神經酸口服乳劑的處方及制備工藝優化

陳文靜 付加雷 孫丹丹 于蓓蓓 生立嵩 閆雪生

中圖分類號 R943 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2022）04-0458-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.04.13

摘 要 目的 制備神經酸口服乳劑，對其處方及制備工藝進行優化，并考察其穩定性。方法 通過機械法制備神經酸口服乳劑。在單因素實驗的基礎上，以乳劑外觀、離心穩定性、離心穩定常數（Ke）、粒徑為指標，采用正交實驗設計，以油酸用量、辛基苯酚聚氧乙烯醚-10用量、丙二醇用量為因素，對其處方進行優化;以乳化溫度、剪切時間、高壓均質壓力、高壓均質循環次數為因素，對其制備工藝進行優化;采用高效液相色譜法測定神經酸含量，采用高溫試驗、加速試驗和長期試驗考察神經酸口服乳劑的穩定性。結果 最優處方及制備工藝為神經酸原料藥1 g、油酸用量5%、辛基苯酚聚氧乙烯醚-10用量4%、丙二醇用量2%、乳化溫度60 ℃、剪切時間2 min、高壓均質壓力40 MPa、高壓均質循環2次。經3次實驗驗證，所得神經酸口服乳劑的平均粒徑為158.05 nm（RSD=1.58%，n=3），平均Ke為0.39（RSD=1.49%，n=3），外觀呈均一乳白色，均無分層現象。高溫試驗結果顯示，神經酸口服乳劑在高溫環境中易出現分層現象，神經酸的含量有所增加;加速試驗及長期試驗結果顯示，神經酸口服乳劑在室溫下放置6個月的外觀、神經酸含量均無明顯變化。結論 所得最優處方及制備工藝穩定、可行，可用于神經酸口服乳劑的制備;神經酸口服乳劑不適宜放置于高溫環境中，在室溫環境下放置6個月的穩定性較好。

關鍵詞 神經酸口服乳劑;處方優化;制備工藝優化;正交實驗設計;高效液相色譜法;樣品穩定性

Optimization of formulation and preparation technology of Neuritic acid oral emulsion

CHEN Wenjing1，FU Jialei2，SUN Dandan2，YU Beibei2，SHENG Lisong2，YAN Xuesheng2（1. School of Pharmacy， Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Jinan 250355， China; 2. Shandong Academy of Chinese Medicine， Jinan 250014， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE To prepare Neuritic acid oral emulsion， to optimize its formulation and preparation technology， and to investigate its stability. METHODS Neuritic acid oral emulsion was prepared by mechanical method. On the basis of single factor experiment， the appearance， centrifugal stability， centrifugal stability constant （Ke） and particle size of the emulsion as indexes， the formulation was optimized by orthogonal design， taking the dosage of oleic acid， octylphenol polyoxyethylene ether-10 and propylene glycol as factors， the preparation technology was optimized by taking emulsification temperature， shear time， pressure of high-pressure homogenization and cycle times of high-pressure homogenization as factors. The content of neuritic acid was determined by high performance liquid chromatography. The stability of Neuritic acid oral emulsion was investigated by high temperature test， accelerated test and long-term test. RESULTS The optimal formulation and preparation technology were as follows： neuritic acid of 1 g， oleic acid of 5%， octylphenol polyoxyethylene ether-10 of 4%， propylene glycol of 2%， emulsification temperature of 60 ℃ ， shear time of 2 min， homogenization pressure of 40 MPa and cycle times of twice. After three experiments， the average particle size of Neuritic acid oral emulsion was 158.05 nm （RSD=1.58%， n=3）， the average Ke was 0.39 （RSD=1.49%， n=3）， and the appearance was uniform milky white， there was no stratification. The results of high temperature test showed that Neuritic acid oral emulsion was prone to stratification in high temperature environment， and the content of neuritic acid increased. The results of accelerated test and long-term test showed that there was no significant change in the appearance or the content of neuritic acid when Neuritic acid oral emulsion was placed at room temperature for 6 months. CONCLUSIONS The formulation and preparation technology are stable and feasible， and can be used for the preparation of Neuritic acid oral emulsion. Neuritic acid oral emulsion should not be placed in high temperature environment. It has good stability at room temperature for 6 months.

