麝香保心丸對大鼠醛固酮增多誘導的主動脈纖維化的影響

樊小容，張旭升，黃戰軍，譚小青，蔡博治

研究發現醛固酮不僅可促進心肌、血管及腎臟等多器官纖維化，還可促進體內炎癥反應、氧化應激反應等，導致心血管重構[1-3]。參與心血管重構的機制十分復雜，從醛固酮生物學效應入手去探討相關可能機制，對臨床防治心血管重構具有重要的指導意義。研究證實麝香保心丸具有保護血管內皮、穩定逆轉斑塊以及抑制血管鈣化的作用[4-5]，在臨床上防治心血管疾病發生、發展發揮重要的作用；前期研究也證實麝香保心丸可通過抑制炎性因子單核細胞趨化因子-1(MCP-1)的表達改善代謝綜合征誘導的主動脈纖維化[6]，但能否改善醛固酮誘導的主動脈纖維化尚不清楚，本實驗觀察麝香保心丸對醛固酮誘導的主動脈纖維化的影響，并初步探討可能的分子機制。

1 材料與方法

1.1 實驗藥品 醛固酮購自Sigma公司，MCP-1和白細胞介素-6(IL-6)試劑盒購自北京華英生物研究所；MCP-1和IL-6受體一抗購自北京博奧森，二抗購自北京中杉金橋。麝香保心丸購自上海和黃藥業有限公司。其余為進口或國產分析純試劑。

1.2 動物造模取材 8周齡雄性SD大鼠由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。將SD大鼠隨機分為正常組、醛固酮組和醛固酮+麝香保心丸組，每組8只。醛固酮組采用皮下注射醛固酮20 μg/d；醛固酮+麝香保心丸組在醛固酮組基礎上每天予麝香保心丸(25 mg/kg)灌胃1次，常規飼養6周。麻醉后暴露心臟，取血，低溫分離血清。摘取胸主動脈，石蠟包埋用于染色。

1.3 主動脈組織Masson染色 取大鼠胸主動脈組織石蠟切片，常規脫蠟至水，Masson復合染色液5 min，5%磷鎢酸5～10 min，亮綠染色液5 min。

1.4 大鼠血清MCP-1和IL-6水平測定 取血清約200 μL，采用放射免疫法測定血清MCP-1和IL-6水平，具體步驟按試劑盒說明書操作。

1.5 免疫組織化學法檢測主動脈組織MCP-1和IL-6受體的表達 取大鼠胸主動脈組織石蠟切片，常規脫蠟至水，滴加一抗孵育過夜，滴加二抗，二氨基聯苯氨(DAB)顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片，具體步驟詳見說明書。

2 結 果

2.1 3組大鼠主動脈組織膠原染色比較 醛固酮組與正常組相比，大鼠血管壁增厚，細胞間質可見大量膠原明顯沉積，用麝香保心丸干預后，膠原沉積有所改善。詳見圖1。

圖1 大鼠主動脈組織Masson染色(×40)(藍色為膠原成分)

2.2 3組大鼠MCP-1和IL-6及其相應受體表達水平比較 醛固酮組血清炎性因子MCP-1和IL-6較正常組明顯升高，主動脈組織炎性因子相應受體表達同步上調；經麝香保心丸干預后，炎性因子及其相應受體表達明顯下調。詳見表1、圖2、圖3。

表1 3組大鼠血清MCP-1、IL-6水平比較(±s) 單位：ng/L

圖2 大鼠主動脈組織MCP-1受體免疫組化染色(×100)(棕黃色為陽性表達)

圖3 大鼠主動脈組織IL-6受體免疫組化染色(×100)(棕黃色為陽性表達)

3 討 論

研究證明，醛固酮增多是獨立的心血管危險因素。醛固酮不僅可引起體內水鈉潴留，血壓升高，促進心血管組織、腎臟等多器官組織纖維化，并且醛固酮水平與炎性因子表達及動脈粥樣硬化的程度密切相關，可能涉及的機制與激活核因子κB(NF-κB)活性及抑制尾加壓素Ⅱ表達、細胞間黏附分子-1及結締組織生長因子轉錄有關[7-9]。血管纖維化是血管重構的重要病理基礎，主要表現為血管平滑肌細胞增殖、細胞間質膠原蛋白沉積等，導致血管壁增厚、僵硬。前期體內研究發現，外源性醛固酮可導致大鼠主動脈纖維化，同時炎性因子MCP-1和IL-6表達明顯增加，提示醛固酮可促進血管纖維化，并且可以促進炎性因子表達[3]。也有研究觀察到醛固酮增多可誘導心血管系統多種細胞增殖、炎性細胞浸潤及炎性因子的表達增多，促進膠原蛋白的合成及分泌，主要涉及炎癥反應、氧化應激等機制[10-11]。而炎癥反應貫穿主動脈重構病理過程始終。臨床研究觀察到頸動脈粥樣硬化程度與血清炎性因子如IL-6和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達呈正相關[12]，在動脈粥樣硬化家兔模型中觀察到血清IL-6等炎性因子表達明顯升高，主動脈斑塊自噬體形成減少，在ApoE-/-動脈粥樣硬化小鼠模型中亦發現炎性因子IL-6和MCP-1表達明顯上調，以上研究均證實炎癥反應與主動脈重構密切相關[13-14]。細胞增生、膠原蛋白合成分泌增多、炎性細胞浸潤及炎性因子表達上調等是主動脈纖維化的重要因素，可見醛固酮與主動脈重構密切相關，如何抑制主動脈重構的進程是目前研究的重點。

麝香保心丸具有芳香溫通、益氣強心和改善循環功效，大量研究證實麝香保心丸具有調控炎癥反應、保護血管內皮細胞、促進新生血管形成及穩定動脈粥樣硬化斑塊等作用[15-18]。進一步研究還證實麝香保心丸可抑制心血管纖維化，可能的分子機制與降低組織轉化生長因子-β1(TGF-β1)、血管緊張素Ⅱ的表達有關，與抑制TGF-β1/Smads信號轉導通路的過度激活有關[19-20]。

本實驗發現醛固酮可誘導大鼠主動脈組織膠原蛋白沉積，管壁增厚，提示主動脈纖維化，血清炎性因子MCP-1、IL-6水平和主動脈組織相應炎性因子受體表達明顯上調，再次驗證醛固酮具有促主動脈組織纖維化和促炎癥反應等生物學效應。應用麝香保心丸干預后，主動脈纖維化程度改善，同時大鼠血清炎性因子及其受體的表達明顯下調，證實麝香保心丸抗炎、抗纖維化效應明確，這將為主動脈纖維化的機制研究及防治提供了新的思路和作用靶點。