不同免疫檢驗(yàn)方法對(duì)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的檢測(cè)效果對(duì)比

郭瑩瑩

摘 ?要：目的 ?探討不同免疫檢驗(yàn)方法對(duì)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的檢測(cè)效果。方法 ?選取2019年6月～2020年5月單縣東大醫(yī)院收治的80例疑似乙肝病毒感染的患者作為研究對(duì)象，首先進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)，之后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）檢測(cè)。將實(shí)時(shí)熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）所檢測(cè)的結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比CLIA與ELISA對(duì)于乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的診斷特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率，以及乙肝病毒感染各項(xiàng)血清標(biāo)志物的診斷陽(yáng)性率。結(jié)果 ?實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)診斷出49例患者乙肝患者。CLIA與ELISA診斷的特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。CLIA對(duì)乙肝病毒HBeAb、HBeAg、HBsAg的診斷陽(yáng)性率高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CLIA對(duì)于患者的檢測(cè)成本高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 ?相較于ELISA，CLIA對(duì)于乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的檢測(cè)效果更為理想，適于臨床應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：化學(xué)發(fā)光免疫分析法;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);乙型肝炎;乙肝病毒;血清標(biāo)志物

中圖分類號(hào)：R446.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-8011（2022）-4-0125-03

乙型肝炎簡(jiǎn)稱為乙肝，是指由乙肝病毒所致的以肝臟病變?yōu)橹鞯膫魅拘约膊。R床表現(xiàn)為惡心、食欲減退、肝區(qū)疼痛、上腹部不適、疲勞乏力等癥狀，隨著病情的進(jìn)展可進(jìn)一步誘發(fā)肝硬化與肝癌，嚴(yán)重影響患者的健康與生活質(zhì)量[1]。因此，盡早采取有效的檢測(cè)措施明確診斷乙肝病毒感染，并為患者開(kāi)展積極有效的治療，對(duì)于防控疾病與改善病情具有重要的意義[2]。目前，臨床主要采取化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）對(duì)乙肝病毒血清標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，但臨床對(duì)于兩種技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值一直存在爭(zhēng)議[3-4]。為了進(jìn)一步保障乙肝的防治工作質(zhì)量，本研究選取2019年6月～2020年5月單縣東大醫(yī)院收治的80例疑似乙肝病毒感染的患者作為研究對(duì)象，對(duì)其血清標(biāo)志物分別應(yīng)用了CLIA與ELISA檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

選取2019年6月～2020年5月單縣東大醫(yī)院收治的80例疑似乙肝病毒感染的患者作為研究對(duì)象，男45例，女35例;年齡22～68歲，平均年齡（45.60±8.63）歲;合并高脂血癥6例，高血壓5例，糖尿病4例。本次研究?jī)?nèi)容已向患者進(jìn)行充分告知，本研究經(jīng)單縣東大醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后開(kāi)展。

1.2 ?納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①與乙肝患者有密切接觸史;②因下肢水腫、全身乏力、皮膚黃染、食欲不振、肝區(qū)疼痛等癥狀就診。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①血液系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)疾病者;②嚴(yán)重臟器功能障礙者;③其他類型肝炎或肝臟疾病者;④其他病毒性感染者;⑤惡性腫瘤者;⑥哺乳期與妊娠期女性;⑦有精神疾病史者。

1.3 ?方法

患者均在清晨空腹時(shí)采集肘靜脈血5 mL，在4 ℃的狀態(tài)下以3000 r/min的速度離心10 min，留置上清液待檢。首先進(jìn)行ELISA檢測(cè)：在室溫狀態(tài)下將微孔反應(yīng)條與ELISA試劑放置30 min，向微孔反應(yīng)條中加入待檢測(cè)血清樣本，以封片對(duì)其封鎖處理，放置在溫度為37 ℃的水浴箱中60 min，之后去除微孔反應(yīng)條中液體，反復(fù)洗滌5次，將試劑加入反應(yīng)條，封鎖。之后進(jìn)行CLIA檢測(cè)：聚苯乙烯試管（包被完HBV核心抗原）內(nèi)加入血清樣本，標(biāo)記辣根過(guò)氧化物酶100 μL，并在37 ℃的狀態(tài)下放置2 h，之后以PBS緩沖液進(jìn)行3次反復(fù)沖洗，沖洗時(shí)間為3 min/次，加入魯米諾（30 mol/L）與氫氧化鈉（0.1 mol/L）各100 μL，室溫狀態(tài)下放置10 min，加入3%過(guò)氧化氫100 μL，以發(fā)光儀檢測(cè)發(fā)光的強(qiáng)度。取血清樣本給予實(shí)時(shí)熒光定量多聚酶鏈反應(yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)，即通過(guò)實(shí)時(shí)熒光分析儀（型號(hào)Roche LC480）與配套試劑進(jìn)行檢測(cè)，具體操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書執(zhí)行。

1.4 ?觀察指標(biāo)

將實(shí)時(shí)熒光定量PCR所檢測(cè)的結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比CLIA與ELISA對(duì)于乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的診斷特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率。特異度=真陰例數(shù)/（假陽(yáng)+真陽(yáng)）例數(shù)×

100%。敏感度=真陽(yáng)例數(shù)/（真陽(yáng)+假陰）例數(shù)×100%。準(zhǔn)確率=（真陰+真陽(yáng)）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

