慢性宮頸炎患者HPV感染狀況、基因型分布及其與陰道微生態(tài)指標(biāo)的相關(guān)性研究

張海琴，劉娟娟，婁俊麗，雷申瓊

銅川市婦幼保健院婦產(chǎn)科，陜西 銅川 727000

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)作為一種嗜上皮性病毒[1]，屬于乳頭多瘤空泡病毒科乳頭瘤病毒屬，分布廣泛，宿主特異性高。不同類型HPV的致病程度差異明顯[2]，高危型HPV感染是宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤病變的主要發(fā)病原因[3]，而低危型HPV 感染與生殖器尖銳濕疣等密切相關(guān)[4]。慢性宮頸炎是婦科門診較常見(jiàn)的疾病，多合并HPV 感染，同時(shí)慢性宮頸炎導(dǎo)致的宮頸糜爛，使病毒較易進(jìn)入細(xì)胞，增大HPV感染風(fēng)險(xiǎn)。近年來(lái)，陰道微生態(tài)的相關(guān)研究是宮頸病變領(lǐng)域的關(guān)注熱點(diǎn)[5-6]，許多婦科類疾病均與陰道微生態(tài)的狀態(tài)有緊密聯(lián)系[7-8]。有鑒于此，本研究分析慢性宮頸炎患者HPV感染分型的篩查結(jié)果，并探討其與陰道微生態(tài)相關(guān)指標(biāo)的相關(guān)性，以期為臨床宮頸疾病的篩查、防治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月至2020 年12月于銅川市婦幼保健院婦科門診收治的140 例慢性宮頸炎患者為研究對(duì)象(病例組)，年齡18～65 歲，平均(34.56±10.82)歲，體質(zhì)指數(shù)(22.49±2.74)kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合臨床上宮頸炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]，經(jīng)臨床宮頸組織病理學(xué)檢查確診；②有既往性生活史；③患者對(duì)研究了解知情，并簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近3 d用藥清洗陰道者；②有子宮切除手術(shù)史；③妊娠、孕期婦女；④近期有服用免疫抑制劑者；⑤患免疫缺陷疾病，如艾滋病等。另選取同期在我院體檢的健康婦女60例作為正常組，年齡18～60歲，平均(33.70±9.56)歲，體質(zhì)指數(shù)(22.75±2.93)kg/m2。兩組受檢者的年齡、體質(zhì)指數(shù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測(cè)方法 全部受試者接受陰道微生態(tài)檢查與HPV 感染篩查。HPV 檢測(cè)方法：使用無(wú)菌窺陰器，經(jīng)生理鹽水潤(rùn)滑后緩慢放入患者陰道內(nèi)，輕拭去宮頸口黏液，宮頸充分暴露后，使用樣本刷在宮頸管2 cm處和宮頸外口旋轉(zhuǎn)3 圈，停留15 s，作為樣本置于小管中，分離提取樣本的HPV-DNA，使用試劑盒(迪安生物技術(shù)公司提供)采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法擴(kuò)增和雜交，然后通過(guò)反向雜交技術(shù)證實(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物和雜交結(jié)果，定性檢測(cè)堿性磷酸酶系統(tǒng)，同時(shí)可鑒別HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68和6、11、43、44 等不同基因型，試劑盒由上海信裕生物科技公司提供。陰道微生態(tài)檢測(cè)：患者使用生理鹽水沖洗外陰，使用無(wú)菌棉簽由陰道壁上1/3 取得陰道分泌物，棉簽上可見(jiàn)清晰的陰道分泌物即為取樣成功，采用細(xì)菌性陰道炎(BV)三聯(lián)法檢測(cè)分泌物中的白細(xì)胞酯酶、唾液酸甘酶，使用顯微鏡觀察分泌物中乳酸桿菌、滴蟲(chóng)等的檢出情況，使用pH試紙測(cè)定陰道分泌物pH值。