KEYWORDS? ?Neuritic acid oral emulsion; formulation optimization; preparation technology optimization; orthogonal design; high performance liquid chromatography; sample stability

神經酸是一種含24個碳原子和1個雙鍵的不飽和脂肪酸，最早被發現于哺乳動物的神經組織中[1]。神經酸是構成大腦神經細胞和神經組織的核心天然成分，能促進受損神經組織修復和再生，對防止腦神經細胞衰老有很大作用[2]。神經酸具有多種藥理活性，如健腦益智、增強免疫、防治腦病和艾滋病等[3-6]。由于神經酸難溶于水、生物利用度低且不穩定，需避光低溫保存，使得其臨床應用受到限制。乳劑作為一種藥物傳遞系統，具有改善藥物溶解度、提高生物利用度等特點[7]。因此，將水溶性差、脂溶性好的神經酸制成乳劑可以有效避免其難溶于水和在制劑中分散不均等問題。但乳劑為熱力學不穩定體系，易發生分層、破裂、絮凝、轉相等現象，故需要篩選出合適的處方及工藝參數，以保證所得乳劑的穩定性。基于此，本研究利用機械法制備神經酸口服乳劑，采用正交實驗設計，以神經酸口服乳劑外觀、離心穩定性、離心穩定常數（centrifugal stability constant，Ke）、粒徑為指標，油酸用量、乳化劑用量、丙二醇用量為因素，對其處方進行優化;以乳化溫度、剪切時間、高壓均質壓力、高壓均質循環次數為因素，對其制備工藝進行優化;采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法測定神經酸的含量，采用高溫、加速和長期試驗考察神經酸口服乳劑的穩定性，旨在為神經酸口服乳劑的研究及開發提供依據。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有UV-Vis2450型紫外-可見分光光度儀（日本Shimadzu公司），UltiMate 3000型HPLC儀及配備的自動進樣器、柱溫箱、檢測器（美國Thermo Fisher Scientific公司），BSM 220.4型電子天平（上海卓精電子科技有限公司），BT-1100型電子天平（啟東友銘衡器有限公司），HH-4型數顯電子恒溫水浴鍋（常州博遠實驗分析儀器廠），MS-H280型恒溫磁力攪拌器（山東博科科學儀器有限公司），JRJ-300-Ⅰ型剪切乳化攪拌機（上海標本模型廠），FB-110Q型高壓均質機（上海勵途機械設備工程有限公司），90 Plus PALS型納米粒度電位儀（北京海鑫瑞科技有限公司），X-30R型全能高速冷凍離心機（美國Beckman Coulter公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

神經酸原料藥（批號20190015，純度>85%）購自西安萬方生物科技有限公司;神經酸對照品（批號20201115，純度>98%）購自南京普怡生物科技有限公司;油酸（批號20201030）購自天津市科密歐化學試劑有限公司;乳化劑辛基苯酚聚氧乙烯醚-10（octylphenol polyoxyethylene ether-10，OP-10，批號C12199604）購自上海麥克林生化科技有限公司;丙二醇（批號100420210103）購自湖南爾康制藥股份有限公司;甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純，水為純凈水。

2 方法與結果

2.1 神經酸口服乳劑的制備

取神經酸原料藥1 g，溶于一定量的油酸中，于適宜乳化溫度下保溫，作為油相;取一定量的OP-10與丙二醇，溶于適量水中，于同一乳化溫度下充分溶解，作為水相;將上述油相緩慢滴入水相中，攪拌，加完油相后再繼續攪拌5 min，然后加入剩余處方量的水（于同一乳化溫度下保溫），于剪切乳化攪拌機中以4 000 r/min剪切一定時間，充分混合均勻，制成初乳。取初乳，在一定壓力下于高壓均質機中循環數次，即得[8]。

2.2 神經酸口服乳劑的評價指標

2.2.1 外觀

合格的乳劑應符合如下外觀特征：靜止時不分層，無油滴漂浮在表面，振搖后不掛壁或液體能迅速滑落，色澤均一。

2.2.2 離心穩定性

取神經酸口服乳劑適量，置于離心管中，以4 000 r/min離心15 min，不應有分層現象[9]。如有分層現象標記為“-”，無需測定粒徑及Ke;如無分層現象標記為“+”，需測定粒徑及Ke。

