培養基激素配比對粉麗人長壽花莖段培養的影響

王明山 韓春葉

摘要：以粉麗人長壽花莖段為材料，MS 為基本培養基，研究激素不同濃度配比對粉麗人長壽花快速繁殖生長的影響，以期尋找粉麗人長壽花莖段再生體系的最佳激素配比。結果表明，適宜粉麗人長壽花花芽誘導的培養基為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，適宜粉麗人長壽花生根的培養基為1/4MS+NAA0.5mg/L。

關鍵詞：粉麗人長壽花;組織培養;培養基

一、材料與方法

（一） 試驗材料

粉麗人長壽花購于鄭州市雙橋花卉市場，取帶腋芽的粉麗人長壽花的莖段2cm左右。

（二） 試驗方法

1、粉麗人長壽花腋芽誘導方法。在接種前，將粉麗人長壽花用洗衣粉洗凈并放在自來水下沖洗1h，然后將整株的外植體剪成帶腋芽的莖段，將外植體帶入無菌操作室，在超凈工作臺上用70%酒精溶液浸泡30s，無菌水沖洗4次，接著用0.1%升汞溶液浸泡8min，用無菌水沖洗6次，將粉麗人長壽花莖段上的水珠用無菌紙吸干，然后進行接種。以MS+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L為基本培養基（下同），加入1.0mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA，每個處理接種15瓶，每瓶分別接種2個、3個、4個莖段，培養條件（下同） 為溫度25±2℃， 相對濕度為70% ～80% ， pH 值5.8， 光照強度1000～1500 lux。培養一個月后，記錄每瓶誘導出芽的數目和污染的數目，計算其誘導率。

2、腋芽莖段初生培養方法。采用不同的6-BA和NAA激素配比，以MS為基本培養基，對帶腋芽的粉麗人長壽花的莖段進行初代培養。6-BA 濃度（mg/L） 為1.0、1.5、2.0， NAA 濃度（mg/L） 為0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0，共21個處理，每個處理15瓶，每瓶接種2個帶腋芽的莖段。2周后觀察、統計莖段的腋芽誘導率與污染率。然后將獲得的無菌外植體接入到新鮮的培養基，進行繼代培養。

3、外植體生根培養方法。分別以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養基，加0.5mg/L NAA進行生根培養，每個處理接種15瓶，每瓶分別接種2個，60d后統計生根率。再以MS培養基為基本培養基，分別加入0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4mg/L、0.5 mg/L 的NAA，以不加NAA為對照，每個處理接種15瓶，每瓶分別接種2個。60d后，統計生根率。誘導率、污染率、生根率的計算公式如下：

二、結果與分析

（一） 培養基接種數與誘導出芽的外植體數的關系

從表1可以看出，培養基里每瓶放置4個外植體時，腋芽的誘導率為75%;當培養基里每瓶放置3個外植體時，腋芽的誘導率為33.33%;當培養基里每瓶放置2 個外植體時，腋芽的誘導率為100%。

上述分析結果表明，一個培養基里放置2個外植體，其腋芽誘導率最高，即每瓶接種2 個外植體誘導出芽效果最好。

（二） 激素對外植體誘導的影響

1、6-BA濃度對外植體誘導率的影響。植物生長調節劑用生長素（NAA） 和細胞分裂素（6-BA），其中，6-BA是根尖合成向上運輸，主要作用是促進細胞分裂和器官分化，促進側芽分化和生長;NAA具有調節植物生長和生根的作用。

進行初代培養14d后，對630個莖段的培養情況進行統計，結果見表2。對21個不同激素配比進行比較可知，在激素6-BA濃度為1.0～2.0mg/L、NAA的濃度為0～1.0mg/L時，都能長出定芽，在6-BA濃度為1.0mg/L、NAA濃度為0.2mg/L時，能較早分化出定芽，且定芽的增殖速度很快;當6-BA為1.0mg/L時，外植體的誘導率最高，其平均值為54.29%。所以，6-BA的最佳濃度是1.0mg/L。

增加1.5mg/L6-BA和2.0mg/L6-BA兩個濃度與7組不同NAA濃度構成14個不同的濃度配比，探究增加6-BA的濃度能否增加誘導率。由表2可知，在增加的14個不同的濃度配比中誘異率有3 個峰點，分別是6-BA1.5mg/L+NAA0mg/L配比中的誘導率為66.67%，6-BA2.0mg/L+NAA0mg/L配比中的誘導率為76.67%，6-BA2.0mg/L+NAA0.4mg/L配比中的誘導率為50.00%。6-BA1.5mg/L+NAA0mg/L 有3 個最低點， 分別是6 - BA1.0mg/L +NAA1.0mg/L 誘導率為26.67% 、6 - BA1.5mg/L +NAA0.3mg/L 誘導率為33.33% 、6 - BA2.0mg/L +NAA1.0mg/L誘導率為26.67%。

