水溶性豆渣酸性多糖對RAW264.7細胞的免疫調節作用及其機制

胡彥波，王思琪，石曾卉，翟麗媛，趙 珺*

（長春大學食品科學與工程學院，吉林 長春 130022）

巨噬細胞是人體固有免疫的第一道防線，可以通過對凋亡細胞、微生物和腫瘤細胞的吞噬和降解維持機體的平衡[1-2]。當人體受到病理或機械損傷刺激時，會激活巨噬細胞產生一氧化氮（NO）和活性氧（reactive oxygen species，ROS），并分泌腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、白細胞介素（interleukin，IL）-1β和IL-6等一系列細胞因子，從而抵御病原體入侵，保護宿主免受侵害[3-5]。因此，激活巨噬細胞是宿主提高免疫能力的重要途徑。

巨噬細胞表面存在許多多糖的受體，這些受體能夠識別多糖類物質并激活巨噬細胞，從而發揮免疫調節作用[6-8]。據報道，天然多糖和低聚糖作為潛在的免疫調節劑，可以通過識別巨噬細胞表面受體并啟動信號發揮免疫調節作用[9]。Liu Kaisheng等研究發現靈芝多糖能夠通過結合RAW264.7巨噬細胞系膜表面Toll樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）激活下游絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPKs）信號通路，促進巨噬細胞釋放TNF-α、IL-1β和IL-6等免疫調節因子[10]。Liu Chaoran等研究發現豬苓多糖能夠誘導RAW264.7巨噬細胞系活化，促進巨噬細胞釋放NO和ROS，增強巨噬細胞的吞噬能力，其作用機制可能與激活巨噬細胞的核因子（nuclear factor，NF）-κB有關[11]。

豆渣是豆制品加工過程中的主要副產物，目前主要作為飼料或廢棄物丟棄，造成了極大的資源浪費和環境污染[12-13]。先前研究表明，水溶性豆渣多糖（soluble soybean polysaccharides，SSPS）是豆渣的有效成分之一，具有抗氧化、抗菌和抗腫瘤等多種生物活性[14-15]。此外，SSPS由于其良好的物理和化學性質已被應用于食品和醫藥等領域。例如利用SSPS可以防止魚糜的蛋白質變性、促進水溶液中乳糖的結晶、提高乳酸菌肽的抗菌活性等[16-18]。目前針對SSPS的提取、分離純化和結構分析已有部分的研究報道[19-21]，但針對其免疫活性以及構效關系的研究鮮少報道。因此，本實驗以小鼠巨噬細胞系RAW264.7為模型，研究SSPS對RAW264.7細胞的活化作用，包括NO和ROS的釋放、相關細胞因子的分泌；并進一步研究其對RAW264.7細胞活化的機制，從而評價SSPS的免疫調節作用，以期為后續豆渣的深入開發應用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

RAW264.7小鼠單核巨噬細胞系 美國典型微生物菌種保藏中心；SSPS 實驗室自制；DMEM高糖完全培養基、胎牛血清 美國HyClone公司；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS） 美國Sigma公司；NO檢測試劑盒 南京建成生物工程研究所；TNF-α酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒、IL-1β ELISA試劑盒和IL-6 ELISA試劑盒 美國Cloud-Clone公司；HRP標記山羊抗兔、HRP標記山羊抗小鼠 武漢三鷹生物技術有限公司；其他試劑均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

EnSpire全功能微孔板檢測儀 美國PerkinElmer公司；3K15臺式高速離心機 上海亞榮生化儀器廠；HF90CO2培養箱、HF-1200LC生物安全柜 力康生物醫療科技控股有限公司；IX71倒置相差顯微鏡 日本Olympus公司；PP1152電泳儀、MP-8001電泳槽 北京凱元信瑞儀器有限公司；TS-8S脫色搖床 海門市其林貝爾儀器制造有限公司；ChemiDoc?XRS+凝膠成像系統 美國Bio-rad公司；CytoFLEX S流式細胞儀美國Beckman公司。

