動物炭疽病的診斷方法與防控措施

郭佳怡

內蒙古自治區通遼市科左中旗動物疫病預防控制中心，內蒙古通遼 029300

1 病原學

1.1 形態特征

炭疽桿菌是一種革蘭氏陽性桿菌，是芽孢桿菌屬，菌體呈大桿狀，長3～10 μm、寬1～3 μm，兩端平直，顯微鏡下觀察以單桿或鏈狀存在，鏈狀形似竹節。炭疽桿菌無鞭毛，無法運動。在人或動物的血液、組織臟器中均可以生存繁殖，且在人或動物體內不產生芽孢，只有與空氣接觸，漂浮在外界有足夠的氧氣，溫濕度適宜才會產生芽孢，芽孢在菌體中為橢圓形。

1.2 培養特性

炭疽桿菌的培養條件為需氧或兼性厭氧，適宜的生長溫度為30～37 ℃。在普通瓊脂培養基上生長呈灰白色、不透明、邊緣粗糙表面如卷發、大而干燥，菌落直徑2～6 mm。在液體培養基中呈白色絮狀生長。在明膠培養基中沿穿刺線向四周放射狀生長，形似松樹。在血瓊脂培養基上，也呈灰白色、半透明、周圍無溶血環，一般情況下不溶血，有時個別菌株產生輕微溶血。在含青霉素培養基上，炭疽桿菌的細胞壁合成發生改變，顯微鏡下可觀察到圓球狀成串整齊排列的菌體。

2 流行病學

2.1 流行特征

我國將炭疽病列為二類動物疫病，主要發生在夏季的7～9月，8月的病例最多，夏季為放牧的主要時期，雨季蚊蟲繁殖迅速，易引發本病，且干旱、洪澇等自然災害頻發的時期，炭疽病的發病率也呈顯著升高趨勢。

2.2 傳播方式

傳染源為草場、土壤、患病動物的分泌物、排泄物、養殖器具、圈舍、掩埋的尸體及其污染的環境等。本病的傳播方式一是消化道感染，采食被污染的食草或植物，或飲用了被污染的井水、河水、生活用水等水源；二是通過皮膚感染，解剖帶菌的家畜如牛、羊、豬造成手部產生創口，剪羊毛、家畜斷尾、去勢手術過程中造成皮膚受傷，帶菌蚊蟲叮咬等情況均可造成皮膚感染；三是通過呼吸道感染，由于炭疽芽孢可飄浮在空氣中，吸入帶菌的粉塵或氣溶膠菌可感染本病。

2.3 易感動物

炭疽病的易感動物多，涵蓋范圍廣。以牛、羊等草食動物為主，豬等雜食動物也易感，犬、狼主要是因為吞食感染動物的肉感染本病。不僅水牛、河馬等草食類野生動物均可感染本病，紫貂、銀黑狐、北極狐等野生動物也可感染炭疽。禽類正常情況下不感染本病。人對炭疽病易感，主要為從事養殖、屠宰、皮毛加工人員，有機會接觸患病動物的尸體，或誤食患病動物的肉造成感染。

3 臨床癥狀

感染炭疽病潛伏期為1～7 d，最長潛伏期可達20 d。根據臨床診斷的癥狀，炭疽病分為以下幾個類型：①最急性型：外觀正常，無明顯臨床癥狀，突然倒地死亡，常見于牛、羊。觸診可發現在牛的脖頸、胸、腰上分布炭疽腫塊。有時突然死亡的羊伴隨全身痙攣、搖擺、磨牙、呼吸困難、肌肉間歇性抽搐、天然孔出血，幾分鐘后倒地死亡；②急性型：病程為1～3 d，體溫升高至42 ℃，前期精神亢奮、發出叫聲、頂撞物體，后期呼吸困難，反芻減少，虛弱便血，瀕死時體溫急速下降，可能引發孕畜流產；③亞急性型：病程為3～8 d，常見于馬屬動物，體溫升高，頸、胸、腹、會陰、乳房等體表可發生炭疽癰；④慢性型：主要見于豬，無顯著癥狀，多在屠宰后發現生豬已患本病。可造成咽部發炎，淋巴結腫大，部分臟器出血和壞死。

4 病理變化

患炭疽死亡的動物，尸體迅速腐敗膨脹、尸僵不全，典型剖檢變化為天然孔出血，血液中含有暗紅色泡沫，血液粘稠呈暗紅色，俗稱煤焦油樣。脾臟高度腫大，是正常情況的3～5倍，包膜緊張易破碎，脾髓質呈黑紅色軟如泥狀，脾小梁與脾小體模糊不清。淋巴結高度腫脹呈黑紅色，有出血點。皮下肌肉和漿膜有黃色膠樣浸潤，并伴有數量不等的出血點，胃腸黏膜有出血點，肝、腎、心腫大，肺臟、呼吸道充血變性。

5 實驗室診斷方法

5.1 炭疽沉淀試驗

冷浸法采集動物皮張，本病不能隨意解剖，最好的采集方式是疑似患病動物的耳朵，密封保存送至實驗室。恒溫箱37 ℃烘干皮張8～12 h，再放至高壓滅菌器中滅菌，若有產生芽孢污染周圍環境的危險，可顛倒烘干滅菌步驟。用滅菌剪將皮張剪成小塊，盡量剪小剪碎，加入5～10倍的石炭酸生理鹽水浸泡18～24 h。將浸泡皮張的液體過濾3次以上，過濾掉皮毛殘渣得到澄清透明液體，即為待檢抗原。

