嗜硫小紅卵菌與噻蟲嗪組合對番茄病毒病的預防和防控效果

王秀芝 史曉斌 崔聰聰 李 杰 張曉梅 張松柏 杜曉華 譚新球 張德詠 劉 勇*

（1 赤峰市農牧科學研究所，內蒙古赤峰 024031；2 湖南省農業科學院植物保護研究所，湖南長沙 410125）

病毒病是番茄生產中最為常見的病害，發生和傳播都非常迅速，引起的損失也較為嚴重，可造成大幅度減產，甚至絕收。目前生產上危害較為嚴重的有番茄褪綠病毒（Tomato chlorosis virus，ToCV）和番茄黃化曲葉病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV）。這兩種病毒都是由介體昆蟲傳播，其中ToCV 由煙粉虱、白粉虱等以半持久方式傳播（Wisler et al.，1998），TYLCV 由煙粉虱以持久方式傳播（Brown &Czosnek，2002）。近年來隨著氣溫升高和田間煙粉虱的頻繁發生，番茄病毒病的發生日趨嚴重，并且在很多地區存在病毒病的復合侵染。

TYLCV 和ToCV 分 別 于2006 年 和2013 年 在我國大陸首次報道（Wu et al.，2006；Zhao et al.，2013）。目前ToCV 和TYLCV 在我國分布廣泛，且復合侵染情況較為普遍（趙黎明 等，2014；吳淑華等，2016；劉微 等，2018）。2018 年開始，筆者在內蒙古赤峰市寧城縣大城子鎮和松山區大廟鎮進行番茄病毒病的調查，發現有些棚戶的番茄植株表現褪綠和黃化曲葉的癥狀，采集樣品檢測發現，樣品存在ToCV 和TYLCV 的復合侵染。為規范番茄病毒病的綠色防控，減少化學農藥的使用，促進番茄綠色生產，2019 年和2020 年，筆者在該地區采用嗜硫小紅卵菌HNI-1 菌劑噴霧與噻蟲嗪蘸（灌）根組合的方式對番茄病毒病進行預防和防控，通過增強植物免疫和控制介體昆蟲的方式控制病毒病，以期達到較為理想的預防和防控效果，控制病毒病的擴散傳播，為其他地區番茄病毒病的防控提供借鑒和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試藥劑：2 億CFU · mL嗜硫小紅卵菌菌劑（HNI-1，懸浮劑）由長沙艾格里生物科技有限公司提供，25%噻蟲嗪水分散粒劑由瑞士先正達作物保護有限公司生產，2 種藥劑均在番茄上進行了登記。供試番茄品種為漢姆1 號，購自赤峰和潤農業高新科技產業開發有限公司。

1.2 試驗方法

小區設計：2019 年試驗在內蒙古赤峰市寧城縣大城子鎮設施番茄園區進行，2020 年試驗在內蒙古赤峰市松山區大廟鎮設施番茄園區進行。在兩處園區各選取了20 個溫室，其中10 個用于預防試驗，另外10 個用于防控試驗。預防試驗和防控試驗使用的溫室之間的距離大于10 m。每個溫室面積667 m，選取其中的一半進行藥劑處理，另外一半作為對照。

預防試驗用藥方法：播種前用HNI-1菌劑30mL兌水3kg拌種15min；在幼苗4葉期，用HNI-1 菌劑300 倍液噴霧1 次，每平米苗床噴1 000 g 藥液；移栽前2 d，用25%噻蟲嗪水分散粒劑2 000 倍液蘸根，每平米苗床使用2 000 g 藥液；定植后第5 天，用HNI-1 菌劑300 倍液噴霧，每667 m噴30 L 藥液。對照用清水處理。定植30 d后調查煙粉虱數量及番茄病毒病發病情況。

防控試驗用藥方法：田間調查時，在番茄開花后期植株表現出明顯的褪綠和黃化曲葉癥狀時，立即進行防控試驗。用HNI-1 菌劑300 倍液噴霧，每667 m噴30 L 藥液，每隔3 d 用藥1 次，連續用5 次，同時用25%噻蟲嗪水分散粒劑2 000 倍液灌根1次，每株50～100 mL藥液。對照用清水處理。待所有處理完成，間隔15 d 后調查煙粉虱數量及番茄病毒病發病情況。