1.3 方法

1.3.1 水溶性豆渣多糖的制備

參照文獻[21]采用水提醇沉法提取SSPS，并根據SSPS的帶電荷情況和分子質量情況，利用DEAE-纖維素柱層析、Sephadex G-100和Sepherose CL-6B凝膠柱層析對SSPS進行分離純化，制備SSPS的不同組分：水溶性豆渣中性多糖（soluble soybean neutral polysaccharide，SSPS-N）、水溶性豆渣酸性多糖A1（soluble soybean acidic polysaccharide A1，SSPS-A1）、水溶性豆渣酸性多糖A2（soluble soybean acidic polysaccharide A2，SSPS-A2）、水溶性豆渣酸性多糖純級分c（component c of soluble soybean acidic polysaccharide A1, SSPS-A1-c）、水溶性豆渣中性多糖純級分b（component b of soluble soybean neutral polysaccharide，SSPS-N-b），具體制備流程如圖1所示（其中SSPS-A1-a、SSPS-A1-b、SSPS-N-a、SSPS-N-c的含量較低，未做研究），計算不同組分的得率（某組分與上一級組分的質量比×100%）。

圖1 SSPS的制備流程圖Fig.1 Flow chart for the preparation of SSPS

1.3.2 RAW264.7細胞培養

小鼠單核巨噬細胞系RAW264.7加入DMEM高糖完全培養基（含質量分數為1%青霉素-鏈霉素雙抗）中，置于37 ℃、5%（體積分數，后同）CO2培養箱中培養，當細胞鋪滿培養瓶底部80%（體積分數）時進行傳代[22]，將培養至對數生長期的細胞用于后續實驗。

1.3.3 RAW264.7細胞NO濃度的測定

將1.2×105個/mL的細胞懸液接種于96 孔板（100 μL/孔），5% CO2、37 ℃培養；細胞貼壁后樣品組每孔分別加入200 μL含100 μg/mL（終質量濃度）SSPS、SSPS-A1、SSPS-A1-c、SSPS-N和SSPS-N-b的DMEM高糖完全培養基，空白對照組加入200 μL DMEM高糖完全培養基，陽性對照組加入200 μL含1 μg/mL LPS的DMEM高糖完全培養基，每組3 個重復孔，孵育24 h，5% CO2、37 ℃過夜培養。取100 μL不同濃度（0、20、40、60、80、100 μmol/L）的NaNO2溶液和細胞培養上清液分別加入96 孔細胞培養板中，依次加入質量分數1%磺胺和質量分數0.1%萘胺各50 μL。室溫反應20 min后，用酶標儀測定550 nm波長處反應液吸光度，根據NaNO2溶液濃度和吸光度制作標準曲線。根據NO檢測試劑盒說明書測定細胞培養液中NO的濃度。

1.3.4 水溶性豆渣酸性多糖SSPS-A1-c對RAW264.7細胞活化作用

1.3.4.1 細胞存活率的測定

將1.2×105個/mL的細胞懸液接種于96 孔板（100 μL/孔），5% CO2、37 ℃培養；細胞貼壁后使用SSPS-A1-c終質量濃度為0（即空白對照組，后同）、12.5、25、50、100、200、400、800 μg/mL，100 μL/孔，處理24 h。然后向每孔中加入20 μL噻唑藍溶液（5 mg/mL）處理細胞4 h，5% CO2、37 ℃培養。然后吸棄培養基，向每孔中加入150 μL二甲基亞砜，振蕩10 min溶解結晶，用酶標儀檢測其在490 nm波長處的吸光度，處理組與空白對照組吸光度的比值乘以100即細胞存活率，空白對照組的RAW264.7細胞存活率為100%。

1.3.4.2 NO和ROS水平的測定

采用質量濃度0、25、50、100 μg/mL的SSPS-A1-c處理RAW264.7細胞24 h（培養方法同1.3.4.1節），測定RAW264.7細胞釋放NO和ROS的水平。NO濃度的測定方法與1.3.3節相同。ROS水平的測定方法：細胞孵育24 h后吸棄上清液，1 000 r/min離心5 min，吸棄上清液收集細胞，然后使用磷酸緩沖液（50 mmol/L、pH 7.4，后同）洗一次，1 000 r/min離心5 min，吸棄上清液，分別加入100 μL含2 μmol/L間二氯熒光素二乙酸酯（dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）的無血清培養液重懸細胞，37 ℃孵育10 min后，使用無血清培養液洗滌細胞3 次，以充分除去未進入細胞內的DCFH-DA。最后加入300 μL磷酸緩沖液，通過流式細胞儀測定不同多糖處理組的RAW264.7細胞熒光強度，以不同處理組的細胞平均熒光強度表征ROS水平。

