11種液體醫院制劑微生物限度方法的研究

姬 俊 牛萌萌 王立云 朱世真 王尊文

1.青島市食品藥品檢驗研究院，山東青島 266071；2.青島市婦女兒童醫院，山東青島 266034

醫療機構制劑是指醫療機構根據本單位臨床需要經批準而配制、自用的固定處方制劑[1]。顛茄口服溶液、小兒鹽酸異丙嗪糖漿等11種制劑是青島市婦女兒童醫院制劑中心根據臨床需要配制的液體醫院制劑，其標準收錄于《山東省醫療機構制劑規范》及山東省食品藥品監督管理局制定的醫療機構制劑標準中。醫院液體制劑在制備和使用過程中存在易染菌、穩定性較差等[2-3]問題。因此為有效控制本研究的醫院液體制劑質量，保障用藥安全，本研究根據2020年版《中華人民共和國藥典》四部通則1105、1106[4]的規定，對這11種液體醫院制劑進行方法適用性研究，建立微生物限度檢驗方法，同時也為確定和改善制劑生產條件提供有效依據。

1 儀器與材料

1.1 藥品

顛茄口服溶液（批號：20201130、20201217、20201229）、氯化鉀溶液（批號：20200904、20201027、20201208）、硫酸鎂溶液（批號：20201112、20201204、20201230）、青桑合劑（批號：20191105、20191120、20191210）、呋麻滴鼻液（批號：20201124、20201210、20201222）、硫酸鋅合劑（批號：20200914、20201105、20201216）、水 合 氯 醛 溶 液（批 號：20201103、20201203、20201229）、小兒鹽酸異丙嗪糖漿（批號：20201120、20201202、20201228）、紫 冰 搽 劑（批 號：20191205、20191219、20191220）、1%聚維酮碘（批號：20201026、20201127、20201211）、爐甘石洗劑（批號：20200929、20201106、20201225）。以上藥品由青島市婦女兒童醫院生產。

1.2 儀器

PYX-DHS40×50隔水式培養箱由國營創新醫療器械廠生產，SHP-160生化培養箱、GNP-9160E隔水式培養箱由上海三發科學儀器有限公司生產，INE500型電熱恒溫培養箱由德國MEMMERT公司生產。

1.3 培養基和試劑

胰酪大豆胨瓊脂培養基（批號：VM876358）由德國Merck公司生產，沙氏葡萄糖瓊脂培養 基（批 號：20190930）、沙 氏 葡 萄 糖 液 體 培養 基（批 號：20190630）、麥 康 凱 液 體 培 養 基（批號：20190410）、麥康凱瓊脂培養基（批 號：20190703）、甘露醇氯化鈉瓊脂培養基（批號：20191013）、溴化十六烷三甲銨瓊脂培養基（批號：20190730）由青島日水生物技術有限公司生產，胰酪大豆胨液體培養基（批號：20190610）、pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液（以下簡稱試劑A，批號：20190222）、大豆卵磷脂（批號：20190701）由青島海博生物科技有限公司生產。吐溫-80（批號：20181108）由國藥集團化學試劑有限公司生產，無菌十四烷酸異丙酯（批號：20190102）由北京牛牛基因技術有限公司生產。

1.4 菌種

銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉購于中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結果

2.1 供試液制備

顛茄口服溶液、氯化鉀溶液、硫酸鎂溶液、青桑合劑、呋麻滴鼻液、硫酸鋅合劑、水合氯醛溶液、小兒鹽酸異丙嗪糖漿、1%聚維酮碘、爐甘石洗劑：取供試品10 ml，加試劑A至100 ml，制備成1∶10供試液，取1∶10供試液用試劑A制備成1∶50供試液。紫冰搽劑：取供試品10 ml，加20 ml無菌十四烷酸異丙酯，加100 ml試劑A，振搖萃取，靜置分層，取水層作為1∶10供試液。爐甘石洗劑：取供試品10 ml，以含3%吐溫-80、0.3%卵磷脂的試劑A為稀釋液，加稀釋液至100 ml，制備成1∶10供試液，取1∶10供試液用稀釋液制備成1∶50供試液。

2.2 計數方法適用性試驗

2.2.1 試驗組①平皿法：取原液、1∶10或1∶50供試液10 ml分別加至無菌試管中，加入各試驗菌菌液0.1 ml，使試管中的菌液濃度≤100 cfu/ml。取上述含菌供試液1 ml注入平皿中，立即傾注熔化的胰酪大豆胨瓊脂培養基（需氧菌）或沙氏葡萄糖瓊脂培養基（霉菌和酵母菌）。②薄膜過濾法：取原液或1∶10供試液1 ml，加至20 ml試劑A中，全部過濾。用試劑A沖洗濾膜，每次100 ml，共沖洗3次，在最后一次沖洗液中分別加入≤100 cfu的試驗菌。將濾膜分別置于胰酪大豆胨瓊脂培養基（需氧菌）或沙氏葡萄糖瓊脂培養基（霉菌和酵母菌）平皿上。