熱浸法用于檢測病死動物的組織臟器，對于已經剖殺、食用的動物，可以采集肝、脾、腎等臟器，研磨搗碎后加入5～10倍生理鹽水，裝入三角瓶中加熱煮沸30～40 min，過濾步驟與冷浸法相同。

取出直徑為0.4 mm的瓶口圓底小試管3支，每支均加入炭疽沉淀血清150 mL。第1支加入炭疽沉淀抗原150 mL為陽性對照；第2支加入生理鹽水150 mL為陰性對照；第3支加入待檢抗原。等待10 min后觀察結果，可見第1支陽性對照抗原管中上下液面之間出現白色環狀沉淀，為陽性；第2支陰性對照抗原管中無明顯變化，為陰性；觀測待檢抗原結果。該方法操作時間周期長，操作簡單，檢出結果穩定。

5.2 青霉素串珠試驗

通過炭疽桿菌細胞壁接觸青霉素后由長桿變圓，且此過程中炭疽桿菌不能產生青霉素酶的特性，辨別炭疽桿菌。將可疑病料直接涂布在含有青霉素的瓊脂平板上，直接涂布的方法檢出率較低。或將可疑病料通過血瓊脂平板或碳酸氫鈉瓊脂培養基分離培養，37 ℃恒溫培養箱中培養12～15 h，用接種環選取可疑菌落，接種于含有青霉素0.5 IU/mL的瓊脂液體培養基中，37 ℃恒溫培養箱中培養2 h，將培養好的菌液滴加到載玻片上，自然干燥后加入20%甲醛固定，采用美藍染色，顯微鏡下觀察菌株大而圓呈鏈狀排列，形似串珠，為陽性。

5.3 酶聯免疫吸附試驗

酶聯免疫吸附試驗簡稱ELISA，此種方法較為方便快捷、敏感性好，一般采用試劑盒有效期長，穩定性強。可檢測人或動物的血清、組織等。主要檢測樣品中的D-谷氨酸莢膜抗體，通過固相吸附原理，將帶熒光的羊抗兔抗體與之結合，用酶標儀450 nm的波長讀出吸光度值，判定陰陽性。此種方法的特異性不高，主要取決于試劑盒中抗原的制備是否穩定。

5.4 熒光定量PCR

根據世界衛生組織（OIE）發布的診斷手冊可知從病料或環境中直接取樣檢測PCR，均不可作為最終的檢測結果，血液、組織臟器、皮毛、環境中的影響因子過多，檢測結果很可能為陰性，而且死亡動物的血液組織臟器中的細菌增生，可能造成假陽性。所以需要對樣本進行DNA提取。可對病料中的炭疽芽孢桿菌進行分離培養，當炭疽芽孢桿菌濃度達到2×106CFU/mL時，檢測的靈敏度更高。熒光定量PCR技術與其他檢測方法相比，敏感度更高，特異性更好，檢測結果更加穩定。

6 防控措施

6.1 宣傳教育

由于炭疽病長期存在，覆蓋面廣，通過電視、報紙、網絡、小視頻等多種方式，加強群眾對炭疽病的認識，對于養殖人員、屠宰人員、獸醫等相關工作者重點培訓炭疽病的傳染途徑、臨床特征、剖檢變化等專業知識，禁止私屠濫宰、隨意售賣不明原因死亡的動物及其產品。一旦發現與炭疽病相似癥狀的死亡動物，不得私自移動處理，應立即上報給相關部門，由專業人員對動物尸體進行采樣及無害化處理，不危害周圍環境。

6.2 疫苗免疫

炭疽的疫源地一旦形成，短期內無法根除，對于老疫區，家畜疫苗免疫接種需達到70%以上，保證疫情不反復出現，有效地保障動物健康。規模化養殖場可以自行購買炭疽疫苗進行預防，我國主要采用II號炭疽芽孢疫苗和無莢膜炭疽芽孢疫苗對動物進行免疫。按照疫苗說明書指導，做好疫苗的保存工作，每年秋季對動物進行接種注射。

6.3 疫情處置

參與疫情防護的人員，需戴好口罩、帽子，穿好防護服，在保障自身安全的前提下，深入第一現場開展工作。當某地突發本病，應立即上報動物防疫監督機構。經專業人員確診后，劃定疫點、疫區，隔離病畜、對發病地區進行封鎖，直至最后一頭病畜痊愈或死亡后，14 d內不再發現新病畜，方可解除封鎖。

采集所需樣品后，一般采用深埋焚燒的方法對病畜進行無害化處理。嚴禁封鎖地區動物、動物產品、草料的運輸和售賣，對疫區可能患病的動物及時進行炭疽檢測。對未患病的動物緊急接種疫苗。

6.4 消毒

對于發病動物的圈舍、飼養器具、車輛用20%～30%漂白粉嚴格進行消毒，可采取5%福爾馬林對動物尸體進行消毒。病畜停留污染地墊土鏟除15～20 cm，覆蓋20%漂白粉后再加入新土，對販運牲畜的道路采取20%漂白粉噴灑消毒。對圈舍中其它動物的皮毛采用2%鹽酸和10%食鹽溶液浸泡消毒2～3 d或采用福爾馬林熏蒸消毒。