1.3.4.3 TNF-α、1L-1β、IL-6質量濃度的測定

將1.2×105個/mL的細胞懸液接種于96 孔板（100 μL /孔），5% CO2、37 ℃培養；細胞貼壁后用不同質量濃度SSPS-A1-c（0、25、50、100 μg/mL）處理RAW264.7細胞后培養24 h，收集上清液，參照TNF-α、1L-1β和IL-6的ELISA試劑盒說明書檢測細胞上清液中各細胞因子質量濃度。

1.3.5 水溶性豆渣酸性多糖SSPS-A1-c對RAW264.7細胞活化機制的研究

1.3.5.1 MAPKs信號通路分析

將1.2×105個/mL的細胞懸液接種于96 孔板（100 μL/孔），5% CO2、37 ℃培養；細胞貼壁后使用不同質量濃度的SSPS-A1-c（0、25、50、100 μg/mL）處理30 min，采用Western blot方法[23]檢測MAPKs信號通路相關c-Jun N-末端激酶（c-Jun N-teminal kinase，JNK）、細胞外信號調節激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）和蛋白激酶-38（phosphor，p38）以及磷酸化蛋白的表達。進一步使用JNK抑制劑SP600125（20 μmol/L）、ERK抑制劑U0126（25 μmol/L）和p38抑制劑SB203580（5 μmol/L）預處理細胞2 h后，與100 μg/mL SSPS-A1-c共處理30 min和24 h。30 min后采用Western-blot方法檢測加入抑制劑后相關蛋白（JNK、磷酸化JNK（phospho-JNK，p-JNK）、ERK、磷酸化ERK（phospho-ERK，p-ERK）、p38和磷酸化p38（phospho-p38，p38））的表達情況。24 h后采用1.3.3節方法測定NO濃度，采用1.3.4.3節方法測定TNF-α、IL-1β和IL-6的質量濃度。

1.3.5.2 NF-κB信號通路分析

將1.2×105個/mL的細胞懸液接種于96 孔板（100 μL/孔），5% CO2、37 ℃培養；細胞貼壁后不同質量濃度的SSPS-A1-c（0、25、50、100 μg/mL）處理30 min，采用Western blot方法檢測NF-κB信號通路相關IκB-α的降解程度。進一步使用NF-κB抑制劑BAY-117082（2.5 μmol/L）預處理細胞2 h后，與100 μg/mL SSPSA1-c共處理30 min和24 h。30 min后采用Western blot方法檢測加入抑制劑后相關蛋白的表達。24 h后采用NO檢測試劑盒測定NO濃度，采用1.3.4.3節方法測定TNF-α、IL-1β和IL-6的質量濃度。

1.4 數據處理與分析

所有實驗數據采用SPSS 19.0軟件進行統計學分析，結果均以平均值±標準差表示。采用t檢驗進行顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著，P＜0.001表示差異高度顯著。

2 結果與分析

2.1 水溶性豆渣多糖的分離純化

以豆渣為原料，按照圖1所示的技術路線圖制備SSPS。首先，采用熱水煮提和70%（體積分數）乙醇醇沉的方法獲得了SSPS，多糖得率為1.8%。利用DEAE-纖維素柱層析對SSPS進行分離純化，dH2O洗脫獲得水溶性豆渣中性多糖SSPS-N（得率70.8%）；0.19 mol/L NaCl和0.34 mol/L NaCl洗脫獲得水溶性豆渣酸性多糖SSPS-A1（得率11.6%）和SSPS-A2（得率2.6%）。進一步利用Sephadex G-100分離純化SSPS-N獲得純組分SSPS-N-b，其得率為65.5%；Sepherose CL-6B分離純化SSPS-A1獲得純組分SSPS-A1-c，其得率為20.8%。鑒于在分離純化過程中，其他組分的得率和純度較低，因此選擇SSPS、SSPS-A1、SSPS-A1-c、SSPS-N和SSPS-N-b進行后續實驗研究。