2.2.3 粒徑的測定

取神經酸口服乳劑50 μL，用水稀釋80倍，裝入專用樹脂比色皿中，置于納米粒度電位儀中，于溫度25 ℃、測試角90°條件下測定3次，計算平均粒徑。普通乳劑粒徑范圍為1～100 μm，亞微乳粒徑范圍為0.1～1.0 μm，口服乳劑粒徑范圍符合兩者之一即可[10]，且粒徑越小，乳劑越優[7]。

2.2.4 Ke的測定

取神經酸口服乳劑適量，置于離心管中，以4 000 r/min離心15 min，取出，用移液槍精密量取試管底部樣品50 μL，置于10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，以水為空白，采用紫外-可見分光光度計于500 nm波長處測定吸光度（A）[11]。同法測定未經離心的神經酸口服乳劑的吸光度（A0），按下式計算Ke：Ke=（A0-A）/A0（0

2.3 神經酸口服乳劑處方的優化

2.3.1 單因素實驗

（1）油酸用量：取神經酸原料藥1 g，固定OP-10用量7%、丙二醇用量5%，乳化溫度70 ℃，以4 000 r/min剪切一定時間，在一定壓力下于高壓均質機中循環數次，按“2.1”項下方法操作，考察不同油酸用量（5%、10%、15%、20%、25%、30%）對神經酸口服乳劑外觀、離心穩定性、粒徑及Ke的影響。結果顯示，當油酸用量為5%時，所得口服乳劑呈均一乳白色，但振搖后有掛壁現象;粒徑雖符合口服乳劑的粒徑范圍，但偏大;Ke雖為最小，但所得口服乳劑靜置24 h內可見分層現象。當油酸用量為10%時，所得口服乳劑呈均一乳白色，振搖后不掛壁，亦未出現分層現象，粒徑、Ke相對較小，故選擇油酸用量為10%。結果見表1。

（2）OP-10用量：取神經酸原料藥1 g，固定丙二醇用量5%、油酸用量10%，乳化溫度70 ℃，以4 000 r/min剪切一定時間，在一定壓力下于高壓均質機中循環數次，按“2.1”項下方法操作，考察不同OP-10用量（2%、4%、6%、8%、10%、12%）對神經酸口服乳劑外觀、離心穩定性、粒徑及Ke的影響。結果顯示，當OP-10用量為4%時，所得口服乳劑呈均一乳白色，振搖后不掛壁，亦未出現分層現象，粒徑及Ke均為最小，故選擇OP-10用量為4%。結果見表2。

+：離心后無分層現象;-：離心后有分層現象;/：無需測定

（3）丙二醇用量：取神經酸原料藥1 g，固定油酸用量10%、OP-10用量4%，乳化溫度70 ℃，以4 000 r/min剪切一定時間，在一定壓力下于高壓均質機中循環數次，按“2.1”項下方法操作，考察不同丙二醇用量（2%、4%、6%、8%、10%、12%）對神經酸口服乳劑外觀、離心穩定性、粒徑及Ke的影響。結果顯示，當丙二醇用量為4%時，所得口服乳劑呈均一乳白色，振搖后不掛壁，亦未出現分層現象，Ke為最小，粒徑相差不大，故選擇丙二醇用量為4%。結果見表3。

+：離心后無分層現象

2.3.2 正交實驗

在單因素實驗的基礎上，以油酸用量（A/%）、OP-10用量（B/%）、丙二醇用量（C/%）為因素，神經酸口服乳劑粒徑及Ke為指標，采用L9（34）正交實驗設計對神經酸口服乳劑的處方進行優化。神經酸口服乳劑處方的因素與水平見表4，設計方案與結果見表5，方差分析結果見表6。