調查方法：對每個處理共選取10 行番茄（第7、8、19、20、31、32、43、44、55、56 行）進行調查，統計每一行番茄總株數和每株番茄上的煙粉虱數量及病毒病發病情況，預防和防控試驗處理前后，根據表1 的病毒病病情調査分級標準（劉勇等，2018），調查統計總株數和各級病株數，計算病情指數。最后分別對10 個溫室的預防和防控結果取平均值，并進行方差分析。

表1 病毒病病情調査分級標準

病情指數=∑（各級病株數×相應級值）/（調查總株數×最高級值）× 100

1.3 番茄病毒病鑒定

2019 年和2020 年，分別將用于預防和防控試驗的20 個小區的600 份感病番茄葉片帶回實驗室，分別用CTAB 法和Trizol 法提取DNA 和RNA，提取后放于-20 ℃保存，用于后續的番茄病毒病（DNA病毒和RNA 病毒）檢測試驗。

分別用番茄上常見病毒（番茄黃化曲葉病毒TYLCV、番茄斑萎病毒TSWV、番茄褪綠病毒ToCV、黃瓜花葉病毒CMV、煙草花葉病毒TMV、番茄花葉病毒ToMV）的引物（Pan et al.，2012；孫潔 等，2014；王雪忠 等，2018；劉勇 等，2019）對每個小區的采集樣品進行擴增，引物信息見表2。PCR 產物經1%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，在凝膠成像系統上觀察并記錄結果。

表2 引物信息

1.4 數據分析

采用 SPSS 18.0 軟件進行統計分析，采用獨立樣本檢驗對預防和防控試驗中煙粉虱數量、番茄病毒病的病情指數進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 預防試驗中番茄病毒病病情指數和煙粉虱數量對比

2019 年預防試驗中共調查番茄2 978 株，2020年預防試驗中共調查番茄2 959 株。從表3 可以看出，2019 年清水對照的病毒病病情指數為8.254，而播種前使用HNI-1 菌劑拌種、4 葉期使用HNI-1菌劑噴霧和定植前使用噻蟲嗪蘸根處理的番茄病毒病病情指數僅為1.165；2020 年清水對照的病毒病病情指數為10.125，而播種前使用HNI-1 菌劑拌種、4 葉期使用HNI-1 菌劑噴霧和定植前使用噻蟲嗪蘸根的番茄，病毒病病情指數僅為1.572；兩年間藥劑處理與對照的差異均達到顯著水平，說明HNI-1 菌劑拌種、噴霧和噻蟲嗪蘸根處理能夠有效預防番茄病毒病的發生。從表3 也可以看出，與清水對照相比，使用HNI-1 菌劑拌種、噴霧和噻蟲嗪蘸根處理能顯著降低番茄植株上的煙粉虱數量，煙粉虱數量維持在6 頭 · 株以下。

表3 預防試驗中番茄病毒病病情指數和煙粉虱數量對比

2.2 防控試驗中番茄病毒病鑒定

防控試驗中用藥前對發病的10 個溫室的番茄葉片樣品進行PCR 擴增，結果表明，只有TYLCV和ToCV 的病毒引物擴增后出現目的條帶，而用其他病毒引物擴增后均沒有出現目的條帶。其中TYLCV 的條帶大小與預期目的條帶1 442 bp 大小一致，ToCV 的條帶大小與預期目的條帶450 bp大小一致（圖1）。說明該地區番茄病毒病主要為TYLCV 和ToCV。

