常見血液病患者淋巴細(xì)胞亞群分析及其臨床意義

黃卉 王恩慧 鄭曉燕

血液病指造血組織、血細(xì)胞以及血漿各種成分發(fā)生質(zhì)或量異常的一類疾病。常見的血液病包括再生障礙性貧血（aplastic anemia，AA）、特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）、缺鐵性貧血（iron deficiency anemia，IDA）、自身免疫性疾?。╝utoimmune disorders，AD）、急性白血?。╝cute leukemia，AL）及非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）。血液病的發(fā)生與機(jī)體免疫狀態(tài)有著密切關(guān)系，尤其是細(xì)胞免疫，對機(jī)體免疫應(yīng)答起到重要的調(diào)節(jié)作用［1］，某些類型多伴有淋巴細(xì)胞亞群改變［2-3］，發(fā)病與淋巴細(xì)胞的功能紊亂也有關(guān)［4-5］。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測常見血液病患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群，探討其細(xì)胞免疫功能的變化，為血液病的診斷及療效判斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2020年9月至2021年8月在衢州市人民醫(yī)院確診為血液病的患者250例。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：各類血液病均符合其臨床及國際診斷標(biāo)準(zhǔn)；在本院進(jìn)行各項(xiàng)檢查、治療；臨床資料完整；簽署知情同意書。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：其他血源性疾??；心、肝、腎等器官功能不全者；服用免疫調(diào)節(jié)藥或抗凝藥者；有急慢性感染史者。其中，AA 18例，ITP 31例，IDA 36例，AD 43例，AL 33例，NHL 94例；男107例，女143例；年齡12～89（57±16）歲。另選取同期在本院進(jìn)行健康體檢者30例作為對照組。兩組的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 儀器與試劑 CYTOMICS FC500型流式細(xì)胞儀（美國Beckman-Co uLter公司）、低速離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）、漩渦振蕩器、合適量程加樣槍。四色淋巴細(xì)胞亞群分析組合熒光抗體（批號：7580216、7536286），細(xì)胞裂解液（美國Beckman-Co uLter公司）。

1.3 檢測方法 （1）抽取所有研究對象的靜脈血1～2 mL置于EDTA抗凝管中，20°～25°室溫下存放，在24 h之內(nèi)提取抗凝血標(biāo)本100 μL，分別加入2支一次性試管（12 mm×75 mm）中，其中1支試管加入定量的復(fù)合熒光抗體（CD45-FITC、CD4-RD1、CD8-ECD和CD3-PC5）10 μL，另1支試管加入定量的復(fù)合熒光抗體（CD45-FITC、CD56-RD1、CD19-ECD、和CD3-PC5）10 uL，漩渦振蕩器混勻。室溫下避光反應(yīng)10 min，加入細(xì)胞裂解液0.5 mL，漩渦振蕩器混勻。避光反應(yīng)10 min，加入PBS緩沖液3 mL，置于低速離心機(jī)中，以1,500 r/min離心5 min，棄上清，加入PBS緩沖液3 mL，以1,500 r/min離心5 min，棄上清，加入500 μL PBS緩沖液混勻，放入檢測儀器進(jìn)行檢測。（2）采用貝克曼庫爾特 Kaluza 2.3分析軟件，對所有研究對象外周血淋巴細(xì)胞亞群流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果進(jìn)行設(shè)門分析，選取CD45+側(cè)向角散射光低的淋巴細(xì)胞群，分析CD3+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞、CD3-CD19+細(xì)胞及CD3-CD56+淋巴細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞群體的百分比。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 28.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

AA、ITP、IDA、AD、AL和NHL六種血液病患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 各組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較［%，（±s）］

表1 各組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果比較［%，（±s）］

注：與對照組比較，*P<0.05

組別 n CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD3-CD19+ CD3-CD56+ CD4+/CD8+對照組 30 71.09±5.83 40.68±4.50 25.62±4.99 11.72±3.52 15.13±5.39 1.68±0.44 AA 18 74.86±11.07 38.08±14.43 32.78±15.23* 12.33±5.78 11.79±8.76 1.58±1.10 ITP 31 73.77±11.06 39.14±13.08 30.08±12.92* 12.30±8.22 11.75±9.49* 1.74±1.29 IDA 36 67.99±10.62 34.38±10.09* 31.22±8.44* 11.72±7.80 14.79±8.09 1.25±0.69*AD 47 74.3±1.92 43.93±1.82 25.82±1.54 15.20±1.70* 8.54±1.25 * 2.15±0.26*AL 33 63.91±10.09* 30.29±8.13* 29.51±8.54* 17.15±10.72* 11.92±6.8* 1.16±0.66*NHL 94 74.10±16.18* 33.27±14.08* 37.17±17.73* 7.10±12.57* 15.65±10.89 1.22±0.87*

