HI)是常見的一類定植菌，主要存在于人體的口咽部、鼻咽部，是兒童社區獲得性感染的主要病原菌，主要的感染群體為兒童，可以通過原發和繼發感染。流感嗜血桿菌可以造成兒童肺炎、上呼吸道感染，進而引起敗血癥、腦膜炎，嚴重威脅兒童的健康。治療主要以抗菌藥物治療為主，但是由于抗菌藥物的廣泛應用，導致流感嗜血桿菌的耐藥性不斷上升，同時對于不同抗菌藥物的耐藥模式也發生了較大的改變[1]。本研究旨在了解南海區第五人民醫院HI 感染及菌株耐藥現況，為臨床治療提供依據，并了解其分子流行病學特征，對建立本地區流感嗜血桿菌的流行病學資料、推廣疫苗接種，建立流感嗜血桿菌防治的長效機制，形成以預防為主，防治結合的大健康診療模式具有重要意義[2]。本文通過對南海區第五人民醫院檢測出的839 株流感嗜血桿菌進行耐藥模式和流行病學特點的研究，為臨床診療和院內感染防治提供依據，現報告如下。

資料與方法

選取2014年1月-2019年12月南海區第五人民醫院檢驗科檢出的流感嗜血桿菌的菌株839株，其中來自男性531株；女性308株。患者年齡12天～106歲，其中≤1個月15株；1個月～11歲688株，＞11歲136株。

標本來源：全部839 株流感嗜血桿菌標本中有834株來自于呼吸道標本，占樣本總量的99.40%；來自分泌物培養的標本5株，占樣本總量的0.60%。

納入標準：①患者有明顯的呼吸道感染癥狀，臨床診斷支氣管炎、肺炎。②患者簽署相應的知情同意。③經醫院倫理委員會批準，可以開展研究。

排除標準：①合并免疫缺陷、血液系統腫瘤等疾病；②已有明確的細菌、病毒等感染者。

方法：①細菌常規培養鑒定：采集的咽拭子標本或者痰液標本經過處理后接種于血瓊脂平板和不加抗生素的巧克力平板，培養在濃度為5%的CO2環境中，保持溫度在35℃培養箱中，培養時間為48 h，觀察菌落的生長形態和生長特點。根據菌落形態、生長特點及對X 因子、V 因子的需求進行HI 鑒定[3]。②藥敏試驗：采用瓊脂擴散敏感試驗(K-B 法)和法國梅里埃嗜血桿菌和布蘭漢球菌藥敏試劑盒(ATB HAEMO)進行藥敏試驗(微量稀釋法)，分別進行氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢克洛、頭孢呋辛、頭孢噻肟、四環素、氯霉素、復方新諾明、利福平、氧氟沙星等10 種藥物的敏感性測定，根據CLIS 規定的試驗要求來判定試驗結果，采用菌株為ATCC49247 作為質控菌株[4]。③β-內酰胺酶測定：用頭孢硝噻吩紙片檢測流感嗜血桿菌菌株的β-內酰胺酶產生情況。試紙由淡黃色變成紅色，表示為β-內酰胺酶陽性；不變色，則為陰性，在試驗中設置陰性對照。

觀察指標：比較流感嗜血桿菌在不同季節的分布情況；統計檢出的流感嗜血桿菌在不同性別及年齡的分布情況；比較流感嗜血桿菌對常用10 種抗生素的敏感及耐藥情況。

統計學方法：數據應用SPSS 20.0 統計學軟件分析；計數資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗；計量資料以(±s)表示，采用t檢驗；P＜0.05 表示差異有統計學意義。

結果

流感嗜血桿菌在不同季節的分布情況比較：在2014年1月-2019年12月連續6年，按照月份分布，流感嗜血桿菌3～5月分離菌株數最多，共410 株(48.87%)。不同月份流感嗜血桿菌分離菌株數見圖1。按季節分布，春季(3～5月)最多，共410 株(48.87%)，其次為冬季(12月，1月，2月)和夏季(6～8月)，分別為139 株(16.56%)和187 株(22.29%)，而秋季最少，為103株(12.28%)。

