蜂膠提取物的抗氧化活性及其在牙膏中的應用研究

盧 靜 張 環 陳 欣

(重慶登康口腔護理用品股份有限公司,重慶 400025)

牙周炎是一種由牙菌斑引起的慢性感染性疾病，其病程的結果將會導致牙根表面牙周附著喪失和鄰近牙槽骨吸收，最終導致牙齒的喪失[1]。目前大多數研究均認為，牙周炎的大多數組織損害，是由于機體對菌斑刺激的防御過度所致，大量證據提示牙周組織中活性氧引起的氧化應激在牙周炎發生發展中起著重要的作用[2,3]。因此，減少牙周局部組織，體內活性氧(Reactive oxygen species, ROS)的產生，促進氧化-抗氧化防御系統的平衡，可能對于牙周炎具有潛在的預防及治療作用[4]。抗氧化劑可減少牙周組織ROS的產生，對牙周炎具有一定作用。研究發現，配合局部抗氧化的基礎治療效果明顯優于單純牙周基礎治療[5]，提示了抗氧化劑在牙周炎治療中的應用前景。近些年來，大量學者研究了抗氧化劑與牙周炎之間的關系，結果表明其對牙周炎具有一定的影響作用。

蜂膠是蜜蜂從植物的樹芽、樹皮等部位采集的樹脂，再混以蜜蜂的舌腺、蠟腺等腺體分泌物，經蜜蜂加工轉化而成的一種膠狀物質，在國外，蜂膠被譽為“紫色黃金”。經科學研究證明，蜂膠所含有的豐富而獨特的生物活性物質，使其具有抗菌、消炎、止癢、抗氧化、增強免疫、降血糖、降血脂、抗腫瘤等多種功能，對人體有著廣泛的醫療、保健作用，現已成為各國科學研究的熱點，并成為新興的保健品倍受推崇。

目前蜂膠按提取工藝主要分為兩種：蜂膠乙醇提取物和蜂膠超臨界提取物。蜂膠乙醇提取物是取蜂膠粉碎，用乙醇浸泡溶解，過濾，濾液回收乙醇，晾干。該工藝處理的蜂膠特點是工藝處理比較簡單，但存在高溫干燥過程中有效成分損失較大、產品顏色過深、重金屬容易超標、造假摻假問題嚴重等問題。蜂膠超臨界提取物是利用超臨界二氧化碳萃取分離技術，有選擇性地把極性大小、沸點高低和分子量大小的成分依次萃取出來，然后借助調整溫度和壓力的方法使超臨界流體變成普通氣體，被萃取物質則完全或基本析出，從而達到分離提純的目的。用這種方法得到的蜂膠超臨界提取物無毒、無殘留、安全，萃取條件室溫、無氧，避免有效成分高溫分解和氧化，抗菌成分最大程度保留。此外，重金屬含量在萃取過程中也大幅度降低。

作為一種穩定的自由基，DPPH能在有機溶劑中穩定存在，其醇溶液呈紫色，具有單一電子，故能接受一個電子或氫離子，在波長為517nm下具有最大吸收。有自由基清除劑存在時，DPPH的單電子被捕捉而使其顏色變淺，在最大光吸收波長處的吸光值下降，且下降程度呈線性關系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，從而以評價試驗樣品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率來表示，抑制率越大，抗氧化性越強。