2.2.2 陽性對照組用相應稀釋液代替供試液，參照試驗組試驗。

2.2.3 供試品組用試劑A代替菌液，參照試驗組試驗。

以上胰酪大豆胨瓊脂培養基平皿置于32.5℃培養，沙氏葡萄糖瓊脂培養基平皿置于22.5℃培養，逐日計數，計算回收結果。

2.2.4 試驗結果11種液體醫院制劑的計數方法適用性試驗結果見表1。表1數據表明各藥分別按對應方法進行試驗，各試驗菌的回收比值最終均在0.5～2范圍內，符合藥典要求。

表1 11種醫院制劑計數方法適用性試驗結果

2.3 控制菌方法適用性試驗

2.3.1 試驗組①大腸埃希菌：取1∶10供試液10 ml加至200 ml胰酪大豆胨液體培養基中，加入≤100 cfu的大腸埃希菌，32.5℃培養24 h。取上述培養物1 ml接種至100 ml麥康凱液體培養基中，42℃培養24 h。用無菌接種環取麥康凱液體培養基培養物，劃線接種至麥康凱瓊脂培養基平皿上，32.5℃培養24 h。②金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌：取1：10供試液10 ml加至200 ml胰酪大豆胨液體培養基中，分別加入≤100 cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌，32.5℃培養24 h。用無菌接種環取上述培養物，分別劃線接種至甘露醇氯化鈉瓊脂培養基（金葡）、溴化十六烷三甲基瓊脂培養基（銅綠）平皿上，32.5℃培養24 h。

2.3.2 陽性對照組用相應稀釋液代替供試液，參照試驗組試驗。

2.3.3 供試品組用試劑A代替菌液，參照試驗組試驗。

2.3.4 陰性對照組用相應稀釋液代替供試液，用試劑A代替菌液，參照試驗組試驗。

2.3.5 試驗結果各藥控制菌的方法適用性試驗結果見表2。供試品組和陰性對照組均未檢出，試驗組和陽性對照組均檢出對應試驗菌。表2數據表明，各藥按常規法進行控制菌方法適用性試驗，符合藥典要求。

表2 11種醫院制劑控制菌方法適用性試驗結果

3 討論

《中華人民共和國藥典》通則1105中規定“如供試品有抗菌活性，應盡可能去除或中和”[5]。本研究中，根據所檢制劑的特點，采用不同的方法，消除藥品的抗菌活性，以1%聚維酮碘和爐甘石洗劑為例。聚維酮碘是一種中效消毒劑，其釋放的游離碘進入細胞膜，使細胞蛋白質變性、凝固，從而發揮殺滅菌體、滅活病毒的作用[6]。爐甘石洗劑含有爐甘石和氧化鋅[7]，其中氧化鋅具有抑菌、消炎等作用，能抑制部分葡萄球菌，對炎癥部位有較好的消炎、復生作用[8]。這兩種制劑用平皿法進行計數方法適用性試驗時，均具有較強的抑菌活性，尤其對金黃色葡萄球菌的回收率均＜ 0.5。1%聚維酮碘因流動性較好，故采用薄膜過濾法使回收結果＞ 0.5。爐甘石洗劑含有不溶于水的成分，若采用薄膜過濾法易堵塞薄膜，故以卵磷脂和吐溫-80作為中和劑[9-11]，結合平皿法使金黃色葡萄球菌回收結果符合要求。

醫院制劑室不僅承擔配制和生產醫院制劑的責任，更需要為所生產制劑的質量、臨床用藥安全提供有效管理和保障。醫院制劑室進行制劑的微生物限度檢查時，存在未按藥典進行檢驗方法升級、微生物檢出率較高、抑菌藥物抑菌性未完全消除等問題[12]。本研究在探討醫院制劑微生物限度方法時，充分考慮各制劑的特點，制訂出適宜的方法，消除具有抑菌活性藥品的抑菌性，從而為檢出可能存在的微生物、有效控制制劑質量提供保障。雖然本研究的醫院制劑按照所得方法進行微生物限度檢查，結果均符合規定，但醫院制劑室還應加強日常質量控制，從工作人員、儀器設備、原料試劑、操作規程、生產環境等各個方面加強管理[12-15]。定期檢測生產、實驗、存儲場地的環境指標，重點檢查易引起醫院液體制劑微生物污染的關鍵環節（如純化水[2]、包裝[13]等）的微生物數量。通過過程監控，使制劑室的微生物得到有效控制，從而保證醫院制劑的質量。