市售甲氧芐啶快檢試劑盒絕對靈敏度的分析

葉雅真 駱和東

摘 要：為了解導致市售甲氧芐啶快檢試劑盒產品實際檢測靈敏度不夠的原因，本研究對檢出限符合要求且適用于動物源性食品中甲氧芐啶檢測的膠體金快檢產品進行絕對靈敏度研究。結果顯示，試劑盒的絕對靈敏度和實際檢測靈敏度不成正比。因此，有必要進行甲氧芐啶快檢方法研究，提高試劑盒產品實際檢測靈敏度，并進一步優化試劑盒產品中膠體金標記的抗原抗體，提高產品對0.5倍檢測限和1倍檢測限的識別差異，以提高快檢準確度，確保試劑盒產品的快檢監管效果。

關鍵詞：甲氧芐啶;膠體金免疫層析;食品安全快速檢測

Analysis of Absolute Sensitivity of Commercial Kits for Rapid Detection of Trimethoprim

YE Yazhen1， LUO Hedong1，2*

（1.Xiamen Institute for Food and Drug Quality Control， Xiamen 361012， China; 2.RayKol Group （Xiamen） Co.， Ltd.， Xiamen 361015， China）

Abstract： In order to master the reasons for the insufficient sensitivity of the commercial trimethoprim rapid test kit， a unifiable absolute sensitivity analysis was conducted on kits for rapid detection of trimethoprim in foods of animal origin. By researching the absolute sensitivity of kits and comparing the results with the evaluation results， it was found that the absolute sensitivity of kits were not directly proportional to the actual detection sensitivity. Therefore， it was necessary to study the rapid detection method of trimethoprim to improve the actual detection sensitivity of kits， and optimize the material of colloidal gold to deepen the distinguish between the half detection limit and the detection limit， as to improve the accuracy of rapid detection and ensure the rapid detection supervision effect of the kit products.

Keywords： trimethoprim; principle of colloidal gold immunochromatography; rapid detection for food safety

甲氧芐啶（Trimethoprim，TMP）是一種磺胺增效劑，常與磺胺類藥物或其他抗生素聯合使用，被廣泛用于畜、禽、魚等動物的疾病治療方面[1-6]。動物性食品中的甲氧芐啶藥物殘留危害人體健康。長期食用甲氧芐啶殘留超標的食品，可能會引起惡心、嘔吐等反應，還可能引起人體的過敏反應、毒性反應，產生抗藥性，引起“三致”（致畸、致癌和致突變）作用[7]。為有效開展甲氧芐啶殘留的監管工作，確保食品安全，我國2002年開始對各種動物性食品中甲氧芐啶的最大殘留限量作出規定。動物源性食品中甲氧芐啶相關殘留限量標準已發布實施約20年，但對動物源性食品中甲氧芐啶殘留的監控效果仍不理想。原因是食品檢測周期較長，市場監管部門雖在食品上市時及時進行抽檢，并篩查出問題食品，但問題食品已流入市民的餐桌，無法達到應有的監管效果[8-16]。

甲氧芐啶快檢試劑盒20 min內就可出具快檢結果，為監管部門對食品安全的監管提供了便利的技術手段，能有效解決食用農產品的監管難題。但在對市售試劑盒產品的質量評價中發現，目前市售甲氧芐啶試劑盒產品的檢測靈敏度均不符合監管要求，各品牌產品都存在不同程度的漏檢風險。為了解導致市售甲氧芐啶快檢試劑盒產品實際檢測靈敏度低的原因，本研究對檢出限符合要求且適用于畜、禽、魚等動物源性食品中甲氧芐啶檢測的膠體金快檢產品進行絕對靈敏度研究，為動物源性食品中甲氧芐啶快速檢測方法的研究提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇中甲氧芐啶溶液標準物質（BePure-26347YM，1 000 μg/mL，BePure）;乙腈（色譜純，德國MERCK）;磷酸氫二鈉（分析純，國藥）;磷酸二氫鉀（分析純，國藥）;甲氧芐啶快速檢測試劑盒從市場上購買。