2.2 水溶性豆渣多糖組分對RAW264.7細胞NO濃度的影響

使用制備的5 種主要多糖組分SSPS、SSPS-A1、SSPS-A1-c、SSPS-N和SSPS-N-b處理RAW264.7細胞，然后檢測不同處理組細胞上清液中NO的濃度。研究表明，巨噬細胞被激活后產生NO，并與超氧陰離子自由基反應形成過氧亞硝基陰離子，協助機體對抗外來抗原，實現免疫調節作用[24]。因此，通過考察多糖處理RAW264.7細胞后NO的濃度，篩選出具有免疫活性的多糖組分。如圖2所示，RAW264.7細胞經陽性對照組LPS刺激后NO濃度高度顯著增加（P＜0.001）。與空白對照組相比，SSPS-N和SSPS-N-b處理后細胞NO濃度無顯著變化；而SSPS、SSPS-A1和SSPS-A1-c處理細胞后NO濃度高度顯著增加（P＜0.001）。課題組前期研究結果表明，SSPS-A1和SSPS-A1-c主要由阿拉伯半乳聚糖（arabic galactans，AG）和聚半乳糖醛酸組成[21]，先前研究報道AG結構域具有免疫調節的活性[25]，由此推測，豆渣中分離純化制備的酸性多糖可能是豆渣發揮免疫調節作用的主要組分。鑒于SSPS-A1-c由SSPS-A1純化得到，純度更高，因此，后續實驗以SSPS-A1-c為研究對象，初步研究其免疫調節作用和機制。

圖2 SSPS、SSPS-A1、SSPS-A1-c、SSPS-N和SSPS-N-b對RAW264.7細胞NO濃度的影響Fig.2 Effects of SSPS, SSPS-A1, SSPS-A1-c, soluble soybean neutral polysaccharide (SSPS-N) and component b ofSSPS-N on the production of nitric oxide in RAW264.7 cells

2.3 SSPS-A1-c對RAW264.7細胞的活化作用研究

2.3.1 SSPS-A1-c對RAW264.7細胞存活率的影響

采用0、12.5、25、50、100、200、400、800 μg/mL的SSPS-A1-c處理RAW264.7細胞，研究SSPS-A1-c對RAW264.7細胞的毒性作用。如圖3所示，與空白對照組相比，不同質量濃度的SSPS-A1-c對RAW264.7細胞的存活率影響不同。當質量濃度低于400 μg/mL時，SSPS-A1-c對RAW264.7細胞存活率均無顯著影響（P＞0.05），說明SSPS-A1-c的質量濃度低于400 μg/mL時對細胞沒有毒性。當SSPS-A1-c質量濃度為800 μg/mL時，細胞存活率呈高度顯著的降低趨勢（P＜0.001），說明過高質量濃度的多糖樣品對細胞會產生一定的毒性，從而降低其存活率[26]。因此，綜合細胞存活率實驗結果，選擇質量濃度為25、50、100 μg/mL對細胞進行后續實驗處理，并在此質量濃度下，評價SSPS-A1-c對RAW264.7細胞的免疫調節作用。

圖3 SSPS-A1-c對RAW264.7細胞增殖的影響Fig.3 Effect of SSPS-A1-c on the proliferation of RAW264.7 cells

2.3.2 SSPS-A1-c對RAW264.7細胞釋放NO和ROS的影響

采用25、50、100 μg/mL的SSPS-A1-c處理RAW264.7細胞，檢測SSPS-A1-c對RAW264.7細胞釋放NO和ROS的影響。如圖4所示，RAW264.7細胞經陽性對照組LPS刺激后NO和ROS水平高度顯著增加（P＜0.001）。與空白對照組相比，當使用25 μg/mL的SSPS-A1-c處理后，細胞NO濃度增加，當濃度增加到50 μg/mL和100 μg/mL，NO濃度高度顯著增加（P＜0.001），在100 μg/mL時NO濃度與LPS刺激后NO濃度相當；當使用25 μg/mL的SSPS-A1-c處理后，細胞ROS水平呈現高度顯著升高（P＜0.001），隨著SSPS-A1-c質量濃度的增加，ROS水平明顯增加并呈現劑量依賴性。上述研究結果說明SSPS-A1-c在一定質量濃度下可激活并提高巨噬細胞RAW264.7釋放NO和ROS的能力。

