母牛分枝桿菌疫苗聯(lián)合生長(zhǎng)激素改善AIDS患者免疫重建不良的效果研究*

曾琬舒，賈露露，廖 兵，羅舒文，黃 敏，潘 菁，何茂銳△

(1.重慶市第九人民醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科，重慶 400700；2.重慶醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院，重慶 400010；3.重慶市第九人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 400700；4.重慶市第九人民醫(yī)院感染科，重慶 400700)

獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)主要的治療方式為高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)，HAART通過(guò)提高機(jī)體免疫細(xì)胞CD4+T細(xì)胞數(shù)量,降低患者體內(nèi)的病毒復(fù)制量,從而改善AIDS患者免疫缺陷功能,提高生活質(zhì)量，延長(zhǎng)生命。前期研究顯示，經(jīng)HAART治療后，AIDS患者CD8+及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)比例均顯著降低[1]。但是,不同個(gè)體存在一定差異性。過(guò)去有報(bào)道稱,在規(guī)律接受HAART治療的患者中,約20%病毒抑制(<50 copies/mL)的患者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞數(shù)量增加不明顯,免疫功能不能有效重建,這種現(xiàn)象稱為免疫重建不良[2-3]。免疫重建不良患者會(huì)增加機(jī)會(huì)性感染、心血管疾病、腫瘤等疾病的發(fā)生率和致死率[4-7]。對(duì)于改善AIDS患者的免疫重建不良狀態(tài),臨床上還沒(méi)有成熟有效的治療方法。已提出的干預(yù)措施包括:生長(zhǎng)激素療法[8]、免疫抑制劑療法[9]、細(xì)胞因子療法[10-11]等。生長(zhǎng)激素療法存在一定療效，但費(fèi)用貴；免疫抑制劑療法、細(xì)胞因子療法在安全性、療效上尚待確認(rèn)。母牛分枝桿菌的菌苗富含與結(jié)核分枝桿菌相似的共同抗原，是一種良好的免疫調(diào)節(jié)劑，具有雙向免疫調(diào)節(jié)功能，能促進(jìn)T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖，釋放出各種淋巴因子，顯著改善患者的細(xì)胞免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，且能有效抑制結(jié)核分枝桿菌等感染引起的病理性損傷[12-13]。前期研究已發(fā)現(xiàn)，母牛分枝桿菌疫苗能提高無(wú)癥狀期人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者體內(nèi)CD4+、CD4+/CD8+,從而增強(qiáng)其細(xì)胞免疫功能[14]。本研究采用母牛分枝桿菌疫苗來(lái)提高AIDS患者免疫功能,改善其免疫重建不良。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年7—12月重慶市第九人民醫(yī)院感染科門(mén)診就診的AIDS患者160例作為研究對(duì)象。患者年齡18～70歲，平均年齡為(23.0±2.5)歲。隨機(jī)將患者分為A～D組，每組40例，其中25例試驗(yàn)對(duì)象在隨訪過(guò)程中因出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)、更改治療方案、隨訪脫落、HIV-RNA定量大于103 copies/mL等原因退出研究，試驗(yàn)最終納入135例患者(A組35例、B組33例、C組32例、D組35例)。研究方案獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理審查批文批號(hào)為院2018(002)號(hào)，患者均知情同意。納入標(biāo)準(zhǔn)：不限男女、職業(yè)、婚否，文化程度初中及以上；HAART治療3年后HIV-RNA定量小于103 copies/mL,CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)小于500/μL,CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)大于50/μL。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)正在或入組前1個(gè)月內(nèi)參加其他藥物臨床試驗(yàn)者；(2)合并未控制的嚴(yán)重機(jī)會(huì)性感染；(3)合并顱內(nèi)進(jìn)行性損傷,合并血糖異常、自身免疫性或血液系統(tǒng)疾病、早期肝硬化或惡性腫瘤；(4)處于備孕、孕期或哺乳狀態(tài)；(5)肝、腎功能異常；(6)存在語(yǔ)言溝通不暢或者智力不全；(7)不能良好配合或理解治療內(nèi)容。

1.2方法

1.2.1治療方法 4組患者均給予48周治療。A組采用母牛分枝桿菌疫苗(安徽龍科馬生物制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20010003)22.50 μg肌肉注射治療，2周1次；B組采用重組人生長(zhǎng)激素(長(zhǎng)春金賽藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20050024)15 IU肌肉注射治療，每周1次；C組采用安慰劑治療；D組采用母牛分枝桿菌疫苗(同A組)+重組人生長(zhǎng)激素(同B組)肌肉注射治療。

1.2.2觀察指標(biāo) 分別于治療前、治療后、療程結(jié)束后12周通過(guò)流式細(xì)胞儀及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)患者靜脈血純真T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、總CD4+T細(xì)胞、Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、白細(xì)胞介素-7(IL-7)細(xì)胞因子水平變化,并跟蹤隨訪每個(gè)患者繼發(fā)感染情況，如卡氏肺孢子蟲(chóng)肺炎(PCP)、結(jié)核、真菌感染等。