圖1 流感嗜血桿菌月份分布圖

性別及年齡分布比較：檢出的流感嗜血桿菌的菌株839 株，其中來自男性531 株，占63.29%；女性308 株，占36.71%。患者年齡12 天～106 歲，以兒童感染者居多，共703 例，占83.79%，其中≤1 個月15株，占1.79%，1 個月～11 歲688 株，占98.21%，＞11歲136株，占16.21%[5-6]。

流感嗜血桿菌對常用10 種抗生素的敏感及耐藥情況：在所檢測的10 種抗生素中，根據CLIS 規定的試驗要求來判定試驗結果，結果利福平、氯霉素和阿莫西林/克拉維酸、四環素、頭孢噻肟、氧氟沙星、頭孢呋辛的敏感度較高外，其他抗生素有較大程度的耐藥性。氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢克洛、頭孢呋辛、頭孢噻肟、四環素、氯霉素、復方新諾明、利福平、氧氟沙星等10種藥物[7]。見表1。

表1 流感嗜血桿菌對常用10種抗生素的敏感率和耐藥情況比較[n(%)]

討論

流感嗜血桿菌寄居于人類上呼吸道黏膜，往往引起呼吸道感染、肺炎，嚴重的還會引起腦膜炎，甚至敗血癥等嚴重疾病，特別是免疫系統未發育完全的嬰幼兒和免疫力低下的成年人更易感染。除了引起呼吸道本身感染以外，還可能感染骨骼、循環系統、結膜、腦膜等，引起局部和全身的感染。同時，由于近幾年環境污染加劇，以及抗菌藥物的濫用，導致流感嗜血桿菌的感染率耐藥率亦逐年上升，給臨床治療帶來難度，嚴重威脅人民群眾的身體健康[8]。

季節分布顯示，春季(3～4月)是流感嗜血桿菌感染的高發季節，其中3月和4月是春季發病的高峰月份，這與國內其他地區的研究結果相似，均好發于春季。但與其他地區6年來流感嗜血桿菌高發的月份比較，存在提前或推后的現象，考慮可能是不同地區和不同年份的氣候變化有一定關系，同時還由于研究的樣本大小不同，對結果也會產生一定影響。同時，歐美一些國家，包括澳大利亞在內的南半球國家的研究顯示，流感嗜血桿菌的發病高發季節均為春季或冬季，與本研究基本一致。

本組HI菌株來源男性患者的比例明顯高于女性，與國內其他地區和國外的研究結果類似，但是目前無相應研究對其發生機制進行闡述。

傳統的診療規范對于流感嗜血桿菌的感染治療首選的藥物是氨芐西林。近幾年，隨著抗生素的使用強度不斷增加，流感嗜血桿菌對耐氨芐西林耐藥率逐漸上升，耐藥程度不容忽視。

β 內酰胺酶陽性的流感嗜血桿菌，對頭孢菌素類仍然有很強的敏感性。盡管第二代頭孢菌素頭孢克洛耐藥性較高，但頭孢呋辛仍然有較高的敏感率，其毒性小、經濟可作為治療流感嗜血桿菌感染的首選。第三代頭孢菌毒素頭孢噻肟和含酶抑制劑阿莫西林/克拉維酸有很高的敏感率，臨床應根據藥敏結果合理使用抗生素[9-10]。

綜上所述，南海區第五人民醫院2014-2019年839 株流感嗜血桿菌耐藥模式及流行特點研究表明，流感嗜血桿菌主要的發病季節為春季，發病人群年齡集中于兒童。對其進行藥敏試驗，表明傳統的氨芐西林耐藥性不斷升高，耐藥模式的試驗表明，二代頭孢菌素仍然具有較高的藥物敏感度，可作為臨床治療的首選藥物。