圖4 不同質量濃度SSPS-A1-c對RAW264.7細胞NO（A）和ROS（B）水平的影響Fig.4 Effects of different concentrations of SSPS-A1-c on the production of NO (A) and ROS (B) in RAW264.7 cells

2.3.3 SSPS-A1-c對RAW264.7細胞TNF-α、IL-1β和IL-6質量濃度的影響

采用25、50、100 μg/mL的SSPS-A1-c處理RAW264.7細胞，檢測上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6質量濃度。研究表明，巨噬細胞被激活后通過細胞信號通路調節TNF-α、IL-1β和IL-6等細胞因子的釋放[27]。因此，可以檢測SSPS-A1-c處理RAW264.7細胞后相關因子的質量濃度，從而確定巨噬細胞的活化程度。如圖5所示，與空白對照組相比，陽性對照組的TNF-α、IL-1β和IL-6質量濃度高度顯著增加（P＜0.001）。隨著SSPS-A1-c質量濃度的增加，TNF-α、IL-1β和IL-6的質量濃度也呈現高度顯著增加（P＜0.001）。與空白對照組相比，當SSPS-A1-c的質量濃度為25 μg/mL時，IL-1β的分泌量沒有顯著變化（P＞0.05），而TNF-α和IL-6的質量濃度則呈現出明顯變化；當質量濃度增加為50 μg/mL和100 μg/mL時，TNF-α、IL-1β和IL-6質量濃度均呈現出高度顯著變化（P＜0.001）。說明在高質量濃度SSPS-A1-c對細胞因子的分泌具有明顯的促進作用，且呈現出濃度依賴性。

圖5 SSPS-A1-c對RAW264.7細胞TNF-α（A）、IL-1β（B）和IL-6（C）質量濃度的影響Fig.5 Effect of SSPS-A1-c on the secretion of TNF-α (A), IL-1β (B)and IL-6 (C) in RAW264.7 cells

綜上所述，SSPS-A1-c可以促進RAW264.7細胞釋放NO和ROS，分泌TNF-α、IL-1β和IL-6等相關細胞因子，從而促進RAW264.7巨噬細胞的活化。

2.4 SSPS-A1-c對RAW264.7細胞的活化機制

MAPKs和NF-κB是與巨噬細胞活化緊密相關的兩條經典炎癥信號通路。MAPKs家族主要包括ERK、JNK和p38，MAPKs可參與巨噬細胞的活化，因此在免疫活性調節中發揮極其重要的作用。在靜息狀態下，NF-κB與IκB-α在胞質中結合，當該信號通路被激活后，IκB-α在胞質中降解[28-31]。因此，本實驗通過研究MAPKs和NF-κB相關蛋白的表達情況，初步確定了SSPS-A1-c活化RAW264.7細胞的機制。

2.4.1 MAPKs信號通路

為探究SSPS-A1-c誘導的RAW264.7巨噬細胞活化是否與MAPKs通路有關，本實驗采用25、50、100 μg/mL的SSPS-A1-c處理RAW264.7細胞30 min后，收集細胞進行Western blot檢測。如圖6A所示，不同質量濃度的SSPS-A1-c均可以明顯促進JNK、ERK和p38的磷酸化；同時其磷酸化呈現劑量依賴性，隨著SSPS-A1-c質量濃度的增加，磷酸化程度（p-JNK/JNK、p-ERK/ERK和p-p38/p-38的相對表達量）明顯升高，當質量濃度達到100 μg/mL時，磷酸化的程度最大，JNK、ERK和p38的磷酸化程度分別為空白對照組的9.5、5.2 倍和2.0 倍。說明SSPS-A1-c可以通過促進JNK、ERK和p38的磷酸化活化巨噬細胞。進一步使用JNK抑制劑SP600125、ERK抑制劑U0126和p38抑制劑SB203580預處理RAW264.7細胞，然后與SSPS-A1-c共處理，測定相關蛋白的表達量。從Western blot和蛋白表達量的相對灰度分析結果中可以看出（圖6B），當加入JNK、ERK和p38的抑制劑后，可以明顯降低蛋白的表達；此外，不同抑制劑（SP600125、U0126、SB203580）與SSPS-A1-c共處理24 h后NO的濃度以及TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低（圖6C）。這些結果均表明SSPS-A1-c通過MAPKs通路激活巨噬細胞。

