腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)聯(lián)合細胞免疫對胃癌患者腫瘤標志物水平的影響

孫宏建

(佳木斯市中心醫(yī)院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154002)

胃癌是我國發(fā)病率最高的惡性腫瘤，主要的臨床癥狀為食欲不振、惡心嘔吐、消瘦乏力等，嚴重威脅患者的生命安全[1]。目前臨床上治療胃癌最有效的方式仍然是手術(shù)，其中腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)應用較廣泛，但是對于中晚期胃癌患者術(shù)后復發(fā)率較高，且預后較差。隨著醫(yī)學技術(shù)的快速發(fā)展，細胞免疫能夠通過提高患者的非特異性細胞免疫水平，對腫瘤細胞開展直接殺傷作用，調(diào)節(jié)機體免疫水平，達到治療的目的[2]。本研究探討腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)聯(lián)合細胞免疫對胃癌患者腫瘤標志物水平的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇2018年5月～2019年12月本院收治的64例胃癌患者作為本次研究對象，應用雙色球法隨機分為手術(shù)組和聯(lián)合組各32例。手術(shù)組男18例，女14例；年齡45～68歲，平均(56.61±10.08)歲；腫瘤直徑2～10 cm，平均(4.82±1.02)cm；TNM分期：Ⅱ期21例，Ⅲ期11例。聯(lián)合組，男19例，女13例；年齡45～70歲，平均(56.65±10.10)歲；腫瘤直徑2～10 cm，平均(4.85±1.05)cm；TNM分期：Ⅱ期22例，Ⅲ期10例。兩組臨床資料差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

納入標準：①依據(jù)《胃癌診療規(guī)范2018版》確診為胃癌患者[3]；②預計生存期在3個月以上者；③知情、同意并簽署本次研究者。排除標準：①意識障礙者；②手術(shù)禁忌證者；③凝血障礙者；④合并有心肝腎肺等嚴重疾病者；⑤失訪者。本次研究已經(jīng)過本院醫(yī)學倫理委員會同意。

1.2方法：手術(shù)組應用腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)進行治療。患者進行全身麻醉，取平臥位，首先進行臍孔穿刺，建立人工氣腹壓(術(shù)中維持在2.0 kPa左右)。然后從臍孔置入套管針和鏡頭，觀察腹腔后在左側(cè)腋前線肋緣下2 cm處作主操作口置入器械，接著在右側(cè)鎖骨中線2 cm處、臍橫線交點偏上2 cm處、右側(cè)前線肋緣下2 cm處分別作一個5 mm的輔助操作口；再利用超聲刀切斷胃結(jié)腸和脾胃韌帶及大網(wǎng)膜，游離動靜脈，依次切斷肝胃韌帶、胃部右動靜脈，使得全胃游離；再接著確定腫瘤情況，清掃D2淋巴結(jié)；最后在腹部正中作長7 cm左右的輔助切口，切斷十二指腸殘端，切除遠端胃，采取畢Ⅰ/Ⅱ式吻合術(shù)；清洗腹腔后置入引流管，關(guān)閉腹腔結(jié)束手術(shù)。

聯(lián)合組在手術(shù)組基礎上加用細胞免疫進行治療。手術(shù)前抽取患者100 ml外周血，利用梯度離心機分離單核細胞，并放入RPMI1640 培養(yǎng)基(條件：5%CO2、37℃)中培養(yǎng)。第4天加入75 ng/ml粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、50 ng/ml重組人白細胞介素-4(rhIL-4)、40 μg/ml腫瘤抗原；第5天加入50 mg/ml腫瘤壞死因子-α(TNF-α)；第7天收獲抗原負載成熟的樹突細胞(CD細胞)。然后收集非貼壁細胞，稀釋至1×106個/ml，加入1 000 U/ml γ-干擾素、1 000 U/ml重組人白細胞介素-2(rhIL-2)；每隔3 d加入2 500 U/ml rhIL-2；在第10天和第12天收獲細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK細胞)。CD細胞、CIK細胞均經(jīng)過流式細胞術(shù)檢測，注射前測試病毒、細菌、真菌和支原體為陰性。第1個療程在腹股溝淋巴結(jié)周圍區(qū)皮下注射1×1010個免疫細胞(DC-CIK細胞)，12 d為1個療程，共治療3個療程。