本研究采用DPPH自由基評價兩種蜂膠的抗氧化效果差異，同時還研究了兩種蜂膠添加到牙膏中的應用情況，初步研究了蜂膠牙膏開發的可行性和相關影響因素。

1 材料和儀器

儀器：UV(北京譜析T9CS)；分析天平(梅特勒-托利多)；電熱恒溫鼓風干燥箱(上海浦東榮豐科學儀器有限公司)。

試劑：蜂膠超臨界提取物(東莞波頓香料有限公司)；DPPH(CNW)。

2 方法與結果

2.1 蜂膠提取物的抗氧化活性研究

精確稱取DPPH 0.0199g于50ml容量瓶中，用甲醇配成1mmol/L的DPPH溶液，取1mmol/L該溶液5ml用甲醇稀釋到50ml即得0.1mmol/L的DPPH溶液，避光備用。將蜂膠提取物用甲醇配置成濃度分別為0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml、0.1mg/ml的樣品溶液。不同濃度的待測液各取2ml分別與2ml 0.1mmol/L的DPPH溶液混合均勻，避光反應30min(反應平衡)。2ml 0.1mmol/L的DPPH溶液中加入2ml甲醇作為模型，以甲醇(模型空白)為參比在其最大吸收波長516nm處測定其吸光度Ac。將反應完成的樣品在DPPH的最大吸收波長處測定其各自的吸光度Ai，以不同濃度的2ml樣品溶液加2ml甲醇為各自的參比Aj(試樣空白)。本實驗用EC50(該值定義為溶液中DPPH自由基濃度下降為原始濃度的50%時加入的抗氧化劑的量)來衡量蜂膠超臨界提取物、醇提蜂膠的自由基清除活性。

DPPH自由基清除率=[1-(Ai-Aj)/Ac]*100%

經過對數擬合得到方程：

Y=0.2745ln(x) + 1.417

R2=0.9564

根據計算蜂膠超臨界提取物清除50% DPPH自由基的濃度為35.41μg/mL，即

IC50 =0.0354mg/mL

圖1表明，隨著蜂膠超臨界提取物濃度的增加DPPH自由基清除率也增加，之后隨其濃度的增加DPPH 清除率趨于平緩，0.1 mg/ml其清除率可達83.42%。

圖1 蜂膠超臨界提取物DPPH 自由基清除率

經過對數擬合得到方程：

Y=27.038ln(x)+136.17

R2=0.9629

根據計算醇提蜂膠清除50% DPPH自由基的濃度為41.30μg/mL，即

IC50 =0.0413mg/mL

圖2表明，隨著醇提蜂膠濃度的增加DPPH自由基清除率也增加，之后隨其濃度的增加DPPH清除率趨于平緩，0.1mg/ml其清除率可達77.23%。

圖2 蜂膠乙醇提取物DPPH 自由基清除率

從以上實驗結果可以看出，超臨界提取蜂膠的IC50值低于醇提蜂膠，說明超臨界提取蜂膠有更好的抗氧化活性。

2.2 蜂膠牙膏的穩定性研究

為了驗證蜂膠提取物加入到牙膏中對膏體穩定性的影響，我們選擇一個比較有代表性的基礎配方(見表1)進行研究，并添加不同量的蜂膠提取物，分別儲存于室溫和高溫(45℃)進行跟蹤測試，觀察樣品的理化指標、顏色變化、穩定性等，結果詳見表2。配方1、2添加的是超臨界提取蜂膠，配方3、4添加的是醇提蜂膠。

表1 牙膏配方表

表2 牙膏穩定性觀察表

通過對牙膏的穩定性觀察結果顯示，添加了超臨界提取蜂膠的牙膏配方1、2，三個月后均正常，添加了醇提蜂膠的牙膏配方對牙膏本身的影響較大，僅添加0.1%～0.3%就使膏體外觀變成黑色，影響膏體的美觀效果，不利于觀察顏色變化情況。

3 討論

牙周炎的進展與牙周組織氧化應激水平增加存在密切的關系，可降低氧化應激的抗氧化劑在牙周炎治療中具有一定的應用前景。蜂膠是天然珍品，可以長期食用，無毒副作用。蜂膠被譽為天然小“藥庫”，它能預防和治療疾病，同時無毒無副作用，沒有抗藥性，溫和緩慢，安全可靠，它對人體各臟器都有一個全面調節和修復的作用。早在50年代，國外就應用蜂膠軟膏成功地治療了復發性口瘡、口腔糜爛、潰瘍等口腔疾病。蜂膠在食品、保健品領域用得比較廣泛，但在口腔護理用品領域還未得到很好地推廣。本研究初步探討了蜂膠的抗氧化性能以及在牙膏中的應用，對如何選擇蜂膠作為抗氧化劑治療牙周炎有一定的指導意義，但牙膏的抗氧化效果還有待進一步研究。