2 結(jié) 果

2.14組治療前后各免疫細(xì)胞水平比較 A組、B組、D組患者治療后體內(nèi)CD4+T細(xì)胞、Th1細(xì)胞、純真T細(xì)胞水平增加,IL-7細(xì)胞因子、Treg、Th2細(xì)胞水平下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組療程結(jié)束后12周未出現(xiàn)反彈。與C組比較，A組患者治療后體內(nèi)CD4+T細(xì)胞、Th1細(xì)胞、純真T細(xì)胞水平增加，Treg、Th2細(xì)胞、IL-7細(xì)胞水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與B組比較，A組患者治療后僅Th1細(xì)胞水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；A組與D組治療后各項(xiàng)指標(biāo)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1、2。

表1 各組治療前后體內(nèi)CD4+T細(xì)胞、Th1、Th2水平比較

續(xù)表1 各組治療前后體內(nèi)CD4+T細(xì)胞、Th1、Th2水平比較

表2 各組治療前后體內(nèi)Treg、純真T細(xì)胞、IL-7水平比較

2.2各組隨訪情況 對(duì)每例患者跟蹤隨訪至療程結(jié)束后12周，發(fā)現(xiàn)A組、D組無(wú)繼發(fā)感染(PCP、真菌、結(jié)核)，B組繼發(fā)感染1例，C組繼發(fā)感染5例。

3 討 論

免疫重建不良與HAART治療前AIDS患者體內(nèi)CD4+T水平有關(guān),其水平越低越容易導(dǎo)致免疫重建不良發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，母牛分枝桿菌疫苗可能提升AIDS患者CD4+T水平，改善患者免疫重建功能,且停藥后CD4+T水平不會(huì)下降,還有一定程度的提升,但其具體作用機(jī)制目前尚不清楚。

在T細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的維持中，IL-7具有較為關(guān)鍵的作用,而IL-7受體決定了IL-7的反應(yīng)性。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，AIDS患者體內(nèi)IL-7水平越高，其體內(nèi)CD4+T細(xì)胞水平越低,并進(jìn)一步使IL-7受體水平下降、IL-7水平升高，高水平的IL-7和低表達(dá)的IL-7R致使純真CD4+T細(xì)胞數(shù)量下降,從而引起免疫重建不良[15]。根據(jù)上述研究，作者推測(cè)母牛分枝桿菌疫苗可能通過(guò)降低IL-7水平來(lái)提升患者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞水平,從而改善AIDS患者免疫重建不良情況。

有研究發(fā)現(xiàn),AIDS免疫重建不良患者中,HIV特異性免疫抑制功能降低,Treg比例較高。Treg水平越高,其純真CD4+T細(xì)胞水平越低,兩者比值越高[16]。由此推測(cè)，Treg不是抑制純真CD4+T細(xì)胞的免疫活化,而是對(duì)其增殖起到較大的抑制作用。根據(jù)上述研究，作者推測(cè)母牛分枝桿菌疫苗可能降低Treg水平,導(dǎo)致其抑制CD4+T細(xì)胞增殖作用減弱,從而改善AIDS患者免疫重建不良。

胸腺輸出CD4+T細(xì)胞功能越好,經(jīng)HAART治療后患者CD4+T細(xì)胞恢復(fù)效果越佳[8]。已有研究證實(shí)，高比例純真T細(xì)胞會(huì)減少CD4+T細(xì)胞再生不良[17-19]。研究中通常以純真T細(xì)胞數(shù)目、CD31、TREC等代表胸腺輸出功能評(píng)價(jià)指標(biāo)。成人患者經(jīng)HAART治療后，其純真CD4+T細(xì)胞數(shù)目逐漸恢復(fù),胸腺輸出功能快速而持續(xù)地增加,表明成人胸腺對(duì)其免疫重建具有輔助功能[8]。治療前純真T細(xì)胞比例越高,其亞群恢復(fù)越快,CD31表達(dá)水平穩(wěn)步上升,免疫重建效果越佳[20]。根據(jù)上述研究，作者推測(cè)母牛分枝桿菌疫苗可能提升AIDS患者體內(nèi)純真T細(xì)胞水平,增加CD4+T細(xì)胞水平,從而改善AIDS患者免疫重建不良情況。

目前公認(rèn)Th1/Th2細(xì)胞比例的動(dòng)態(tài)平衡維持著機(jī)體的正常狀態(tài)，一旦發(fā)生失衡可能會(huì)使機(jī)體向疾病狀態(tài)發(fā)生偏移。一旦機(jī)體感染HIV，會(huì)造成體內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞減少，產(chǎn)生異常抗體，從而導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫失衡。Th2型細(xì)胞因子在AIDS患者體內(nèi)比例較高，提示AIDS發(fā)展可能與機(jī)體免疫應(yīng)答由Th1型向Th2型的轉(zhuǎn)變有關(guān)。根據(jù)上述研究，作者推測(cè)母牛分枝桿菌疫苗可能通過(guò)降低AIDS患者Th2比例，提升Th1水平，使Th1/Th2向正常的動(dòng)態(tài)平衡趨勢(shì)發(fā)展，從而調(diào)節(jié)機(jī)體AIDS患者體內(nèi)Th1/Th2細(xì)胞平衡，改善其免疫重建不良。但具體下調(diào)Th2細(xì)胞、上調(diào)Th1細(xì)胞作用機(jī)制不清楚。

綜上所述，母牛分枝桿菌疫苗可一定程度改善AIDS患者的重建免疫功能不良，療效與生長(zhǎng)激素相當(dāng)，但價(jià)格更便宜，故而為改善AIDS患者免疫重建功能不良提供了一種新的治療方法，值得進(jìn)一步探索其改善免疫重建的具體機(jī)制及常規(guī)治療方法。