由表2可知，增加6-BA的濃度并不一定能增加誘導率，只有NAA的濃度在0和0.3mg/L、0.4mg/L時，增加6-BA的濃度，可以增加外植體的誘導率，誘導率增加情況分別為： 由66.67% 增加為76.67% 、由33.33% 增加為36.67%、由43.33%增加為50.00%;NAA 在其他濃度下，增加6-BA的濃度，反而降低誘導率。

2、NAA 濃度對外植體誘導率的影響。設置NAA 濃度（mg/L） 從0開始，以0.1的等差到0.5共6個不同濃度的激素梯度，探究培養基MS+6-BA1.0mg/L+NAA的最佳濃度配比，并了解當NAA與6-BA濃度相等時，培養基的濃度與前6組相比是否為最佳濃度配比。由表2可知，當濃度配比為6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L時，外植體的誘導率最高，而且污染率也相對較低。當NAA與6-BA濃度相等時，即二者均為1.0 mg/L時，外植體的誘導率為26.67%，其誘導率最低。

上述分析表明，NAA與6-BA濃度相等，并不是培養基中NAA與6-BA的最佳濃度配比。

（三） 激素配比對生根培養的影響

1、MS培養基的濃度對粉麗人長壽花生根率的影響。由表3可知，在適當的濃度范圍內，MS培養基的濃度越低，粉麗人長壽花的生根率越高。本研究以1/4MS培養基的生根率最高，為80%，表明1/4MS培養基既滿足了粉麗人長壽花生長的營養需求，又能很好地誘導生根。

2、NAA濃度對生根培養的影響。由表4可知，當MS培養基的濃度一定時，NAA濃度增加為0.1mg/L，粉麗人長壽花的生根率增加，當濃度增加到0.4mg/L NAA時，粉麗人長壽花的誘導生根率最大，為76.67%;再增加NAA濃度到0.5 mg/L時，生根率反而降低，降低為50.0%。

三、結論與討論

粉麗人長壽花莖段誘導率與培養基接種數關系密切。本實驗結果表明，每瓶培養基接種2個外植體時，莖段的誘導率最高，達100%，而且植株的生長情況良好。每瓶接種外植體越少，外植體可利用營養物質越充分，有利于莖段誘導出新的定芽。外植體越少，污染率相對越低，有利于植株生長。

不同濃度植物生長調節劑對粉麗人長壽花帶腋芽的莖段初代培養有較大影響。汪宏剛[2]、李玉梅[3]、崔廣榮[4]等研究表明， 粉麗人長壽花芽誘導最適培養基為MS+ 6- BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L，芽增殖的最適培養基為MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.5 mg/L;孫男[5]、高建莉[6]等研究表明，6-BA的最佳濃度是1.0mg/L，張瑞姿[7]、陳梅[8]等研究表明，NAA最佳濃度是0.5mg/L，孫利娜[9]研究表明，NAA最佳濃度是0.2mg/L，關艷清等[10]、李鳳蘭[11]、程軍[12]研究結果顯示，NAA最佳濃度是1.0mg/L。本實驗表明，對粉麗人長壽花的芽增殖初代培養中，6-BA濃度為1.0mg/L，NAA濃度為0.1mg/L能夠較早分化出芽，且芽的增殖速度很快，外植體的誘導率最高。

粉麗人長壽花的生根誘導時，有不少學者使用低濃度的MS培養基，用1/2MS培養基比用MS培養基粉麗人長壽花的誘導生根率高，不少學者也研究了NAA濃度對粉麗人長壽花生根率的影響，但結果不盡相同，也有人提出最適生根培養基為1/2 MS+NAA 0.2～0.5 mg/L[13-15]。本實驗研究表明，在適宜的MS范圍內，基本培養基的濃度越低，粉麗人長壽花的生根率越高，1/4MS培養基的誘導生根率最高，且在基本培養基相同的條件下，加入0.5mg/LNAA，粉麗人長壽花的誘導生根率最大。

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基金項目：2018年度河南省科技攻關資助項目“土壤結構對解決草莓連作障礙根際微生態效應的影響研究”，項目編號：162102110092。

作者簡介：王明山（1978-），男，河南尉氏人，講師，研究方向：農業信息技術。

（責任編輯 曹雯梅）