比較CLIA與ELISA對(duì)于乙肝病毒感染各項(xiàng)血清標(biāo)志物的診斷陽(yáng)性率，參考值上限（陽(yáng)性）：乙肝表面抗原（Hepatitis B surface antigen，HBsAg）>0.2 ng/mL、乙型肝炎E抗原（Hepatitis B e antigen，HBeAg）>0.05 NCU/mL、乙肝表面抗體（Hepatitis B surface Antibody，HBsAb）>10 mU/mL、乙型肝炎E抗體（Hepatitis B e antibody，HBeAb）>2 NCU/mL、乙肝核心抗體（Hepatitis B core antibody，HBcAb）>1.5 NCU/mL。

對(duì)比兩組患者的檢測(cè)成本。

1.5 ?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用（x±s）表示，組間比較行t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較行字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 ?CLIA與ELISA對(duì)乙肝診斷結(jié)果分析

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)診斷出49例乙肝患者，其中31例HBV-DNA為陰性，但為HBV感染。見(jiàn)表1。CLIA與ELISA診斷乙肝的特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

2.2 ?CLIA與ELISA對(duì)乙肝病毒各項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)的診斷陽(yáng)性率比較

CLIA對(duì)乙肝病毒HBeAb、HBeAg、HBsAg的診斷陽(yáng)性率高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;CLIA與ELISA對(duì)HBcAb、HBsAb的診斷陽(yáng)性率對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表3。

2.3 ?CLIA與ELISA的檢測(cè)成本比較

CLIA對(duì)于乙肝患者的檢測(cè)成本高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)表4。

3 ?討論

乙肝在臨床十分常見(jiàn)，該病具有較強(qiáng)的傳染性，可通過(guò)汗液、母嬰、血液與性等多種途徑傳播[5]。相關(guān)調(diào)查[6]顯示，我國(guó)攜帶乙肝病毒的群體數(shù)量已高達(dá)9300萬(wàn)人，且隨著交通行業(yè)的發(fā)展，其發(fā)病率仍呈攀升趨勢(shì)。目前，鑒于乙肝的高發(fā)病率，臨床主要采用“以防為主，防治結(jié)合”的防控理念，然而由于乙肝病毒長(zhǎng)期潛伏于患者體內(nèi)，當(dāng)激活病毒后才可發(fā)病，往往不具備典型的癥狀表現(xiàn)，所以極易發(fā)生漏診與誤診情況[7]。因此，探尋一種可靠的檢測(cè)技術(shù)盡早明確乙肝病毒感染患者的病情，對(duì)于強(qiáng)化疾病防治工作意義重大[8]。

乙肝病毒血清學(xué)檢測(cè)是乙肝患者的主要診斷方法，近年來(lái)隨著生物學(xué)技術(shù)研究的不斷深入，CLIA與ELISA技術(shù)也在乙肝毒病血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)中發(fā)揮出了重要的作用[9-10]。然而，臨床對(duì)于CLIA與ELISA技術(shù)的臨床應(yīng)用效果仍存在一定的爭(zhēng)議[11]。ELISA是一種低成本的檢測(cè)技術(shù)，其主要檢測(cè)包被在固相板孔內(nèi)的抗體與抗原，并以酶標(biāo)記抗體，在固相載體上吸附已知抗體，并通過(guò)底物上酶的顯色識(shí)別抗體情況，雖然操作簡(jiǎn)便，且間接的檢測(cè)方法易使結(jié)果存在誤差[12-13]。CLIA是在ELISA的基礎(chǔ)上改進(jìn)而成的檢測(cè)技術(shù)，其通過(guò)微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)患者體內(nèi)微量成分，可以在短時(shí)間內(nèi)獲取準(zhǔn)確的結(jié)果[14]。同時(shí)，CLIA不受突變抗體的干擾，明確標(biāo)記物來(lái)源，利于有效識(shí)別出逃逸的變異株，減少人為因素對(duì)于測(cè)定結(jié)果的影響，具有顯著的檢測(cè)準(zhǔn)確率。辛?xí)躁?yáng)等[15]對(duì)80例疑似乙肝患者應(yīng)用了ELISA與CLIA法進(jìn)行乙肝病毒血清學(xué)檢測(cè)，并以PCR檢驗(yàn)結(jié)果作為參照，結(jié)果顯示CLIA與ELISA方法檢測(cè)的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而CLIA檢測(cè)HBeAb、HBeAg、HBsAg的診斷陽(yáng)性率高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。本研究結(jié)果與上述結(jié)果相近，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)診斷出49例乙肝患者，其中CLIA診斷的特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率與ELISA對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。CLIA對(duì)乙肝病毒HBeAb、HBeAg、HBsAg的診斷陽(yáng)性率高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。可見(jiàn)，CLIA與ELISA對(duì)于乙肝診斷均具有良好的效果，但CLIA有效避免了人為原因所致的失誤，進(jìn)一步增加了血清標(biāo)志物檢測(cè)的準(zhǔn)確性。金剛[16]對(duì)110例乙肝病毒感染患者分別應(yīng)用了CLIA與ELISA進(jìn)行免疫檢測(cè)，結(jié)果顯示CLIA檢測(cè)成本高于ELISA。本研究中，CLIA對(duì)乙肝患者的檢測(cè)成本高于ELISA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。相較于ELISA，CLIA檢測(cè)項(xiàng)目較多，在一定程度了提高了檢測(cè)成本。

綜上所述，相較于ELISA，CLIA對(duì)于乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的檢測(cè)效果更為理想，適于臨床應(yīng)用。

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