圖6 SSPS-A1-c對MAPKs信號通路的影響Fig.6 Effect of SSPS-A1-c on MAPKs signaling pathway

2.4.2 NF-κB信號通路

本實驗進一步檢測SSPS-A1-c誘導的RAW264.7巨噬細胞活化是否與NF-κB信號通路有關。采用25、50、100 μg/mL SSPS-A1-c處理RAW264.7細胞30 min 后，收集細胞進行Western blot檢測。如圖7A1所示，隨著SSPS-A1-c質量濃度的增加，IκB-α的降解程度逐漸增加，當使用100 μg/mL SSPS-A1-c處理30 min后，僅有26.8%的IκB-α未降解，大部分的IκB-α發生了降解。為進一步研究NF-κB信號通路在SSPS-A1-c誘導的RAW264.7巨噬細胞活化中的作用，采用BAY-117082預處理巨噬細胞，然后與SSPS-A1-c共處理，從Western blot蛋白表達量的相對灰度分析結果中可以看出（圖7A2），IκB-α的降解程度明顯下降；此外，NO的濃度以及TNF-α、IL-1β和IL-6水平顯著降低（圖7B）。這些結果均表明SSPS-A1-c通過NF-κB信號通路促進巨噬細胞的活化。

圖7 SSPS-A1-c對NF-κB信號通路的影響Fig.7 Effect of SSPS-A1-c on NF-κB signaling pathway

研究表明，多糖具有增強免疫的活性。但由于多糖分子質量較大，直接進入細胞內相對困難，一般會與免疫細胞表面的模式識別受體結合，激活細胞內MAPK和NF-κB信號通路，從而活化免疫細胞[32]。本實驗純化的水溶性豆渣酸性多糖均一級分SSPS-A1-c能夠活化巨噬細胞內MAPK和NF-κB信號轉導通路，促進了MAPKs相關蛋白JNK、ERK和p38的磷酸化以及NF-κB信號通路中IκB-α的降解，使巨噬細胞分泌NO、TNF、IL-1β和IL-6等免疫調節因子的能力增強，從而活化巨噬細胞。

目前，隨著大分子多糖的結構研究越來越深入，對多糖的構效關系研究也逐漸深入。大量的研究表明，多糖發揮免疫調節作用與其結構特征密切相關。例如從金針菇、杏鮑菇和雞油菌子實體中分離純化的連接不同側鏈的3-甲基-半乳聚糖，均可以通過MAPK和NF-κB信號通路激活RAW264.7細胞，其中雞油菌中3-甲基-半乳聚糖的分子質量與激活RAW264.7細胞的效果密切相關[23,32-33]，說明3-甲基-半乳聚糖可能在真菌多糖發揮免疫調節作用中發揮了重要作用；此外，從植物酸漿中純化的富含阿拉伯糖和半乳糖的均一多糖結構域，同樣可以通過MAPK和NF-κB信號通路激活RAW264.7細胞[34]。課題組前期研究結果[21]表明，水溶性豆渣酸性多糖均一級分SSPS-A1-c同樣含有由半乳糖和阿拉伯多糖組成的AG型果膠，其結果特征與植物酸漿中的均一多糖結構[35]較為相似，結合本實驗結果推測SSPS-A1-c可以通過MAPKs和NF-κB信號通路發揮免疫調節作用的關鍵結構是AG型果膠結構域。

3 結 論

本實驗主要研究了SSPS的免疫調節作用，明確其發揮功能的主要級分為水溶性豆渣酸性多糖SSPS-A1-c。進一步研究了SSPS-A1-c對RAW264.7細胞的活化作用及其機制，結果表明，SSPS-A1-c可以促進RAW264.7細胞釋放NO和ROS，同時促進TNF-α、IL-1β和IL-6等免疫調節因子的分泌，并呈現劑量依賴性；SSPS-A1-c可以促進MAPKs相關蛋白JNK、ERK和p38磷酸化，同時促進NF-κB信號通路中IκB-α的降解，說明其作用機制與MAPKs和NF-κB信號通路相關。綜上所述，水溶性豆渣酸性多糖對RAW264.7細胞具有較好的免疫調節作用，該研究成果將為豆渣多糖的綜合開發利用提供新的思路，同時為食品功能性因子開發提供參考。