由表5、表6可知，各因素對神經酸口服乳劑粒徑的影響由大到小依次為A>C>B，但上述影響均無統計學意義（P>0.05）。各因素對神經酸口服乳劑Ke的影響由大到小依次為A>B>C;其中，油酸用量、OP-10用量對神經酸口服乳劑Ke的影響有統計學意義（P<0.05），而丙二醇用量對Ke的影響無統計學意義（P>0.05）。綜合考慮，得最優處方為A1B2C1，即油酸用量為5%，OP-10用量為4%，丙二醇用量為2%。

2.4 神經酸口服乳劑制備工藝的優化

2.4.1 單因素實驗

（1）乳化溫度：取神經酸原料藥1 g，按“2.3”項下最優處方，固定剪切時間4 min、高壓均質壓力50 MPa、高壓均質循環次數4次，按“2.1”項下方法操作，考察不同乳化溫度（50、60、70、80 ℃）對神經酸口服乳劑外觀、離心穩定性、粒徑及Ke的影響。結果顯示，當乳化溫度為70 ℃時，所得口服乳劑呈均一乳白色，振搖后不掛壁，亦未出現分層現象，粒徑、Ke相對較小，故選擇乳化溫度為70 ℃。結果見表7。

（2）剪切時間：取神經酸原料藥1 g，按“2.3”項下最優處方，固定乳化溫度70 ℃、高壓均質壓力50 MPa、高壓均質循環次數4次，按“2.1”項下方法操作，考察不同剪切時間（0、2、4、6、8 min）對神經酸口服乳劑外觀、離心穩定性、粒徑及Ke的影響。結果顯示，所得口服乳劑呈均一乳白色，振搖后不掛壁，亦未出現分層現象。當剪切時間超過4 min后，粒徑及Ke基本無明顯變化，且兩者相對較小，故選擇剪切時間為4 min。結果見表8。

+：離心后無分層現象

（3）高壓均質壓力：取神經酸原料藥1 g，按“2.3”項下最優處方，固定乳化溫度70 ℃、剪切時間4 min、高壓均質循環次數4次，按“2.1”項下方法操作，考察不同高壓均質壓力（20、40、60、80 MPa）對神經酸口服乳劑外觀、離心穩定性、粒徑及Ke的影響。結果顯示，所得口服乳劑呈均一乳白色，振搖后不掛壁，亦未出現分層現象。當高壓均質壓力為60 MPa時，粒徑略有增加但不明顯，且符合口服乳劑的粒徑范圍，Ke無明顯變化且為最小，故選擇高壓均質壓力為60 MPa。結果見表9。

+：離心后無分層現象

（4）高壓均質循環次數：取神經酸原料藥1 g，按“2.3”項下最優處方，固定乳化溫度70 ℃、剪切時間4 min、高壓均質壓力60 MPa，按“2.1”項下方法操作，考察不同高壓均質循環次數（2、4、6、8次）對神經酸口服乳劑外觀、離心穩定性、粒徑及Ke的影響。結果顯示，所得口服乳劑呈均一乳白色，振搖后不掛壁，亦未出現分層現象。隨著高壓均質循環次數的增加，Ke無明顯變化;粒徑雖逐漸增加，但可能與“過做功”導致乳滴合并有關[13]。綜合考慮，選擇高壓均質循環次數為4次。結果見表10。

2.4.2 正交實驗

在單因素實驗的基礎上，以乳化溫度（A/℃）、剪切時間（B/min）、高壓均質壓力（C/MPa）、高壓均質循環次數（D/次）為因素，神經酸口服乳劑粒徑及Ke為指標，采用L9（34）正交實驗設計對神經酸口服乳劑的制備工藝進行優化。神經酸口服乳劑制備工藝的因素與水平見表11，設計方案與結果見表12，方差分析結果見表13。

由表12、表13可知，乳化溫度、剪切時間、高壓均質壓力、高壓均質循環次數對粒徑及Ke的影響均無統計學意義（P>0.05）。其中，高壓均質壓力是影響神經酸口服乳劑粒徑最主要的因素，其次是高壓均質循環次數，剪切時間對粒徑影響最小，即C>D>A>B，得到粒徑方面的最優工藝為A2B2C1D1。乳化溫度是影響神經酸口服乳劑穩定性最主要的因素，其次是高壓均質循環次數和剪切時間，即A>D=B>C，得到穩定性方面的最優工藝為A1B1C3D1。綜合分析，因素A、因素B雖不是粒徑的主要影響因素，但卻是Ke的主要影響因素，故因素A、因素B取A1、B1水平;因素C是粒徑的主要影響因素，故因素C取C1水平;因素D均以D1水平為優，故取D1水平。最終得到最優制備工藝為A1B1C1D1，即乳化溫度為60 ℃，剪切時間為2 min，高壓均質壓力為40 MPa，高壓均質循環次數為2次。