1.2 儀器與設備

Milli-Q超純水處理系統（美國Millipore）;電子天平（德國Sartorius）;移液槍（德國Eppendorf）;pH計（瑞士METTLER TOLEDO）。

1.3 絕對靈敏度測試方案

在市場調研中，檢出限符合要求且適用于畜、禽、魚等動物源性食品中甲氧芐啶檢測的膠體金快檢產品有5種。根據《化學試劑 pH值測定通則》（GB/T 9724—2007）中4.2.4方法配制pH=7.0的磷酸鹽標準緩沖溶液。將甲氧芐啶乙腈標準儲備液

（1.0 μg/mL）用磷酸鹽標準緩沖溶液稀釋并配制成標準系列溶液。無需樣品前處理，以標準系列溶液作為待測液，按照各品牌試劑盒說明書進行檢測。比較檢測線（T線）與控制線（C線）顏色深淺，相鄰濃度間定性結果有差異時確定為該品牌試劑盒的絕對靈敏度。

2 結果與分析

為避免對企業造成影響，對試劑盒品牌進行編號表示，分別為A品牌、B品牌、C品牌、D品牌和E品牌。根據各品牌試劑盒說明書設定絕對靈敏度初步測試的標準系列溶液濃度梯度。

使用0 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、1.5 ng/mL和2.0 ng/mL濃度梯度對A、B品牌試劑盒進行初步測試，A、B品牌試劑盒的定性結果均為陰性、陽性、陽性、陽性和陽性，在0～0.5 ng/mL定性結果差異明顯。因此，再用0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、

0.3 ng/mL和0.4 ng/mL濃度梯度對這2個品牌試劑盒進行試驗，A品牌試劑盒定性結果分別為弱陰性、陽性、陽性、陽性，在0.1～0.2 ng/mL定性結果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為0.1～0.2 ng/mL;B品牌試劑盒定性結果分別為陰性、弱陰性、陽性和陽性，在0.2～0.3 ng/mL定性結果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為0.2～0.3 ng/mL。

使用0 ng/mL、2.5 ng/mL、5.0 ng/mL、7.5 ng/mL和10.0 ng/mL濃度梯度對C、D品牌試劑盒進行初步測試，C、D品牌試劑盒的定性結果均分別為陰性、陽性、陽性、陽性和陽性，在0～2.5 ng/mL定性結果有明顯差異。因此，再用0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、1.5 ng/mL和2.0 ng/mL濃度梯度進行試驗，C品牌試劑盒的定性結果分別為陰性、陰性、弱陽性和陽性，在1.0～1.5 ng/mL定性結果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為1.0～1.5 ng/mL;D品牌試劑盒的定性結果分別為陽性、陽性、陽性和陽性，增加0.25 ng/mL濃度梯度試驗，其在0.25 ng/mL濃度梯度的定性結果為弱陰性，在0.25～0.5 ng/mL定性結果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為0.25～0.5 ng/mL。

使用0 ng/mL、10 ng/mL、15 ng/mL、20 ng/mL和25 ng/mL濃度梯度對E品牌試劑盒進行測試，定性結果分別為陰性、陰性、弱陰性、弱陽性和陽性，在15～20 ng/mL定性結果有差異，該品牌試劑盒的絕對靈敏度為15～20 ng/mL。

以上各品牌試紙條的稀釋液各不相同，使用不同廠家配制的稀釋液可能有不同表現。由定性結果可知，各品牌試劑盒的絕對靈敏度均不相同，A、B和D品牌試劑盒的絕對靈敏度較高，在0～0.5 ng/mL，C品牌試劑盒絕對靈敏度在1.0～1.5 ng/mL，E品牌試劑盒絕對靈敏度較低，在15～20 ng/mL。通過和廠家聯系，各品牌所使用的原料金標抗原抗體各不相同，原料金標抗原抗體的差異導致了絕對靈敏度的差異。

