“綠寶石”藍(lán)莓組培外植體誘導(dǎo)技術(shù)的研究

溫福欣

(遼寧省森林經(jīng)營研究所,遼寧丹東118000)

藍(lán)莓(Blueberry),學(xué)名越橘,杜鵑花科(Ericaceae)越橘屬(Vacciniumspp.)植物,多年生落葉或常綠灌木或小灌木樹種。藍(lán)莓是一種藍(lán)色小漿果,果實近圓形或橢圓形,香氣宜人,果肉細(xì)膩,酸甜適中,口感極佳。藍(lán)莓果實雖小,但其營養(yǎng)價值很高[1-3]。藍(lán)莓含有花青素,不僅具有抗氧化能力,可以延緩衰老,而且還具有增強(qiáng)記憶力、減少隱藏的致癌物質(zhì)、抗癌、抑菌消炎和保護(hù)血管預(yù)防心血管疾病等作用[4-6]。

目前藍(lán)莓市場趨于穩(wěn)定,但藍(lán)莓品種繁多,果實品質(zhì)參差不齊,所以亟需發(fā)展果實、果樹各項指標(biāo)優(yōu)良的藍(lán)莓品種。綠寶石藍(lán)莓樹體生長健壯,果實極大,藍(lán)色,果蒂痕小且干,質(zhì)地硬果實口味甜略有酸味。成熟期極早,且較集中,在丹東地區(qū)暖棚內(nèi)4月份即可成熟,正是藍(lán)莓鮮果市場的淡季。產(chǎn)量高,抗寒力強(qiáng),抗病抗蟲能力強(qiáng),樹體好管理,是很有發(fā)展前途的優(yōu)良品種。

以綠寶石藍(lán)莓莖段為外植體,研究外植體消毒方法、基本培養(yǎng)基、pH、生長激素不同濃度等因素對綠寶石藍(lán)莓莖段誘導(dǎo)的影響,篩選最適培養(yǎng)條件,為綠寶石藍(lán)莓的快速繁殖和再生提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2020年8月份在丹東市寬甸縣古樓鄉(xiāng)藍(lán)莓園內(nèi)采集的綠寶石藍(lán)莓當(dāng)年生新發(fā)枝條,剪取枝條上部15～20 cm部分,裝入外植體采集箱送回實驗室,在實驗室內(nèi)將枝條葉子全部去除備用。

1.2 試驗方法

將材料放在自來水下沖洗30 min,剪去基部過老和上部幼嫩部分,剪成2 cm左右莖段。

1.2.1 消毒。采用75%酒精和0.1%HgCl2進(jìn)行消毒處理,先75%酒精處理,再用0.1%HgCl2處理,再重復(fù)用75%酒精處理,再用0.1%HgCl2處理,最后用無菌水沖洗5～7次,統(tǒng)計污染率,篩選出最佳消毒處理,具體消毒處理見表1。

表1 不同消毒處理外植體的表現(xiàn)

1.2.2 培養(yǎng)基類型篩選。配制MS、1/4MS、WPM、WPM(改良)4種類型的培養(yǎng)基,篩選出適合綠寶石藍(lán)莓誘導(dǎo)的培養(yǎng)基。

1.2.3 最適pH值篩選。設(shè)置5.8、5.6、5.4、5.2共4種pH值,篩選出最適綠寶石藍(lán)莓生長的pH值。

1.2.4 誘導(dǎo)最佳激素濃度篩選。誘導(dǎo)激素用ZT(玉米素),設(shè)置激素濃度對比試驗,具體濃度見表2。

1.3 培養(yǎng)條件

白天溫度(25±1) ℃,夜間溫度(20±1) ℃,光周期14 h光/10 h暗,光強(qiáng)3000 lx。蔗糖30 g/L,瓊脂8.75 g/L。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒方法對材料的影響

每個處理接種20瓶,3個重復(fù),共60瓶,每瓶接種2個莖段。

在接種1周后,滅菌不徹底的外植體陸續(xù)出現(xiàn)污染現(xiàn)象,部分組培瓶內(nèi)出現(xiàn)粉色污染物。從表1可以看出,處理1污染率最小為0,處理2和處理3次之,污染率分別為8.3%和10%,處理4污染率最高,消毒不徹底,而處理1和處理2出現(xiàn)了褐化現(xiàn)象,另外兩個處理無褐化現(xiàn)象,結(jié)合以上兩項指標(biāo)發(fā)現(xiàn)處理3即75%酒精20 s+0.1% HgCl23 min+75%酒精20 s+0.1% HgCl22 min污染率10%,無褐化現(xiàn)象,為最佳消毒方法。