2.5 最優處方及制備工藝的驗證

取神經酸原料藥1 g，以神經酸口服乳劑外觀、離心穩定性、粒徑及Ke為指標，按“2.3”“2.4”項下最優處方及最優制備工藝制備神經酸口服乳劑。每樣品平行操作3次，取平均值。結果顯示，3批神經酸口服乳劑的平均粒徑為158.05 nm（RSD=1.58%，n=3），平均Ke為0.39（RSD=1.49%，n=3），表明所得處方及制備工藝穩定、可行。結果見表14。

+：離心后無分層現象

2.6 神經酸的含量測定

2.6.1 色譜條件

以Amethyst C18-H（250 nm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，以乙腈-0.05%磷酸溶液（98 ∶ 2，V/V）為流動相;流速為1 mL/min;檢測波長為203 nm;柱溫為25 ℃;進樣量為5 μL[14]。

2.6.2 對照品溶液的制備

精密稱取神經酸對照品適量，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，混勻，制得質量濃度為0.328 0 mg/mL的對照品溶液。

2.6.3 供試品溶液的制備

精密量取按最優處方及制備工藝制得的神經酸口服乳劑0.2 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理15 min，放冷，加甲醇定容，搖勻，經0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.6.4 空白對照溶液的制備

按“2.3”“2.4”項下最優處方及制備工藝制得缺神經酸原料藥的空白口服乳劑，再按“2.6.3”項下方法制備空白對照溶液。

2.6.5 專屬性試驗

分別取上述對照品溶液、供試品溶液、空白對照溶液，按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。由圖1可知，空白對照溶液色譜圖在對照品相應位置上沒有吸收峰，表明處方中的輔料對神經酸的測定無干擾;對照品溶液中神經酸的理論板數為24 251，供試品溶液中神經酸的理論板數為23 779。

2.6.6 線性關系考察

精密吸取“2.6.2”項下對照品溶液，用甲醇稀釋并定容，制得質量濃度為0.164 0、0.082 0、0.041 0、0.020 5、0.010 25 mg/mL的系列工作溶液，再另取“2.6.2”項下對照品溶液，按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以對照品質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得神經酸的回歸方程為Y=30.071 0X+0.019 2（r=0.999 9），表明神經酸檢測質量濃度的線性范圍為0.010 25～0.328 0 mg/mL。

2.6.7 精密度試驗

取“2.6.6”項下質量濃度為0.010 25 mg/mL的對照品溶液，按“2.6.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果顯示，神經酸峰面積的RSD為1.05%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6.8 穩定性試驗

取“2.6.3”項下供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12、24 h時按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果顯示，神經酸峰面積的RSD為1.01%（n=7），表明供試品溶液于室溫下放置24 h內穩定性良好。

2.6.9 重復性試驗

取按最優處方及制備工藝制得的神經酸口服乳劑，共6份，按“2.6.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并按標準曲線法計算樣品含量。結果顯示，神經酸含量的RSD為1.29%（n=6），表明方法重復性良好。

2.6.10 加樣回收率試驗

精密移取已知含量的按最優處方及制備工藝制得的神經酸口服乳劑，共6份，加入等量的對照品，按“2.6.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定并計算加樣回收率。結果見表15。

2.6.11 樣品含量測定

按“2.3”“2.4”項下最優處方及制備工藝制得神經酸口服乳劑，共3批，按“2.6.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.6.1”項下色譜條件進樣測定并按標準曲線法計算樣品含量。結果顯示，口服乳劑中神經酸的含量分別為8.473 2、8.709 2、8.482 3 mg/mL，平均含量為8.554 9 mg/mL（RSD=1.56%，n=3）。