3 討論

血液病的發(fā)病機(jī)制與免疫功能密切相關(guān)。隨著免疫學(xué)發(fā)展及免疫功能檢測技術(shù)的進(jìn)步，淋巴細(xì)胞亞群的分類更加精細(xì)化，并且各亞群在免疫網(wǎng)絡(luò)中的作用日漸明顯［6］。在多種病理狀況下，T淋巴細(xì)胞亞群CD3、CD4、CD8比例和比值的變化和B細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量的變化，均可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫功能?？俆細(xì)胞中，CD4+T淋巴細(xì)胞主要具有介導(dǎo)輔助細(xì)胞及體液免疫功能，而CD8+T細(xì)胞具有抑制或殺傷功能效應(yīng)。B細(xì)胞主要負(fù)責(zé)體液免疫，產(chǎn)生抗原特異性抗體。NK細(xì)胞則發(fā)揮非特異性細(xì)胞毒性效應(yīng)，在免疫調(diào)節(jié)、免疫監(jiān)視和早期抗感染起作用。

本研究結(jié)果顯示，AA患者CD8+T細(xì)胞比例顯著升高，表明存在T細(xì)胞亞群的紊亂。有研究認(rèn)為，CD8+T細(xì)胞細(xì)胞毒作用增強(qiáng)是導(dǎo)致骨髓造血功能明顯抑制的一大原因［7-8］。ITP患者CD8+T細(xì)胞比例明顯增高，表明存在T細(xì)胞亞群的紊亂。有研究認(rèn)為，CD8+T細(xì)胞增高可能與ITP新的一種發(fā)病機(jī)制有關(guān)，體內(nèi)抗原表達(dá)異常，激活自身反應(yīng)性T細(xì)胞，進(jìn)而誘導(dǎo)血小板自身抗體增多所致［9-10］。同時(shí)，ITP患者NK細(xì)胞比例明顯下降，是因?yàn)镮TP患者的NK細(xì)胞缺乏IL-18受體，使NK細(xì)胞接受外源性刺激受損，從而使體內(nèi)NK細(xì)胞的發(fā)育產(chǎn)生障礙、功能降低［11］。而IDA患者CD4+T細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值降低，CD8+T細(xì)胞比例相對升高，是因?yàn)殍F元素的缺乏使得DNA合成酶活性下降，干擾T淋巴細(xì)胞的合成及細(xì)胞殺傷機(jī)制，造成IDA患者體內(nèi)免疫功能的紊亂［12］。AD患者的CD4+/CD8+比值較對照組顯著增高，提示患者外周血細(xì)胞免疫功能處于“過度活躍”狀態(tài)，出現(xiàn)自體免疫反應(yīng)，這些表現(xiàn)均與自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制相關(guān)［4，5，13］。有研究表明，DNA甲基化的水平對B細(xì)胞的生長發(fā)育及細(xì)胞因子的分泌都有調(diào)控作用，而AD患體內(nèi)B細(xì)胞DNA甲基化水平下降，使自身反應(yīng)性的B細(xì)胞大量增殖［14］。AD患者NK細(xì)胞比例的降低，與NK細(xì)胞對抗自身免疫性疾病炎癥反應(yīng)消耗有關(guān)［15］。AL患者總T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、NK細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值均較對照組顯著降低，提示患者機(jī)體對惡性細(xì)胞的免疫監(jiān)視減弱，清除白血病細(xì)胞的能力下降，由此可見細(xì)胞免疫功能失調(diào)是促成白血病的重要因素。而NK是第三類淋巴細(xì)胞，對腫瘤的直接殺傷和清除具有重要作用，NK細(xì)胞的顯著減少也對白血病的發(fā)生有著重要影響［2-3］。NHL患者的CD4+T細(xì)胞比例較對照組顯著降低，提示參與細(xì)胞免疫的淋巴細(xì)胞減少，從而使得免疫功能下降；CD8+T細(xì)胞比例較對照組顯著增高，提示殺傷作用的效應(yīng)細(xì)胞增高，但因其會抑制免疫系統(tǒng)中發(fā)揮主要作用的CD4+細(xì)胞數(shù)量，從而進(jìn)一步抑制細(xì)胞免疫，最終導(dǎo)致機(jī)體對惡性細(xì)胞的免疫監(jiān)視減弱或降低免疫反應(yīng)，降低機(jī)體清除惡性細(xì)胞的能力，使淋巴瘤細(xì)胞持續(xù)生長［16］。AL患者中B細(xì)胞占比增高和NHL中的B細(xì)胞占比下降，分析與研究對象外周血中B細(xì)胞病變占比有關(guān)，具體影響因素及原理還有待進(jìn)一步的研究。

綜上所述，血液病患者存在不同程度的細(xì)胞免疫功能紊亂，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血淋巴細(xì)胞亞群的方法簡便易行，可為血液病的診斷和療效判斷提供依據(jù)。