布病血清學(xué)檢測(cè)對(duì)布病的診斷價(jià)值探討

李華根

布魯氏菌病是因布魯氏桿菌感染而引起的一種人獸共患的疾病,這種疾病在全世界范圍內(nèi)存在廣泛的流行性［1］,因此采取有效措施防止并控制布魯氏菌病的感染十分重要。傳統(tǒng)血清學(xué)和血培養(yǎng)檢驗(yàn)是診斷布魯氏菌病的主要方法,我國(guó)在進(jìn)行臨床診斷時(shí)初次篩查一般利用布魯氏菌病平板凝集試驗(yàn),也有患者開展虎紅平板凝集試驗(yàn),對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性者進(jìn)一步利用布魯氏菌病試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行確診［2］。在本次研究中主要利用虎紅平板凝集試驗(yàn)、熒光偏振檢測(cè)、試管凝集試驗(yàn)、半胱氨酸檢測(cè)方法進(jìn)行診斷,利用半胱氨酸檢驗(yàn)方法是為了鑒別布魯氏菌病患者的急慢性情況,以便為病情的進(jìn)一步診治提供依據(jù)。具體情況報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年3 月～2021 年3 月在本中心監(jiān)測(cè)的123 例疑似布魯氏菌病患者作為研究對(duì)象,其中男61 例,女62 例；年齡24～62 歲,平均年齡(42.16±10.31)歲。

1.2 方法 所有患者入院后采集空腹靜脈血4 ml 進(jìn)行布魯氏菌病血清學(xué)試驗(yàn),同時(shí)根據(jù)《布魯氏菌病診斷》WS269-2019 進(jìn)行判定。

1.2.1 虎紅平板凝集試驗(yàn) 開展試驗(yàn)前需要將血清和抗原在室溫條件下放置0.5～1.0 h,然后在玻璃板上標(biāo)記被檢血清號(hào),添加相應(yīng)的被檢血清0.03 ml。在被檢血清旁加虎紅平板凝集抗原0.03 ml。通過牙簽對(duì)血清和抗原進(jìn)行攪拌,以便于充分的混合均勻。在5 min 內(nèi)觀察結(jié)果。每次試驗(yàn)均應(yīng)該設(shè)置陰性血清和陽(yáng)性血清進(jìn)行對(duì)照［3］。

1.2.2 熒光偏振檢測(cè) 通過熒光偏振檢測(cè)儀、相配套的熒光偏振檢測(cè)試管型抗體檢測(cè)試劑盒、布魯氏菌病試管、凝集抗原等進(jìn)行檢驗(yàn)。在開展檢測(cè)時(shí)所有的方法按照說明書進(jìn)行嚴(yán)格執(zhí)行。利用熒光偏振檢測(cè)試驗(yàn)對(duì)患者的血清進(jìn)行布魯氏桿菌和抗體檢查。參照《實(shí)用臨床布魯氏菌病》進(jìn)行判斷,熒光偏振檢測(cè)試驗(yàn)試管型抗體的檢驗(yàn)結(jié)果則以毫偏振單位(mP)進(jìn)行表示,并以檢測(cè)值>93 mP 作為陽(yáng)性［4］。

1.2.3 試管凝集試驗(yàn) 首先對(duì)被檢測(cè)的血清進(jìn)行稀釋,每份被檢血清用5 支凝集試管,標(biāo)記檢驗(yàn)編碼后,第1管加1.15 ml稀釋液,第2～5管各加入0.5 ml稀釋液。取被檢血清0.1 ml 加入第1 管,充分混勻。從第1 管中吸取0.5 ml 加入到第2 管,混合均勻后再?gòu)牡? 管 吸取0.5 ml 加至第3 管,如此倍比稀釋至第5 管,從第5 管棄去0.5 ml,稀釋完畢。第1～5 管的血清稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100、1∶200,然后增加抗原,將0.5 ml 20 倍稀釋的抗原加入已稀釋好的各血清管中,并振搖均勻；第1～5 管的血清稀釋度分別為1∶25、1∶50、1∶100、1∶200、1∶400,各反應(yīng)管反應(yīng)總量為1 ml。最后設(shè)置對(duì)照試驗(yàn)進(jìn)行比較［5］。

1.2.4 半胱氨酸檢測(cè) 選擇1∶5 稀釋的被檢血清 0.5 ml 和等量的0.2 M 半胱氨酸鹽酸鹽溶液進(jìn)行混合,將其放置在37℃的溫箱中保存30 min,然后通過生理鹽水進(jìn)行倍比稀釋。然后再各自加入0.5 ml 的試管凝集抗原,同時(shí)設(shè)抗原和0.2 M 半胱氨酸處理后的血清對(duì)照。在混合均勻后放置在37℃的溫箱中18～24 h,取出溫室下放置2 h,對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷。1∶100 稀釋,“++”及以上判定為陽(yáng)性；1∶50 稀釋呈現(xiàn)“++”及以上,判定為疑似陽(yáng)性［6］。