1.3 觀察指標(biāo) (1)根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[10]檢測(cè)所有受試者的陰道微生態(tài)指標(biāo)(白細(xì)胞酯酶、唾液酸甘酶、pH 值、乳酸桿菌)并進(jìn)行診斷。陰道微生態(tài)正常：唾液酸甘酶陰性，優(yōu)勢(shì)菌為乳酸桿菌，pH≤4.5，陰道分泌物中未發(fā)現(xiàn)滴蟲(chóng)、菌絲；白細(xì)胞酯酶陽(yáng)性：pH≤4.5，陰道分泌物未發(fā)現(xiàn)滴蟲(chóng)、菌絲，白細(xì)胞酯酶陽(yáng)性。(2)檢測(cè)所有受試者的HPV基因型分布及患者的HPV多重感染情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman相關(guān)分析高危型HPV感染與慢性宮頸炎患者陰道微生態(tài)指標(biāo)的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病例組患者的HPV 多重感染情況 病例組患者中檢出HPV陽(yáng)性72例，其中59例為單一感染，占42.14%，13 例為多重感染，占9.29%，以高危型多重感染為主，見(jiàn)表1。

表1 病例組患者的HPV多重感染情況[例（%）]

2.2 兩組婦女的HPV 分型檢出率比較 病例組患者的HPV6、HPV16檢出率高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組婦女的HPV分型檢出率比較[例（%）]

2.3 兩組婦女的陰道微生態(tài)指標(biāo)比較 病例組患者的乳酸桿菌多分布、陰道pH＞4.5 占比分別為62.86%、60.00%，明顯高于正常組的36.67%、43.33%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；病例組患者的白細(xì)胞酯酶陽(yáng)性率、唾液酸甘酶陽(yáng)性率分別為69.29%和61.43%，明顯高于正常組的48.33%和45.00%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而兩組受檢者的滴蟲(chóng)陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表3。

表3 兩組婦女的陰道微生態(tài)指標(biāo)比較[例（%）]

2.4 不同HPV基因型患者的陰道微生態(tài)指標(biāo)比較 高危型患者的乳酸桿菌多分布占比為34.78%，明顯低于低危型患者的66.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；高危型患者的白細(xì)胞酯酶、唾液酸甘酶陽(yáng)性率分別為56.52%和60.87%，明顯高于低危型患者的27.78%和33.33%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而兩組受檢者的的陰道pH、滴蟲(chóng)陽(yáng)性率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表4。

表4 不同HPV基因型患者的陰道微生態(tài)指標(biāo)比較[例（%）]

2.5 高危型HPV感染與慢性宮頸炎患者陰道微生態(tài)指標(biāo)的相關(guān)性 高危型HPV感染與慢性宮頸炎患者的乳酸桿菌、白細(xì)胞酯酶、唾液酸甘酶呈正相關(guān)(r=0.684，P=0.018；r=0.523，P=0.025；r=0.621，P=0.020)。

3 討論

陰道作為女性開(kāi)放性的腔道，能反映婦女體內(nèi)重要微生態(tài)群、宿主及環(huán)境的動(dòng)態(tài)平衡。一般健康女性的陰道環(huán)境呈酸性，而陰道微生態(tài)的核心是陰道菌群，以乳酸桿菌為代表。既能維持陰道酸性環(huán)境、激活機(jī)體免疫力，也能作為屏障阻斷外界菌種侵襲。HPV 是在婦女陰道中較為多見(jiàn)的病原體，正常情況不會(huì)造成感染；而當(dāng)陰道微生態(tài)失調(diào)，HPV 持續(xù)感染，可導(dǎo)致宮頸上皮增生、甚至發(fā)展成宮頸癌。有報(bào)道指出[11]，長(zhǎng)期的HPV 感染是宮頸癌的重要病因；同時(shí)高危型HPV 感染也極易導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生[12]。所以本研究通過(guò)分析宮頸炎患者不同HPV基因型、感染情況以及與陰道微生態(tài)的關(guān)系，有助于完善早期篩查項(xiàng)目，為宮頸癌的臨床防治提供可參考的建議。

