異葉青蘭生藥學(xué)研究

譚金華，張煒，范瑩瑩，拜禮文，肖華，駱桂法，李玉林，陳濤，海平*

(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院，青海 西寧 810016；2.青海省藥品檢驗(yàn)檢測院/青海省中藏藥現(xiàn)代化研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/國家藥品監(jiān)督管理局中藥藏藥質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧 810016;3.中國科學(xué)院西北高原生物研究所,青海 西寧 810008)

異葉青蘭為民族地區(qū)常用藏藥材，藏文名為“吉孜青保”，中文名為“白花枝子花”，現(xiàn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》(藏藥)第一冊(cè)，為唇形科植物異葉青蘭DracocephalumheterophyllumBenth.的干燥地上部分，具有瀉肝清熱的作用，藏醫(yī)常用于治療黃疸性肝炎，口腔潰瘍等疾病[1]。其生長于海拔2 km以上的山坡草地或河灘地。產(chǎn)地集中在西藏、青海、甘肅等地[2]。異葉青蘭成分主要有揮發(fā)油類、萜類化合物、黃酮類和苯丙素類等[3-5]。《晶珠本草詮釋》[6]《中國藏藥》[7]《中國藏藥材大全》[8]等古籍中記載異葉青蘭均具有治療口腔潰瘍和抗炎的療效。現(xiàn)代藥理研究表明，異葉青蘭具有抑制心肌肥大、抗高血壓、抗炎、抗病毒等藥理作用[9-12]。

在《晶珠本草詮釋》[6]和《藏藥志》[13]中記載個(gè)別藏醫(yī)亦用甘西鼠尾草及黃花鼠尾草代替異葉青蘭入藥。異葉青蘭在七十味松石丸、參蛤平喘膠囊等中藏藥制劑中均有使用。異葉青蘭作為組方藥味，質(zhì)量控制研究基礎(chǔ)薄弱，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中僅有性狀、理化鑒別項(xiàng)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善，現(xiàn)對(duì)異葉青蘭進(jìn)行生藥學(xué)研究，以期為提高異葉青蘭質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供更科學(xué)全面的控制依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

SZX-16體式熒光顯微鏡(日本奧利巴斯株式會(huì)社)；BX53生物顯微鏡(日本奧利巴斯株式會(huì)社)；HistoCore MULTICUT輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)(徠卡公司)；AUW220D電子天平(日本島津公司)；CPA225D電子天平(德國賽多利斯公司)；Milli-Q超純水系統(tǒng)(德國默克公司)；DK-S16恒溫水浴鍋(上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。

1.2 試藥

異葉青蘭為野外采集及企業(yè)提供，均由青海省藥品檢驗(yàn)檢測院楊鳳梅主任藥師鑒定。齊墩果酸對(duì)照品(110709-201607，純度91.7%)；迷迭香酸對(duì)照品(批號(hào)：111871-202007，純度≥98.1%)、木犀草素對(duì)照品(批號(hào)：111520-200504)均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇(色譜純，德國默克股份有限公司)，水為超純水。藥材來源信息詳見表1。

表1 異葉青蘭藥材樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒定

青海省藥品檢驗(yàn)檢測院標(biāo)本館館藏異葉青蘭溯源臘葉標(biāo)本(采集號(hào)632822140731118)于2014年7月采于青海省都蘭縣夏日哈鎮(zhèn)國米村(鑒定人：駱桂法主任藥師、趙國福副主任藥師)。將采集到的12批次異葉青蘭藥材樣品(表1)按照《中國植物志》第65(2)卷[14]鑒定，并與溯源臘葉標(biāo)本比對(duì)，總結(jié)生藥學(xué)特征有：莖四棱形，密被倒向的小毛；莖下部葉具長柄，葉片寬卵形至長卵形，先端鈍或圓形，基部心形，下面疏被短柔毛或幾無毛，邊緣被短睫毛及淺圓齒；莖中部葉與基生葉同形，具與葉片等長或較短的葉柄，邊緣具淺圓齒或尖鋸齒；莖上部葉變小，葉柄變短，鋸齒常具刺而與苞片相似;輪傘花序生于莖上部葉腋，花具短梗；苞片較萼稍短，倒卵形或倒披針形，疏被小毛及短睫毛，邊緣每側(cè)具3～8個(gè)小齒，齒具長刺;花萼淺綠色，外面疏被短柔毛，下部較密，邊緣被短睫毛，2裂幾至中部，上唇3裂至本身長度的1/3或1/4，齒幾等大，三角狀卵形，先端具刺，下唇2裂至本身長度的2/3處，齒披針形，先端具刺;花冠黃白色，外面密被白色或淡黃色短柔毛，二唇近等長。結(jié)論為收集的12批次樣品植物基原與《中國植物志》[14]記載相符，與溯源臘葉標(biāo)本比對(duì)結(jié)果一致，均屬于唇形科植物異葉青蘭DracocephalumheterophyllumBenth.，鑒定結(jié)果經(jīng)楊鳳梅主任藥師復(fù)核確認(rèn)無誤。標(biāo)本、原植物及各部位見圖1。