1.3觀察指標:①T細胞亞群水平：利用美國Beckman Coulter生產(chǎn)的流式細胞儀測試兩組患者治療前、治療后的外周血T細胞亞群水平，包括CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+。②腫瘤標志物水平：利用羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司生產(chǎn)的Cobas e411型電化學發(fā)光全自動免疫分析儀通過電化學發(fā)光免疫法測試兩組患者化療前、化療后的糖類抗原125(CA125)、糖類抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原(CEA)水平。③隨訪1年生存狀況：對兩組患者治療后進行隨訪1年，統(tǒng)計生存率，并利用Prizm軟件繪制生存曲線。

2 結(jié)果

2.1兩組治療前、治療后T細胞亞群水平比較：兩組治療前CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后CD3+、CD4+、、CD4+/CD8+均比治療前顯著上升且聯(lián)合組比手術(shù)組更高，CD8+均比治療前降低且聯(lián)合組比手術(shù)組更低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組治療前、治療后T細胞亞群水平比較

2.2兩組治療前、治療后腫瘤標志物水平比較：兩組治療前CA125、CA19-9、CEA水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后均比治療前顯著下降，且聯(lián)合比手術(shù)組更低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者治療前、治療后腫瘤標志物水平比較

2.3隨訪1年兩組生存狀況比較：手術(shù)組的生存率為71.88%(23/32)，聯(lián)合組的生存率為96.88%(31/32)，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.807，P<0.05)。見圖1。

圖1 生存曲線

3 討論

胃癌是起源于胃黏膜上皮細胞的惡性腫瘤，致死率極高[4]，并且該病早期臨床癥狀不明顯易被忽視，診斷時往往為中晚期，增加臨床治療難度[5]。目前臨床上針對中晚期胃癌患者常采用腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)進行治療，但是術(shù)后復發(fā)率較高，且預后較差，生存率較低[6]。

免疫療法是通過增強腫瘤細胞的免疫功能，誘導身體產(chǎn)生更強的抗腫瘤作用來發(fā)揮作用，即通過腫瘤患者自身的免疫力來達到治療腫瘤的目的[7]。故免疫療法能夠改善胃癌患者免疫功能，進而改善胃癌患者T淋巴細胞亞群水平，治療后聯(lián)合組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明顯高于手術(shù)組，CD8+明顯低于手術(shù)組。

胃DC細胞能夠通過呈遞腫瘤抗原誘導機體產(chǎn)生抗原特異性細胞毒T細胞殺傷腫瘤細胞，CIK細胞能夠通過分泌細胞因子殺死腫瘤細胞。而CA125是一種OC125結(jié)合的糖蛋白，CA19-9是一種低聚糖腫瘤相關(guān)抗原，CEA是一種復雜的含糖蛋白，均與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)[8]。DC-CIK免疫療法能夠顯著殺死胃腫瘤細胞，改善患者預后，降低CA125、CA19-9、CEA水平。本研究發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合組的CA125、CA19-9、CEA水平顯著低于手術(shù)組。同時手術(shù)組生存率明顯低于聯(lián)合組。分析其原因，聯(lián)合組患者通過DC-CIK免疫療法在提高患者免疫力的同時有效殺傷腫瘤細胞，改善胃癌患者預后，延長生存周期。

綜上所述，應用腹腔鏡輔助D2根治性全胃切除術(shù)聯(lián)合細胞免疫治療胃癌患者能夠顯著改善T細胞亞群水平和生存狀況，降低腫瘤標志物水平。