本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，140例慢性宮頸炎患者中，檢出HPV 陽(yáng)性72 例，其中59 例為單一感染(42.14%)，13 例為多重感染(9.29%)，以高危型多重感染為主，這一結(jié)果與葉云等[13]的研究結(jié)果基本類似。同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)，病例組HPV6、HPV16 檢出率均高于正常組，與方美玉[14]的研究結(jié)果基本保持一致。

另一方面，本研究結(jié)果顯示，病例組的乳酸菌分布情況、陰道pH、白細(xì)胞酯酶陽(yáng)性率、唾液酸甘酶陽(yáng)性率與正常組之間存在明顯差異；而兩組滴蟲(chóng)陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示相比正常婦女，慢性宮頸炎患者的陰道微生態(tài)明顯失衡，而陰道微生態(tài)失衡，造成大量外來(lái)病菌侵襲，對(duì)宮頸上皮細(xì)胞產(chǎn)生不同程度的損害，可能是導(dǎo)致宮頸炎產(chǎn)生的重要原因。同時(shí)，本研究還表明，在不同HPV 基因型患者的陰道微生態(tài)指標(biāo)比較中，高危型患者與低危型患者的乳酸菌分布、白細(xì)胞酯酶陽(yáng)性率、唾液酸甘酶陽(yáng)性率比較，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但兩組的陰道pH、滴蟲(chóng)陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示高危型HPV感染者的陰道微生態(tài)失衡狀態(tài)比低危型HPV 感染者更嚴(yán)重，GODOY等[15]、謝建萍等[16]在報(bào)道中亦持相似觀點(diǎn)。至于兩組的陰道pH無(wú)明顯差異，與之前病例組、正常組的結(jié)果不同，推測(cè)是樣本量較少所致，同時(shí)陰道分泌物采集過(guò)程中亦存在一定差異，對(duì)此尚需今后做進(jìn)一步深入研究。

最后對(duì)高危型HPV 感染和慢性宮頸炎患者陰道微生態(tài)指標(biāo)的相關(guān)性分析中，研究結(jié)果顯示，高危型HPV感染與陰道微生態(tài)指標(biāo)(乳酸桿菌、白細(xì)胞酯酶、唾液酸甘酶)均呈正相關(guān)，且相關(guān)性系數(shù)均大于0.5，提示陰道微生態(tài)指標(biāo)與慢性宮頸炎患者的高危型HPV 感染具有較高的相關(guān)性。原因可能是乳酸桿菌下降，表現(xiàn)為H2O2缺乏，進(jìn)而影響陰道酸性環(huán)境，抑制致病微生物的能力減弱，增加宮頸HPV 尤其是高危型HPV 感染風(fēng)險(xiǎn)。羅秀清等[17]在相關(guān)研究中同樣表示陰道微生態(tài)失衡與高危HPV 感染有一定關(guān)系；但同時(shí)也有研究顯示[18]，高危型HPV感染的原因和危險(xiǎn)因素可能包括過(guò)度的陰道沖洗、無(wú)保護(hù)措施的性生活等，且高危型HPV 感染率未伴隨乳酸桿菌下降而增加，表明兩者之間具體相關(guān)性亟待于大量臨床實(shí)踐予以證實(shí)。

綜上所述，慢性宮頸炎患者HPV 感染率較高，多為單一感染，復(fù)合型感染以高危型多重感染為主；且慢性宮頸炎患者存在陰道微生態(tài)失衡，高危型HPV感染與陰道微生態(tài)指標(biāo)存在較強(qiáng)的相關(guān)性。但本研究仍存在不足之處，如針對(duì)高危型、低危型HPV 感染與陰道微生態(tài)相關(guān)性研究樣本不足，具體機(jī)制仍未完全清楚，今后應(yīng)擴(kuò)大樣本量，多中心研究予以深入探明。