轉化生長因子-β1基因多態性與晚期食管鱗癌預后的相關性研究

劉艷春，梁 立，孟立寧，楊 曼，陳宏洋，韓愛勇，岳燕軍

食管鱗癌是消化道惡性腫瘤，流行病學調查顯示，食管鱗癌發病率及病死率與日俱增，已嚴重影響人民健康[1]。目前60%～70%的食管鱗癌患者確診時已達中晚期，失去了根治性手術的機會[2]。晚期食管鱗癌治療以放療或放療聯合化療為主，而不同個體對放化療的敏感度不同，因此患者預后也存在一定差異[3]。尋找敏感生物學標志物對晚期食管鱗癌患者的個體化治療具有重要意義[4]。轉化生長因子-β1(TGF-β1)是人體重要的細胞調控因子，參與調控多種病理生理過程[5]。研究顯示，TGF-β1信號通路上多位點與食管癌、胃癌等多種惡性腫瘤的易感性存在關聯[6]。本研究擬探究TGF-β1基因多態性與晚期食管鱗癌預后的相關性，旨在分析其預測晚期食管鱗癌預后的效果。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月—2020年6月我院收治的108例晚期食管鱗癌，其中男70例、女38例，年齡18～79(58.12±10.34)歲。納入標準：符合食管癌診斷標準[7]，經內鏡及組織病理學檢查確診為食管鱗癌；無手術指征，接受放療或放療聯合化療；年齡≥18歲，首次發病；預計生存時間≥3個月，卡氏功能狀態評分≥60分；獲得有效隨訪，臨床資料完整。排除標準：患有其他惡性腫瘤者；合并自身免疫性疾病者；伴嚴重肝、腎等臟器功能不全者；合并活動性消化道出血、嚴重腸道感染、休克者；未按治療方案規律治療及復查者。

1.2治療方法 108例接受單純放療者63例，放療聯合化療者45例。所有患者放療每周5次，每次劑量1.8 Gy或2.0 Gy，總劑量40.0～74.0 Gy?；熕幬餅轫樸K、紫杉醇或5-氟尿嘧啶，主要采用紫杉醇加順鉑化療方案：紫杉醇40～50 mg/m2、順鉑25～30 mg/m2，每周1次，共治療5～6周。

1.3TGF-β1基因型檢測 患者入院后收集外周血2 ml，使用聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態性檢測TGF-β1基因型。提取總DNA，擴增目的基因序列，上游引物序列5'-3'：CAGACTCTAGAGACTGTCAG；下游引物序列5'-3'：GTCACCAGAGAAAGAGGAC。PCR擴增反應體系均為25 μl，其中含10×PCR Buffer 2.5 μl，2.5 mmol/L dNTPs 2.0 U，模板DNA為200 ng，TaqDNA聚合酶1.25 U，不足體積用滅菌雙蒸水補足至25 μl。置熱循環儀中94 ℃預變性5 min；再按下列程序循環35次，即94 ℃變性40 s、56 ℃退火1 min、72 ℃延伸1 min；末次循環后，72 ℃延伸5 min。酶切體系包括TGF-β1基因-509C/T位點擴增產物10 μl，用限制性內切酶Bsu36Ⅰ6 U于37 ℃水浴酶切3 h。TGF-β 1基因-509C/T位點酶切產物用2%瓊脂糖凝膠電泳-溴乙啶染色法檢測，DNA標準物為DL-2000 Marker。

1.4研究方法 患者出院后每3個月門診隨訪1次，并行彩超或CT等檢查，隨訪時間12個月，記錄患者復發率、轉移率和生存率。收集患者相關基線資料，分析影響晚期食管鱗癌患者預后的因素。

2 結果

2.1患者預后分析 108例隨訪期間死亡8例，局部進展9例，遠處轉移11例，共28例(25.93%)納入預后不良組；80例(74.07%)無進展生存，納入預后良好組。

2.2預后良好組和預后不良組基線資料比較 預后不良組年齡大于預后良好組,AJCC分期為Ⅳ期、淋巴結轉移數>2枚、TGF-β1 CT/TT基因型患者占比顯著高于預后良好組(P<0.05)，見表1。

表1 不同預后晚期食管鱗癌患者基線資料比較[例(%)]

2.3影響晚期食管鱗癌患者預后的多因素Logistic回歸分析 將晚期食管鱗癌患者預后不良作為因變量，將上述存在差異的單因素作為自變量，行多因素Logistic回歸分析，量化賦值見表2。結果顯示，年齡、AJCC分期、淋巴結轉移數、TGF-β1基因型是晚期食管鱗癌患者預后的影響因素(P<0.05，P<0.01)。見表3。

表2 影響晚期食管鱗癌患者預后的多因素Logistic回歸分析量化賦值表

表3 影響晚期食管鱗癌患者預后的多因素Logistic回歸分析

3 討論

食管癌具有較高的病死率，患者預后一般較差，國內食管癌病死率位居惡性腫瘤死因的第四位，病理類型以鱗癌為主[8-10]。放化療是治療晚期食管癌的主要方式，對改善患者預后具有重要意義[11]。但不同個體對放化療的敏感程度不同，因此患者預后也存在較大差異[12]。多項研究證實，單核苷酸多態性是影響個體間不同預后及放化療敏感性的重要遺傳學基礎[13]。研究顯示，TGF-β1基因多個單核苷酸位點與食管癌的易感性、患者生存時間及臨床分期密切相關[14]。

本研究結果顯示，預后不良組TGF-β1 CT/TT基因型患者占比顯著高于預后良好組，TGF-β1基因型為晚期食管鱗癌預后的影響因素。TGF-β1基因處于第19號染色體長臂上，具有多種生物學作用[15]。分子生物學研究顯示，TGF-β1基因第1外顯子多態性可使TGF-β1的正常轉錄和表達受限，進而影響相關疾病的發生、發展和轉歸[16]。腫瘤細胞經放射線照射后，TGF-β1基因表達會呈現升高趨勢，通過降低TGF-β1受體蛋白表達水平及放射線對核糖核酸的損傷修復，從而增加腫瘤細胞對放療的敏感性[17]。研究顯示，T等位基因為消化道腫瘤的遺傳易感基因，攜帶T等位基因的個體可促進TGF-β1的高度表達，對患者預后不利[18]。

本研究結果顯示，預后不良組年齡大于預后良好組,AJCC分期為Ⅳ期、淋巴結轉移數>2枚的患者占比顯著高于預后良好組，且年齡、AJCC分期及淋巴結轉移數是晚期食管鱗癌患者預后的影響因素，與白文文等[19]研究結果相似。食管黏膜及黏膜下層含有豐富的毛細淋巴管網，因此食管癌患者出現淋巴結轉移風險較高，羅何三等[20]研究顯示，淋巴結轉移數、轉移度及轉移區域數均是影響食管癌預后的重要因素。AJCC分期與腫瘤浸潤、分化、淋巴轉移等病理程度相關，是臨床治療方案選擇和預后判斷的重要依據。年齡對患者預后也會產生影響，老年患者常合并多種基礎疾病，機體代償能力較差，從而影響治療效果及預后。

綜上，TGF-β1基因多態性與晚期食管鱗癌患者預后密切相關，其中攜帶TGF-β1 CT、TT基因型患者會對預后產生影響，此外年齡、AJCC分期及淋巴結轉移數也是晚期食管鱗癌患者預后的影響因素。