1.3 觀察指標(biāo) 以細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)。比較不同檢測(cè)方法(虎紅平板凝集試驗(yàn)、熒光偏振檢測(cè)、試管凝集試驗(yàn)、半胱氨酸檢測(cè))對(duì)布魯氏菌病的檢出率；分析不同檢測(cè)方法(虎紅平板凝集試驗(yàn)、熒光偏振檢測(cè)、試管凝集試驗(yàn)、半胱氨酸檢測(cè))對(duì)布魯氏菌病的診斷效能,即陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率。陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陽(yáng)性)×100%；陰性預(yù)測(cè)值=真陰性/(假陰性+真陰性)×100%；敏感度=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽(yáng)性)×100%；準(zhǔn)確度=(真陽(yáng)性+真陰性)/(真陽(yáng)性+假陽(yáng)性+假陰性+真陰性)×100%；約登指數(shù)=(靈敏度+特異度)-1；誤診率=假陽(yáng)性/(假陽(yáng)性+真陰性)×100%；漏診率=假陰性/(真陽(yáng)性+假陰性)× 100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測(cè)方法對(duì)布魯氏菌病的檢出率比較 123 例疑似布魯氏菌病患者細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果最終確診105 例(85.37%)。虎紅平板凝集試驗(yàn)、熒光偏振檢測(cè)、試管凝集試驗(yàn)、半胱氨酸檢測(cè)對(duì)布魯氏菌病的檢出率分別為83.74%、82.93%、83.74%、82.11%,比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同檢測(cè)方法對(duì)布魯氏菌病的檢出率 比較(n,%,n=123)

2.2 不同檢測(cè)方法對(duì)布魯氏菌病的診斷效能分析 虎 紅平板凝集試驗(yàn)對(duì)布魯氏菌病的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率分別為94.17%(97/103)、60.00%(12/20)、92.38% (97/105)、66.67%(12/18)、88.62%(109/123)、0.5905、33.33%(6/18)、7.62%(8/105)。熒光偏振檢測(cè)對(duì)布魯氏菌病的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率分別為97.06%(99/102)、71.43%(15/21)、94.29%(99/105)、83.33%(15/18)、92.68%(114/123)、0.7762、16.67%(3/18)、5.71%(6/105)。試管凝集試驗(yàn)對(duì)布魯氏菌病的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率分別為92.23%(95/103)、50.00%(10/20)、90.48% (95/105)、55.56%(10/18)、85.37%(105/123)、0.4604、44.44%(8/18)、9.52%(10/105)。半胱氨酸檢測(cè)對(duì)布魯氏菌病的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率分別為98.02% (99/101)、72.73%(16/22)、94.29%(99/105)、88.89% (16/18)、93.50%(115/123)、0.8318、11.11%(2/18)、5.71% (6/105)。見表2。

表2 不同檢測(cè)方法對(duì)布魯氏菌病的診斷效能分析(n)

3 討論

布魯氏菌病屬于全球范圍內(nèi)具有較高發(fā)病率的一種人畜共患疾病,當(dāng)前試驗(yàn)室對(duì)該疾病的檢查方法主要包括分離培養(yǎng)方法和血清檢測(cè)方法,但這兩類方法也分別存在自身的優(yōu)勢(shì)和不足［3］。細(xì)菌學(xué)檢測(cè)方法是試驗(yàn)室檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn),其操作要求較高,并存在一定的風(fēng)險(xiǎn),因此在臨床應(yīng)用時(shí)很難進(jìn)行規(guī)范的使用［4］。

目前國(guó)內(nèi)檢測(cè)布魯氏菌病的主要方法包括虎紅平板凝集試驗(yàn)、熒光偏振檢測(cè)、試管凝集試驗(yàn)、半胱氨酸檢測(cè)。本研究結(jié)果顯示,虎紅平板凝集試驗(yàn)、熒光偏振檢測(cè)、試管凝集試驗(yàn)、半胱氨酸檢測(cè)對(duì)布魯氏菌病的檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。經(jīng)過虎紅平板凝集試驗(yàn)、熒光偏振檢測(cè)、試管凝集試驗(yàn)、半胱氨酸檢測(cè)進(jìn)行布魯氏菌病血清學(xué)檢測(cè)對(duì)布魯氏菌病的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率均存在著各自的優(yōu)點(diǎn)。由此說明通過上述檢測(cè)方法對(duì)布魯氏菌病進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)可實(shí)現(xiàn)對(duì)布魯氏菌病的檢出情況,但不同檢測(cè)方法也存在不足之處。如熒光偏振檢測(cè)屬于一種新型的檢測(cè)手段,國(guó)外對(duì)這種檢測(cè)方法的應(yīng)用早有研究［5］,我國(guó)處于起步階段。這是一種同源性分析的技術(shù),可以通過檢測(cè)抗原抗體之間的相互作用進(jìn)行確診。半胱氨酸檢測(cè)屬于一種含硫基化合物,主要含有巰基-SH 成分,通過半胱氨酸處理血清能夠反映出免疫球蛋白G (IgG)的成分和活性,可以應(yīng)用于布魯氏菌病人群的免疫與自然抗感染的鑒別中［6-10］。當(dāng)前認(rèn)為布魯氏菌病發(fā)病早期階段在人體中會(huì)產(chǎn)生對(duì)二級(jí)乙醇及半胱氨酸敏感的抗體免疫球蛋白M(IGM),之后IgG 會(huì)逐漸上 升［11］。在本次研究中,急性患者的半胱氨酸陰性值相對(duì)慢性患者要低［12］,由此也說明半胱氨酸在布魯氏菌病患者的檢測(cè)中具有較高的檢測(cè)價(jià)值,并能實(shí)現(xiàn)對(duì)患者病情的準(zhǔn)確分析。

綜上所述,布魯氏菌病血清學(xué)檢測(cè)在布魯氏菌病的診斷中具有重要的意義,不同血清學(xué)檢測(cè)方法存在各自的診斷特點(diǎn),可聯(lián)合多方法綜合性進(jìn)行布魯氏菌病血清學(xué)檢測(cè),對(duì)提高布魯氏桿菌的確診率具有重要意義。