2.7 樣品穩定性試驗

2.7.1 高溫試驗

按“2.3”“2.4”項下最優處方及制備工藝制得神經酸口服乳劑。取適量，于60 ℃下放置10 d，分別于第5天、第10天時取樣，按2020年版《中國藥典》（四部）“穩定性重點考察項目”考察高溫條件下樣品的穩定性[9]，并按“2.6.11”項下方法測定其中神經酸的含量。結果顯示，于60 ℃下放置5 d后，神經酸口服乳劑外觀由均一乳白色變為上層淡黃色、下層白色，出現分層現象;神經酸的含量明顯升高，由8.688 2 mg/mL增加到16.249 2 mg/mL，表明神經酸口服乳劑不適宜放置于高溫環境中，應于較低溫度中保存（因第5天時神經酸口服乳劑的外觀、含量均發生了變化，故未對第10天的樣品進行檢測）。

2.7.2 加速試驗

按“2.3”“2.4”項下最優處方及制備工藝制得神經酸口服乳劑。取3批樣品，于溫度（40±2） ℃、相對濕度（75±5）%條件下放置6個月，分別于放置0、1、2、3、6個月時取樣，按2020年版《中國藥典》（四部）“加速試驗”規定考察樣品的穩定性[9]，并按“2.6.11”項下方法測定其中神經酸的含量。結果顯示，神經酸口服乳劑外觀均呈均一乳白色，無分層現象，且神經酸的含量變化不大。結果見表16。

2.7.3 長期試驗

按“2.3”“2.4”項下最優處方及制備工藝制得神經酸口服乳劑。取3批樣品，于溫度（25±2） ℃、相對濕度（60±5）%條件下放置6個月，分別于放置0、3、6個月時取樣，按2020年版《中國藥典》（四部）“長期試驗”規定考察樣品的穩定性[9]，并按“2.6.11”項下方法測定其中神經酸的含量。結果顯示，神經酸口服乳劑外觀均呈均一乳白色，無分層現象，且神經酸的含量變化不大。結果見表17。

3 討論

研究指出，在采用機械法制備神經酸口服乳劑時，不需要考慮混合順序，制備的乳劑質量較好[10]。筆者在單因素實驗中發現，油相用量越大，所得口服乳劑的Ke就越大，乳劑就越不穩定，油滴越易析出;隨著乳化劑用量的增加，乳劑穩定性亦有所增加，但當乳化劑用量超過6%時，會導致油相與水相無法均勻混合，從而使乳劑的穩定性變差。升高乳化溫度可以降低油相的黏度，有利于剪切力的傳遞及乳劑的形成，但溫度過高會導致乳劑的穩定性下降，這可能是由于溫度過高導致油水界面膜膨脹，增加乳滴的動能，使大量的乳滴聚集合并，粒徑增大[15]。在一定的剪切速度下，剪切時間的延長可使乳劑趨于穩定，粒徑逐漸縮小;當剪切時間超過4 min時，粒徑出現增加的趨勢，這可能是由于外界過高的能量使更多的乳滴產生，使得乳滴之間的擠壓、碰撞更為劇烈，導致乳滴出現合并現象，從而增加乳劑的平均粒徑[13]。此外，本課題組發現，高壓均質壓力越大，所得乳劑越穩定，Ke越小，但粒徑有增加的趨勢，這可能是由于“過做功”而引起的“粒徑反彈”，即乳劑在高壓均質機中受到高壓而產生強烈的剪切、撞擊和空穴作用，使得乳劑超微細化，但過度做功會使單位體積內油水兩相接觸面積增大、分子熱運動加速，導致油相分子之間的碰撞更加頻繁，油滴之間互相吸附和融合，誘發合并現象，從而增大乳劑的平均粒徑[13]。