2.2 不同培養(yǎng)基類型對外植體的影響

試驗設(shè)MS、 1/4MS、WPM、WPM(改良)4種類型的培養(yǎng)基,其中WPM(改良)根據(jù)藍(lán)莓對鐵元素要求較多,將鐵鹽調(diào)整為20 ml/L,大量元素也調(diào)整為20 ml/L,每個處理10瓶,3個重復(fù),每瓶接種2個,外植體數(shù)60個。接種后30天,統(tǒng)計并記錄,見表2 。

表2 不同培養(yǎng)基類型對外植體的影響

從表2可以看出,4種類型培養(yǎng)基均能誘導(dǎo)綠寶石藍(lán)莓莖段萌發(fā),其中WPM(改良)培養(yǎng)基萌發(fā)率高達(dá)75%,且萌發(fā)芽長勢快,芽苗高、壯,多叢生,所以WPM(改良)培養(yǎng)基為最適合綠寶石藍(lán)莓莖段誘導(dǎo)的培養(yǎng)基。

2.3 不同pH值對外植體的影響

試驗設(shè)5.8、5.6、5.4、5.2幾種pH值,每個處理10瓶,3個重復(fù),每瓶接種2個,外植體數(shù)60個。接種后30天,統(tǒng)計并記錄,見表3 。

表3 不同pH值對外植體的影響

從表3可以看出,藍(lán)莓適合酸性的培養(yǎng)環(huán)境,pH值為5.2時,萌發(fā)率最高,芽苗長勢也最好,但是pH值過低時,培養(yǎng)基不宜凝固,需要適當(dāng)增加瓊脂量,保證培養(yǎng)基凝固,外植體栽入不倒。綜上,最適合綠寶石藍(lán)莓生長的pH值為5.2。

2.4 不同激素濃度對外植體的影響

誘導(dǎo)激素濃度的篩選分為兩個階段,第一階段ZT濃度設(shè)置為1、2、4、8 mg/L,初選出較好濃度配比；第二階段誘導(dǎo)試驗圍繞第一階段得出的較好濃度,再細(xì)化濃度配比,篩選出最適濃度。每個試驗處理10瓶,3個重復(fù),每瓶接種2個。兩個階段均是培養(yǎng)30 d后觀察結(jié)果見表4。

表4 不同激素濃度外植體誘導(dǎo)的影響

從表4可以看出不同濃度的ZT均能誘導(dǎo)藍(lán)莓莖段萌發(fā)出芽苗,且萌發(fā)率高達(dá)81.7%；第一階段初選出ZT濃度2 mg/L時芽萌發(fā)較快,萌發(fā)率達(dá)到75%,萌芽長勢較好,且芽苗較高、壯,部分芽長2～3 cm；第二階段濃度篩選出ZT為2.5 mg/L時,萌發(fā)率達(dá)到81.7%,且芽苗長勢好,芽較高、壯,部分芽長>3 cm,綜上所述,篩選出最適綠寶石藍(lán)莓外植體誘導(dǎo)的ZT濃度是2.5 mg/L。

3 結(jié)論

通過對綠寶石藍(lán)莓外植體誘導(dǎo)試驗篩選出最適合綠寶石藍(lán)莓外植體消毒的方法是75%酒精20 s+0.1% HgCl23 min+75%酒精20 s+0.1% HgCl22 min,污染率控制在10%；最適合綠寶石藍(lán)莓莖段誘導(dǎo)的培養(yǎng)基類型WPM(改良),萌發(fā)率達(dá)到75%；最適合綠寶石藍(lán)莓生長的pH值為5.2,萌發(fā)率達(dá)到81.7%；最適綠寶石藍(lán)莓外植體誘導(dǎo)的ZT濃度是2.5 mg/L,萌發(fā)率達(dá)到81.7%,芽較高、壯,長勢最好。