升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌體外抑菌作用的實驗研究

何俊輝 伏雨思 蒲文華 劉湘渝 肖銳華

摘要：目的 研究升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌（ Propionibacterium acnes，P. acnes）的體外抑菌作用。方法 采用肉湯稀釋法測算升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌的最低抑菌濃度 （MIC），實驗組升角丸水提液，陽性對照組乳糖酸紅霉素溶液，陰性對照組生理鹽水。結果 實驗組 ，在實1-實2血平板上血平板均未見菌落，自實3血平板起可見菌落生成，故其MIC為201mg/ml;陽性對照組 MIC結果，在陽1-陽3血平板均未見菌落，自陽4血平板起可見典型菌落，故其 MIC為12.6μg/ml;陰性對照組 MIC 結果，在陰1血平板即有典型菌落生成。結論 應用升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌的體外抑菌作用顯著，值得臨床研究推廣。

關鍵詞：升角丸水提液;痤瘡丙酸桿菌;痤瘡

痤瘡是一種常見的慢性炎癥性皮膚病，多好發于面頰部、額部以及下頜部，臨床表現為粉刺、結節、囊腫、丘疹、膿皰以及瘢痕等，并多見于青少年，其發病率高達 70%～87%（俗稱青春痘）[1]。升角丸是由黑龍江中醫藥大學依據古方犀角升麻丸配伍生產，醫宗金鑒有言：“宜常服犀角升麻丸，并治一切粉刺、酒刺等證”，現升麻丸已用于痤瘡臨床治療中，并取得了較好療效，本文利用痤瘡丙酸桿菌的體外抑菌試驗進行觀察與分析，探究升角丸水提液對痤瘡丙酸桿菌的抑制作用，并為臨床運用提供實驗依據。

1 材料與方法

1. 1 實驗儀器與試劑 實驗菌株：痤瘡丙酸桿菌標準株 ;受試藥液：升角丸水提液、乳糖酸紅霉素、滅菌生理鹽水。將升角丸水提液作為實驗組 ， 并以乳糖酸紅霉素溶液作為陽性對照組 ， 以生理鹽水作為陰性對照組。

1. 2 升角丸水提液的制備 稱取 20 g 升角丸（藥物組成：水牛角、升麻、羌活、防風、白附子、白芷、生地黃、川芎、紅花、黃芩、生甘草、玄參等），加入 250 mL 超純水，浸泡 25 min 后，超聲振蕩，75℃提取 1 h，過濾;在濾渣中加入 250 mL超純水，再于相同的條件下振蕩提取 1 h，過濾;合并濾液，離心 20 min（255

000 r·min-1），取上清液濃縮至 20 mL（相當于原藥物 1 g·mL-1），置于 4℃冰箱中保存，并在 12 h 內使用完畢。

1. 3 實驗方法

1.3.1液體培養基的制備：選用改良GAM 肉湯粉 60 mg 以及 1000 ml 蒸餾水于錐形瓶內， 加熱溶解滅菌， 降溫至50 ℃后再加入無菌脫纖維羊血 50 ml，搖勻，封口，制成液體培養基。

1.3.2痤瘡丙酸桿菌標準株菌懸液的制備：將痤瘡丙酸桿菌菌種接種于血瓊脂平板， 放入厭氧培養箱，再放入恒溫細菌培養箱，37°C厭氧培養48h， 取后再將細菌培養物制作成細菌涂片 ， 予以革蘭染色法 ， 并在鏡下觀察細菌的基本形態 ，一般為呈 X狀、Y狀、或柵欄狀，無莢膜，無鞭毛的革蘭陽性桿菌 ，即為痤瘡丙酸桿菌。再用一次性接種環挑取血平板上菌落 ， 同時轉種于兩個血瓊脂平板上 ， 將其中一個血平板置于厭氧培養箱，再放入恒溫細菌培養箱， 37°C厭氧培養48h標記為 1 號 ， 培養后可見典型菌落 ， 另外一直接放置于恒溫細菌培養箱培養37°C培養 48 h 標記為 2 號 ， 培養后未見菌落產生。挑取1號血瓊脂平板上的典型菌落，以蒸餾水稀釋，用麥氏比濁計調整為0.5個麥氏濁度單位（MCF），其細菌數約1.5* 108cfu/ml，備用 。

1.3.3抑菌實驗：實驗組：取6支實驗滅菌試管，編號為實1-實6，分別加入不同濃度的升角丸水提液1ml;陽性對照組：取6支實驗滅菌試管，編號為陽1-陽6，分別加入不同濃度的乳糖酸紅霉素溶液1ml;陰性對照組：取1支滅菌試管，編號為陰1 ，加入生理鹽水1ml，待所有試管滅菌后 ， 再分別于每支試管中加入液體培養基 1 ml，采用移液槍，分別吸取新鮮配置的痤瘡丙酸桿菌標準株菌懸液100ul分別加入實驗組、陽性對照組各組的1-6試管以及陰性對照組陰1試管中，均勻振蕩，再將試管置于37°C恒溫厭氧培養箱培養 48 h， 各組試管培養結束后，取13個血平板，進行編號方法同試管，再采用平板澆筑法，分別吸取各組試管內混懸液lml接種于相同編號的血瓊脂平板上，放置于37°C 恒溫厭氧培養箱培養48h，觀察實驗結果。實驗重復三次，分別記錄結果。