圖1 用藥前番茄TYLCV 和ToCV 的PCR 驗證

2.3 防控試驗中番茄病毒病病情指數和煙粉虱數量對比

2019 年防控試驗中共調查番茄2 952 株，2020年防控試驗中共調查番茄2 935株。調查結果表明，用藥后顯著降低了番茄病毒病的病情指數和煙粉虱數量。從圖2 可以看出，2019、2020 年HNI-1菌劑噴霧和噻蟲嗪灌根處理15 d 后，病情指數顯著降低，分別為5.94、7.48。從圖3 可以看出，2019、2020 年HNI-1 菌劑噴霧和噻蟲嗪灌根處理后，與清水對照相比，番茄植株上的煙粉虱數量顯著降低，分別達到64.3、84.3 頭 · 株。

圖2 防控試驗中番茄病毒病病情指數對比

圖3 防控試驗中番茄上煙粉虱數量對比

2.4 防控試驗中番茄病毒病癥狀對比

2019 年和2020 年的防控試驗中，HNI-1 菌劑噴霧和噻蟲嗪灌根處理后番茄植株長勢均得到了明顯的改善，番茄褪綠癥狀明顯減輕，用藥前表現出褪綠癥狀的葉片邊緣逐漸恢復綠色，用藥前表現出黃化曲葉癥狀的植株頂端長出了新葉，且新葉沒有表現出發病癥狀（圖4）。

圖4 HNI-1 菌劑噴霧和噻蟲嗪灌根處理前后番茄病毒病癥狀對比

3 結論與討論

ToCV 首次發現于美國佛羅里達州，隨后在世界各國迅速傳播，給番茄等作物的生產造成嚴重損失（Wisler et al.，1998；Tzanetakis et al.，2013）。2013年ToCV在我國大陸發現（Zhao et al.，2013），隨后迅速傳播到北京、江蘇、山西、陜西、浙江等地（Karwitha et al.，2014；Zhao et al.，2014；鄭慧新 等，2016），對我國番茄生產造成了非常嚴重的危害。TYLCV 最早發現于以色列（Cohen &Harpaz，1964），隨后在全世界范圍內擴散傳播，于2006 年傳入我國內陸（Wu et al.，2006），目前已經在我國廣泛分布。隨著近年來ToCV在我國的發生，其與TYLCV在田間復合侵染，給番茄生產進一步造成嚴重的經濟損失。筆者在調查中發現，番茄植株主要表現為黃化曲葉和褪綠，室內檢測證實了存在TYLCV 和ToCV 的復合侵染。

目前對植物病毒病沒有特效藥劑，生產上常用的一些病毒抑制劑，如20%鹽酸嗎啉胍可濕性粉劑、0.5%葡聚烯糖可溶粉劑、30%毒氟磷可濕性粉劑等，可在一定程度上減輕ToCV 的危害（李嬌嬌 等，2016），但是并沒有一套能夠防控番茄病毒病的通用技術。在番茄種植的早期，如果能采用合理的技術進行預防，將大大降低番茄病毒病的發生，此外，在番茄發病后，如果能及時采用有效的防控技術，也可控制病毒病，有助于降低損失，保證產量（史曉斌 等，2020）。

本試驗采用防控介體昆蟲和提高植物防御反應的綜合措施來防治病毒病。煙粉虱分布于番茄的葉片背面，且容易遷飛，通過噴霧的方式達不到理想的防控效果，本試驗中采用噻蟲嗪蘸（灌）根的方式，在番茄生長的早期，使植物通過內吸作用吸收藥劑，達到對煙粉虱及其蟲卵的控制效果，降低了煙粉虱的種群數量，從而降低了病毒的傳播風險；另外，本試驗采用生物制劑嗜硫小紅卵菌菌劑，該藥劑可以通過提高植物的防御反應來提高植物抗病能力（Su et al.，2015）。使用嗜硫小紅卵菌菌劑后，番茄植株長勢明顯提高，抗病能力也得到增強，連續使用5 次后，病毒病病情指數顯著降低，病情得到了較好的控制。

綜上所述，通過連續兩年的預防和防控試驗，采用嗜硫小紅卵菌菌劑噴霧結合噻蟲嗪蘸（灌）根可有效控制介體昆蟲煙粉虱的發生及病毒的擴散，且操作簡單，成本低廉，降低了化學農藥的使用，可為番茄病毒病的科學有效防控提供重要借鑒。