α-突觸核蛋白與帕金森病伴發(fā)快速眼動(dòng)期睡眠行為障礙相關(guān)性研究

趙曉娟,權(quán)青云,孟宏濤,張 愉

(武警陜西省總隊(duì)醫(yī)院，陜西 西安 710054)

帕金森病屬于神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，好發(fā)于老年人群，該病患者的主要運(yùn)動(dòng)癥狀為靜止性震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)遲緩以及步態(tài)姿勢(shì)異常等[1-3]。在帕金森病患者的非運(yùn)動(dòng)癥狀中以睡眠障礙較為常見，據(jù)統(tǒng)計(jì)約有1/3的帕金森病伴發(fā)快速眼動(dòng)期睡眠行為障礙(Rapid eye movement sleep behavior disorder，RBD)。RBD是一種異態(tài)睡眠，是指患者在夜間深眠狀態(tài)下伴隨的與夢(mèng)境相關(guān)的快速眼動(dòng)睡眠期肌肉遲緩現(xiàn)象消失的復(fù)雜性運(yùn)動(dòng)，嚴(yán)重可能傷害到患者自身甚至床伴，對(duì)患者及其家屬的生活質(zhì)量產(chǎn)生了嚴(yán)重的威脅[4-6]。研究證實(shí)患者腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的缺失以及黑質(zhì)殘存神經(jīng)元內(nèi)路易小體的出現(xiàn)是帕金森病的主要病理改變。路易小體作為帕金森病的主要診斷特征，其主要成分α-突觸核蛋白經(jīng)證實(shí)與帕金森病的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)，大量研究[7-8]指出，α-突觸核蛋白的異常聚集在帕金森病的病理級(jí)聯(lián)反應(yīng)中扮演重要角色。目前國內(nèi)關(guān)于α-突觸核蛋白的研究主要集中在其與帕金森病的相關(guān)性研究，少見與帕金森病患者伴發(fā)RBD相關(guān)性研究，為此，本研究以70例帕金森病患者為研究對(duì)象，探討其血漿及唾液中α-突觸核蛋白表達(dá)水平與患者伴或不伴RBD之間的相關(guān)性，旨在為RBD的早期識(shí)別與防治積累數(shù)據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年6月至2020年11月期間我院收治的70例帕金森病患者為研究對(duì)象。根據(jù)REM睡眠行為異常問卷評(píng)分結(jié)果將70例帕金森病患者分為帕金森病伴發(fā)RBD組(PD+RBD組，n=26)、帕金森病不伴RBD組(PD-RBD組，n=44)。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合診斷標(biāo)準(zhǔn)的帕金森病患者；②年齡>60歲，性別不拘；③Hoehn-Yahr(H-Y)分期為1～4期；④同意采集 EDTA 抗凝血樣；⑤臨床資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)性帕金森病患者；②臨床癡呆量表評(píng)分≥1分者；③影像學(xué)檢測(cè)提示腦內(nèi)器質(zhì)性病變者；④合并惡性腫瘤患者；⑤嚴(yán)重焦慮、抑郁及精神分裂癥患者；⑥臨床資料不全者。