1. 4 觀察指標 觀察各組受試液對痤瘡丙酸桿菌的抑菌效果。若血平板未見菌落生成 ， 則表明該濃度的藥液能夠抑制細菌生長;若平板上可見菌落生成， 則表明該濃度的藥液不能抑制細菌生長，能夠抑制細菌生長的最低藥物濃度即為該藥物MIC。

2 結果

2.1實驗組MIC結果 實驗組實1-實2血平板上均未見菌落 ， 自實3血平板起可見菌落生成 ， 故其 MIC 為 201mg/ml。結果見表1。

2.2 陽性對照組MIC結果 陽性對照組陽1-陽3血平板上均未見菌落 ， 自陽4血平板起可見菌落生成 ， 故其 MIC 為 12.6mg/ml。結果見表2。

2. 3 陰性對照組 MIC 結果 陰性對照組在陰1血平板即有典型菌落生成。

3 討論

中醫認為痤瘡是內熱偏盛，又外受風邪或脾氣不足，濕濁化熱所致，《素問生氣通天論》曰 ：“膏粱之人，內臟滯熱。痤......皆肺氣內郁所為”“汗出見濕，乃生痤癡 ”具體可分為肺經風熱、肺經血熱、胃腸濕熱、毒熱蘊結、血瘀痰凝、腎陰不足、心火上炎、沖任失調等，?中醫常用清肺胃濕熱、涼血解毒的方藥治療[2]。現代青年不良飲食起居習慣也是導致痤瘡出現的原因，常食用辛辣油膩食物易生痤瘡，經常飲酒抽煙，常坐在電腦手機前也比較易患痤瘡。痤瘡和皮膚的性質也有一定的關系，中性皮膚和偏油性的皮膚患痤瘡的較多。女性化妝品不當使用，也易患上痤瘡。

痤瘡丙酸桿菌是一種桿棒狀或略彎曲、無莢膜，無鞭毛、革蘭氏染色陽性的厭氧菌，其主要寄居于皮膚、皮膚腺、腸道、生殖泌尿道，是一種機會性病原體，痤瘡丙酸桿菌（P.acne）局部異常繁殖是痤瘡四大經典發病機制之一[3]。近年來研究發現，P.acne可通過多個途徑影響到痤瘡的發病。活的P.acne可通過以下3個方面影響痤瘡的發病：①誘導炎癥的形成，P.acne一方面可通過激活Toll樣受體（TLR）-2/4、上調抗菌肽（AMPs）表達、誘導蛋白酶激活受體（PAR）和MMPs表達以及促進角質形成細胞、巨噬細胞、皮脂腺分泌炎癥因子等途徑激活天然免疫，另一方面通過誘導CD4+T細胞活化和產生高滴度的抗P.acne激活細胞和體液免疫，共同促進炎癥的形成;②激活皮脂腺功能，P.acne可以直接作用于皮脂腺細胞，促進皮脂分泌增加及胰島素生長因子及其受體的表達，激活皮脂腺功能;③促進毛囊口角化，P.acne可通過誘導絲聚蛋白、角蛋白1、角蛋白10和角蛋白17等表達，增強角質形成細胞角化，促進毛囊口角化。因此，P.acne在痤瘡發病中作用不僅重要而且涉及到痤瘡發病的多個環節，所以有效殺滅抑制 P.acne 是控制痤瘡發病的重要手段之一。

升角丸是由水牛角、升麻、羌活、防風、附子、白芷、生地黃、川芎、紅花、黃苓、玄參、生甘草等藥物，蜜調為丸。方中重用水牛角，與升麻共為君藥，同起清熱涼血解毒之功效[4]。生地黃、玄參清熱養陰、黃苓涼血解毒，白附子解毒排膿，四藥共為臣藥，能加強君藥清熱涼血解毒之功。羌活、防風解表祛風勝濕，白芷消腫排膿，紅花、川芎行氣活血祛瘀，五藥共為佐藥。甘草既能清熱解毒、又能調和藥性，是為佐使藥。綜觀全方，苦寒辛甘合用，于大量苦寒藥中配伍少許辛甘藥，既防止苦寒傷中，又不失清熱涼血之功。諸藥合用，共奏清熱解毒、涼血祛風、散瘀之功效。因此，升麻丸對痤瘡丙酸桿菌的體外抑菌作用非常顯著 ， 值得臨床研究推廣。

參考文獻：

[1]紀青，張佳賓，蔡宏為，等.中西醫結合治療680例尋常性痤瘡的治療體會[J].內蒙古醫學院學報，2010，32（04）：402-404.

[2]吳美玲，朱延濤.中醫藥治療痤瘡研究進展[J].新中醫，2020，52（12）：13-15.

[3]許德田，劉瑋.痤瘡丙酸桿菌和痤瘡：進展與悖論[J].臨床皮膚科雜志，2016，45（03）：234-237.

[4]綦雪巍. 升角丸治療尋常型痤瘡（肺經血熱證）的臨床觀察[D].黑龍江中醫藥大學，2012.

項目基金：長沙醫學院大學生創新創業訓練計劃項目：長醫教[2021]47號-109

第一作者：何俊輝（2000.6-），男，本科，針灸推拿學

*通訊作者：肖銳華（1994.5-），女，本科，助教、針灸推拿學專業方向