標(biāo)本照片

2.2 顯微鑒別

2.2.1 橫切面鑒別

使用HistoCore MULTICUT生物輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)對(duì)異葉青蘭進(jìn)行莖橫切和葉橫切，并對(duì)各個(gè)部位進(jìn)行標(biāo)注，發(fā)現(xiàn)葉表皮存在大量細(xì)胞晶體，結(jié)果見圖2。

莖橫切面

2.2.2 粉末顯微鑒別

采用BX53生物顯微鏡對(duì)12批異葉青蘭進(jìn)行粉末顯微鑒別(每批3～5片)，篩選出具有專屬性的顯微特征(圖3A～M)。導(dǎo)管多為螺紋導(dǎo)管，見圖3A；花粉粒類圓形，表面雕紋不明顯，見圖3B；葉下表皮細(xì)胞垂周壁彎曲，氣孔不定式或不等式，見圖3C；非腺毛存在于異葉青蘭全身，在微絨毛部位較多，具有1～4個(gè)細(xì)胞，見圖3D；花粉囊內(nèi)壁細(xì)胞類橢圓形或類多角形，壁呈突起狀增厚，見圖3E；花表皮細(xì)胞，見圖3F；花萼表皮細(xì)胞淡黃色，垂周壁波狀彎曲，見圖3G；柵狀細(xì)胞，形狀伸長成柱狀，見圖3H；葉片及莖中大量存在橙皮苷結(jié)晶，有偏光性，略呈扇形或不規(guī)則形，見圖3I～J；花冠細(xì)胞類圓形，顏色鮮艷呈粉紅色，見圖3K；種皮細(xì)胞，棕黃色，形狀不規(guī)則，見圖3L；油滴，呈圓球形，見圖3M。

2.2.3 種子鑒別

選取異葉青蘭種子置于SZX-16體式熒光顯微鏡上進(jìn)行觀察，見圖4。種子體積小，長約2 500 μm，寬約1 200 μm。呈黑色或棕色，圓錐形或者錐形，先端較尖，表面有微絨毛，背部有兩黑色條紋，均分平面，正面中線均分種子，兩側(cè)內(nèi)凹，有形如月牙白色種臍。

種子背面

2.3 薄層鑒別

2.3.1 齊墩果酸的鑒別

方法：取本品粉末0.5 g，加甲醇25 mL，超聲20 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取齊墩果酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法2020年版《中國藥典》四部通則0502試驗(yàn)，吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，再噴以10%硫酸乙醇試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光(365 nm)下檢視。結(jié)果：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。見圖5。

注：1.齊墩果酸對(duì)照品;2.青海湖海北藏族自治州;3.祁連縣八寶鎮(zhèn);4.剛察縣沙柳河鎮(zhèn);5.門源浩門鎮(zhèn);6.湟源縣河南村;7.互助北山林場;8.海晏縣金銀灘;9.湟中縣上新莊;10.海晏縣三聯(lián)村;11.共和縣。以上地點(diǎn)均隸屬于青海省。圖5 齊墩果酸薄層色譜

2.3.2 迷迭香酸，木犀草素的鑒別

方法：取本品粉末1 g，置于100 mL錐形瓶中，精密加入50%乙醇溶液50 mL，低溫冰浴超聲1 h，搖勻，過濾，置水浴鍋上50 ℃蒸干，殘?jiān)?0%乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中定容至刻度，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。另取迷迭香酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液；木犀草素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法2020年版《中國藥典》四部通則0502試驗(yàn)，吸取上述供試品10 μL,迷迭香酸對(duì)照品8 μL，木犀草素4 μL，分別點(diǎn)于同一默克板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(2∶4∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，再噴以3%三氯化鋁試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光(365 nm)下檢視。結(jié)果：木犀草素供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，迷迭香酸供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，青海湖、門源浩門鎮(zhèn)、海晏縣金銀灘、海晏縣三聯(lián)村顯示相同斑點(diǎn)，其余地方顏色相對(duì)較淺。見圖6。

3 小結(jié)

作者在薄層研究中，參考了2020版中國藥典第一冊(cè)的研究方法，在方法上進(jìn)行改進(jìn)，得到了現(xiàn)在的薄層研究結(jié)果，該研究的創(chuàng)新點(diǎn)為將迷迭香酸和木犀草素同時(shí)在一張薄層板展示，迷迭香酸斑點(diǎn)深淺差別較大，應(yīng)為各采集地點(diǎn)迷迭香酸含量較大。通過輪式切片機(jī)以及生物顯微鏡對(duì)異葉青蘭進(jìn)行了顯微研究，在莖橫切面和葉橫切面中指認(rèn)了表皮、厚角組織、韌皮部等，并通過粉末顯微鑒別，找到了花粉囊內(nèi)壁細(xì)胞、花粉粒、柵欄組織、氣孔、非腺毛等特征細(xì)胞。

異葉青蘭未見薄層，顯微等相關(guān)文獻(xiàn)研究。通過原植物的性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒以期為藏藥材異葉青蘭的質(zhì)量評(píng)價(jià)及標(biāo)準(zhǔn)制定提供參考。