3 結語

在對試劑盒產品的絕對靈敏度研究中，發現A品牌試劑盒產品的絕對靈敏度最高，與C品牌產品的絕對靈敏度相差近10倍。但在試劑盒質量評價中，A品牌試劑盒的假陰性率為19.0%，是C品牌試劑盒產品假陰性率的2倍，評價結果顯示A品牌試劑盒產品實際檢測靈敏度不夠，漏檢率明顯高于C品牌試劑盒產品。

對比試劑盒質量評價結果和絕對靈敏度研究結果，試劑盒的絕對靈敏度和實際檢測靈敏度不成正比，導致這種結果的原因可能在于樣品的前處理。由于目前還沒有發布動物源性食品中甲氧芐啶的快速檢測方法，5個品牌試劑盒產品的前處理試劑配方和前處理方法均不一樣，有的采用甲醇水溶液、有的采用三羥甲基氨基甲烷（Tris）溶液、有的采用磷酸鹽緩沖液等，導致各品牌試劑盒產品對甲氧芐啶的提取效率、基質干擾不盡相同。

因此，有必要進行快檢方法研究，對樣品的前處理方法、測定過程、交叉反應情況等進行研究，對方法進行優化，提高試劑盒產品實際檢測靈敏度，并進一步優化產品膠體金標記的抗原抗體，以提高產品對0.5倍檢測限和1.0倍檢測限的識別差異，降低檢測假陽性風險，提高快檢準確度，確保試劑盒產品的快檢監管效果。

參考文獻

[1]QUIROZ-CASTA?EDA R E，DANTáN-GONZáLEZ E.Control of avian coccidiosis： future and present natural alternatives[J].Biomed Res int，2015（8）：430610.

[2]LIU Z Y，WU Y，SUN Z L，et al.Characterization of in vitro metabolites of trimethoprim and diaveridine in pig liver microsomes by liquid chromatography combined with hybrid ion trap/time-of-flight mass spectrometry[J].Biomed Chromatogr，2012，26（9）：1101-1108.

[3]羅浩師.動物性食品中甲氧芐啶和二甲氧芐啶殘留量的測定[D].北京：中國農業科學院，2013.

[4]梅光明，陳雪昌，張小軍，等.高效液相色譜法測定水產品中殘留的甲氧芐啶[J].食品科學，2010，31（6）：

248-251.

[5]李俊鎖，邱月明，王超.獸藥殘留分析[M].上海：上海科學技術出版社，2002.

[6]黎欣，王志霞，潘源虎，等.獸用抗菌增效劑制劑的研究進展[J].中國畜牧獸醫，2021，48（5）：1816-1824.

[7]周麗.動物源性食品中磺胺類藥物殘留量檢測方法的研究[D].錦陽：西南科技大學，2017.

[8]葉雅真.我國食品安全快檢產品的現狀和對策分析[J].食品安全質量檢測學報，2019，10（12）：3719-3724.

[9]朱海，唐中令，馮劍暉.免疫層析快檢技術關鍵問題探討[J].中國計量，2018（2）：112-118.

[10]謝剛，葉金，王松雪.食品安全快速檢測方法評價技術研究進展[J].食品科學，2016，37（17）：270-274.

[11]成長玉，張敏，曹進，等.食品快速檢測方法在國內外的應用與管理比較[J].中國食品衛生雜志，2018，30（4）：401-404.

[12]張桂春，辛曉林，張玉香，等.原料乳蛋白質含量及酸度多功能快速檢驗試劑盒的研制[J].食品科學，2012，33（20）：343-346.

[13]金鳳，許志強，崔西勇，等.辣椒制品中對位紅的現場快速檢測方法[J].食品科學，2008（3）：386-389.

[14]陳燕妮.四類重要抗生素殘留的免疫快速檢測方法的研究[D].無錫：江南大學，2017.

[15]鄧省亮，賴衛華，許楊.膠體金免疫層析法快速檢測黃曲霉毒素B1的研究[J].食品科學，2007（2）：232-236.

[16]王炳志，駱和東，葉雅真，等.組胺膠體金免疫快速檢測試紙條研制及其在水產品檢測中的應用[J].食品安全質量檢測學報，2021，12（18）：7206-7213.

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