本課題組還發現，不同乳化溫度、剪切時間、高壓均質壓力、高壓均質循環次數對所得口服乳劑穩定性及粒徑的影響均存在一定差異，故采用正交實驗設計對制備工藝進行優化。但在優化制備工藝時發現，在所選水平中，各因素對粒徑及Ke的影響均無統計學意義，可能是在單因素實驗中，各水平條件下所得乳劑的粒徑、Ke變化較小。綜合粒徑及Ke得到最優處方及制備工藝為神經酸原料藥1 g、油酸用量5%、OP-10用量4%、丙二醇用量2%、乳化溫度60 ℃、剪切時間2 min、高壓均質壓力40 MPa、高壓均質循環2次。在此處方工藝條件下，所得神經酸口服乳劑的平均粒徑為158.05 nm，平均Ke為0.39，外觀、離心穩定性及粒徑均符合外觀為均一乳白色、離心后不分層、粒徑在乳劑范圍內的要求[11]。

本課題組在參考相關文獻[14]的基礎上，考察了不同色譜柱（Diamonsil C18、AcclaimTM120 C18、Amethyst C18-H，規格均為250 nm×4.6 mm，5 μm）對色譜峰峰形、出峰時間的影響，結果發現，以Amethyst C18-H為色譜柱時，色譜峰峰形更好，出峰時間較短。同時，本課題組又考察了乙腈-0.05%磷酸溶液不同比例（90 ∶ 10、94 ∶ 6、98 ∶ 2、99 ∶ 1，V/V）對色譜峰峰形及出峰時間的影響，結果發現，當乙腈與0.05%磷酸溶液比例為98 ∶ 2（V/V）時，所得色譜峰峰形好且出峰快。

樣品的穩定性試驗結果顯示，神經酸口服乳劑應避免置于高溫環境中保存，因高溫環境可使乳劑出現分層現象，使神經酸的含量明顯升高;該制劑應于較低溫度下保存，室溫環境放置6個月的穩定性較好。

綜上所述，所得最優處方及制備工藝穩定、可行，可用于神經酸口服乳劑的制備;所建含量測定方法操作簡便、可行，可用于神經酸口服乳劑的含量測定;神經酸口服乳劑不適宜放置于高溫環境中，在室溫環境中放置6個月的外觀及含量無明顯變化，穩定性較好。

參考文獻

[ 1 ] 瑪依樂·艾海提，侯晨，孟永宏，等.神經酸的來源與功能研究進展[J].中國油脂，2019，44（10）：105-109.

[ 2 ] 劉速速，周慶禮，孫華，等.神經酸的功能及提純工藝研究進展[J].中國油脂，2019，44（10）：142-146.

[ 3 ] 龔蜜，王亞南，王素娟，等.神經酸的研究進展[J].中國蜂業，2011，62（7）：50-53.

[ 4 ] 李文保，孫昌俊，王飛飛，等.神經酸及其在預防和治療腦病中的應用研究進展[J].藥學進展，2014，38（8）：591-596.

[ 5 ] 王性炎，王姝清.神經酸研究現狀及應用前景[J].中國油脂，2010，35（3）：1-5.

[ 6 ] 王澤宇，胡佳，康敏，等.神經酸制備方法研究進展[J].亞太傳統醫藥，2016，12（1）：46-49.

[ 7 ] 劉英波，李江.苗藥大果木姜子油口服乳劑的研制[J].中國醫院藥學雜志，2013，33（16）：1364-1366.

[ 8 ] 葉偉文.鴉膽子油乳劑的處方優化及其藥代動力學研究[D].廣州：廣東藥學院，2014.

[ 9 ] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S]. 2020年版.北京：中國醫藥科技出版社，2020：23，457-459.

[10] 方亮.藥劑學[M]. 8版.北京：人民衛生出版社，2016：120.

[11] 陳西翌.雷公藤內酯醇干乳的制備及其抗腫瘤作用的研究[D].福州：福建醫科大學，2016.

[12] 潘明明.地昔尼爾乳劑的制備及其安全性初步評價[D].南京：南京農業大學，2015.

[13] 李瑞強.大豆油脂肪乳體的制備及穩定性研究[D].哈爾濱：東北林業大學，2013.

[14] 吳樂艷，侯雯清，孫孔春，等.反相高效液相色譜法測定神經酸片劑中神經酸含量[J].昆明醫科大學學報，2020，41（6）：11-14

[15] 方成玲.鴉膽子油口服干乳顆粒劑的研究[D].廣州：廣東藥學院，2012.

（收稿日期：2021-09-08 修回日期：2022-01-05）

（編輯：陳 宏）