茄子種子攜帶真菌的檢測

高 葦，楊利娟，劉亞全，王 勇，馬建芳

（1.天津市農業科學院植物保護研究所，天津 300384；2.天津市西青區農業技術推廣服務中心，天津 300381）

茄子（Solanum melongena L.）起源于亞洲南部熱帶地區，是一種以漿果為產品的1年或多年生草本植物。茄子是世界上第4大蔬菜作物，而我國是世界上最大的茄子生產國，全國各地均有種植，占世界總種植面積的42.14%。近年來，隨著我國設施農業栽培面積的不斷擴大，茄子已成為北方設施栽培的主要蔬菜種類之一。隨著設施茄子種植面積的逐年擴大，其病害發生也日益嚴重。目前已報道的茄子上真菌性病原有33屬56種，其中黃萎病、枯萎病、綿腐病、輪紋病等是茄子生產中的主要真菌病害，對我國茄子的產量和品種造成巨大的影響。

由于茄子生產中連作和果實容易腐爛等因素的影響，茄子制種中種子帶菌現象非常嚴重。茄子枯萎病、黃萎病病原均可被種子攜帶，其在病害傳播過程中擔當了重要傳播媒介。真菌可以吸附于種子表面或侵入種子組織內部，從而對種子萌發、幼苗生長、成株健康方面造成巨大的負面影響。目前，我國對于茄子種子攜帶真菌的研究屬于空白階段，鑒于近年來茄子種植中真菌病害，尤其是茄子枯萎病、黃萎病在我國逐年加重，對20個商品化茄子種子開展了種子帶菌檢測，以明確茄子種子攜帶病原真菌的情況，為茄子種植生產過程中的種子處理提供理論依據。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗在天津市植物保護研究所種苗病害研究室進行。供試商品化茄子種子有20個品種（表1），分別來自陜西、山東、河北等繁種基地，均在通風干燥的條件下保存。

1.2 種子帶菌檢測

1.2.1 種子外部帶菌檢測

采用吸水紙法，將無菌濾紙置于培養皿底部，加入無菌水浸潤濾紙保濕。在供試20個品種中，每品種隨機挑選90粒種子進行種子外部帶菌檢測，每個培養皿中鋪10粒種子，每個品種設3次重復，每個重復3皿。25 ℃黑暗培養24 h后，－20 ℃凍存24 h（抑制種子萌發），凍存后取出繼續25 ℃黑暗培養7 d，每天觀察各處理種子帶菌情況，5 d后發現霉層并直接挑取于PDA平板中純化培養，并在體視顯微鏡和光學顯微鏡下鏡檢，再根據形態進行種屬分類。統計不同品種茄子種子的帶菌數量，并計算其帶菌率，種子帶菌率＝（帶菌種子數/檢測種子總數）×100%。

1.2.2 種子內部帶菌檢測

將種子外部消毒處理后，置于PDA培養皿中分離培養，每個培養皿放入16粒種子（挑選籽粒不飽滿的種子，因為其帶菌率高），每個品種3個培養皿。當種子周圍長出菌絲或表面有霉層時，移入PDA培養基上進行純化培養，根據培養性狀和顯微形態特征進行分類鑒定。每個供試品種3次重復。計算種子的帶菌率和分離頻率，特定菌分離頻率＝（帶某類菌種子數/帶菌種子總數）×100%。

1.3 數據統計

采用SAS軟件對茄子種子外部帶菌率進行方差分析。

2 結果與分析

2.1 茄子種子表皮攜帶真菌檢測

由表1可知：從不同茄子種子表皮上分離到7個種子常見屬的真菌，其中曲霉菌、青霉菌、木霉菌、毛殼菌、根霉菌為腐生真菌，鐮刀菌和鏈格孢菌為茄子疑似病原真菌。種子表皮鐮刀菌、鏈格孢菌、毛殼菌的分離頻率較低，木霉菌、根霉菌、曲霉菌和青霉菌分離頻率較高，且不同來源茄子種子優勢腐生菌也存在差異。不同茄子品種表皮攜帶真菌的帶菌率具有差異，其中墨玉長茄和二苠茄的種子表皮帶菌率顯著高于其他商品種，黑龍長茄的帶菌率最低；另外，在分離過程中還發現文獻中未報道的其他病原真菌，但需經過進一步的分子試驗鑒定。

表1 茄子種子外部攜帶真菌種類及分離頻率 %

2.2 茄子種子內部攜帶真菌檢測

由表2可知：從供試的20個茄子種子的內部分離到7類真菌，其中包括鐮刀菌、鏈格孢菌2種病原真菌和青霉菌、木霉菌、毛殼菌、曲霉菌、根霉菌5種腐生真菌。種子內部攜帶真菌數量較少，腐生真菌的分離可能與試驗操作污染有關，僅在天賜黑油亮長茄品種上分離到鏈格孢菌，其分離頻率為40.00%；墨玉長茄上分離到鐮刀菌，其分離頻率為11.11%，而曾報道的茄子種子可能攜帶的黃萎病菌和綿疫病菌均未分離到。

表2 茄子種子內部攜帶真菌種類和分離頻率 %

3 結論與討論

種子帶菌可導致病害的逐年發生和遠距離傳播。植物病原真菌寄藏于種子表面或內部后均可隨種子萌發而侵染。種子表面帶菌量顯著高于種子內部帶菌量，種子表面攜帶根霉、曲霉等腐生菌較多，不同來源的種子其腐生菌種類具有差異，內部帶菌量較少，分離到的腐生菌很可能與試驗操作中污染相關。耿立華等、劉韜等、盧志軍等分別對西瓜、水稻和快菜不同品種進行種子帶菌檢測，發現不同種子外部帶菌差異較大，而內部帶菌差異不大，主要攜帶鏈格孢菌和鐮刀菌2種疑似病原菌。

通過對供試的20個茄子品種的檢測發現，其中13個茄子表皮攜帶鐮刀菌，16個茄子品種表皮攜帶鏈格孢菌，且這2種疑似病原菌的帶菌率較低，均在1.52%～13.64%。大多數情況下，鐮刀菌和鏈格孢菌為腐生菌。目前已報道的可侵染茄子的鏈格孢菌有12種，其中有5種在中國發現，分別為Aspergillus alternantherae、A.alternata、A.longipes、A.melongenae和A.solani，其中以鏈格孢菌（A.solani）和茄鏈格孢菌（A.melongenae）為主。我國報道的可侵染茄子的鐮刀菌有8種，分別為Fusarium anguioides、F.culmorum、F.graminearum、F.moniliforme、F.oxysporum、F.semitectum、F.solani和F.vasinfectum，其中以尖孢鐮刀菌（F.oxysporum）為主，并且其致病力最強，腐皮鐮刀菌（F.solani）多侵染嫁接茄子。本研究對茄子種子攜帶真菌進行的檢測，結果發現：茄子種子帶菌主要以腐生菌為主，未分離到報道的可通過種子傳播的黃萎病菌和綿疫病菌，種子表面分離到可引起茄子枯萎病和葉斑病的鐮刀菌和鏈格孢菌，但由于這2種病原菌不同菌株間存在顯著的致病力差異，需要進一步試驗判斷其是否具有致病力。