1.2 研究方法

1.2.1 血漿及唾液中α-突觸核蛋白含量測(cè)定：血漿及唾液樣本采集前，受試者禁食、禁水12 h、禁煙4 h、禁酒12 h，經(jīng)污染的樣本需重新采集。每位患者各取唾液、血漿樣本各3 ml，唾液樣本在采集人員的指導(dǎo)下直接流入無菌試管，血漿樣本搜集至無菌試管內(nèi)后，采用低溫高速離心機(jī)以17 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心30 min，取上清液，置于新的干凈試管內(nèi)，血清及唾液樣本均保存于-80 ℃冰箱中待測(cè)。α-突觸核蛋白表達(dá)水平采用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定：將微孔板以經(jīng)純化的人α-突觸核蛋白抗體進(jìn)行包被，制作成為固相抗體；將α-突觸核蛋白依次加入經(jīng)單抗包被的微孔內(nèi)，隨后與α-突觸核蛋白抗體(經(jīng)辣根過氧化物酶標(biāo)記)相結(jié)合后形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物；徹底洗滌后加入底物3，3’、5，5’-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)進(jìn)行顯色；在辣根過氧化物酶的催化下TMB可被轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，在酸的作用下轉(zhuǎn)化可最終轉(zhuǎn)化為黃色，采用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處樣品的測(cè)吸光度(OD)值，血漿及唾液中α-突觸核蛋白濃度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算。檢測(cè)試劑購自中國博研公司，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.2.2 睡眠質(zhì)量評(píng)估：采用Epworth嗜睡評(píng)分量表(ESS)評(píng)估兩組受試者白天過度的狀態(tài)，此量表總分為24分，具體判定標(biāo)準(zhǔn)如下：>6分，代表患者瞌睡；>11分，代表過度瞌睡；>16分，代表存在危險(xiǎn)性的瞌睡。

1.2.3 焦慮抑郁狀態(tài)評(píng)估：分別采用漢密爾頓抑郁量表(HAMD)、漢密爾頓焦慮量表(HAMA)評(píng)估兩組受試者抑郁、焦慮狀況。HAMD評(píng)分包含焦慮/軀體化、體重、絕望感、日夜變化、認(rèn)識(shí)障礙、睡眠障礙、阻滯共計(jì)7種因子，評(píng)分越高，表示患者抑郁狀況越嚴(yán)重。HAMA評(píng)分包含軀體性焦慮因子以及精神性焦慮因子兩大類，分?jǐn)?shù)越高，表示患者焦慮狀況越嚴(yán)重，具體判定標(biāo)準(zhǔn)如下：≥29分，提示存在嚴(yán)重焦慮；≥21分，提示存在明顯焦慮；≥14分，提示存在焦慮；≥7分，提示可能存在焦慮；<7分，無焦慮癥狀。

1.2.4 運(yùn)動(dòng)功能評(píng)估：采用統(tǒng)一帕金森病量表Ⅲ(UPDRS Ⅲ)、Hoehn-Yahr(H-Y)分期評(píng)價(jià)兩組受試者的運(yùn)動(dòng)能力。UPDRS Ⅲ量表包括以下14個(gè)部分：言語表達(dá)、面部表情、手的動(dòng)作震顫/姿勢(shì)震顫、靜止性震顫、手指捏合、肌僵直、手部運(yùn)動(dòng)能力、手部快速交替運(yùn)動(dòng)、腿部靈活性、姿勢(shì)、起立、步態(tài)、姿勢(shì)的穩(wěn)定性、軀體少動(dòng)。H-Y分期標(biāo)準(zhǔn)：1期，單邊/側(cè)身體受到影響，平衡未受影響；2期，雙邊/側(cè)受到影響，平衡未受影響；3期，平衡受到影響，患者仍能夠獨(dú)立生活；4期，患者活動(dòng)能力嚴(yán)重喪失，仍能夠站立或獨(dú)立行走；5期，無他人幫助的前提下，僅能坐輪椅或臥床。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者一般資料比較 兩組患者性別、年齡、起病年齡等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，PD+RBD組病程明顯長(zhǎng)于PD-RBD組，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者一般資料比較

2.2 兩組患者血漿及唾液中α-突觸核蛋白含量比較 PD+RBD組血漿α-突觸核蛋白含量明顯高于PD-RBD組、唾液中α-突觸核蛋白含量明顯高于PD-RBD組，兩組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

表2 兩組患者血漿及唾液中α-突觸核蛋白含量比較(ng/L)

2.3 兩組患者睡眠狀況比較 PD+RBD組ESS評(píng)分明顯高于PD-RBD組,兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患者睡眠狀況比較(分)

2.4 兩組患者焦慮、抑郁狀態(tài)比較 PD+RBD組HAMD評(píng)分及HAMA評(píng)分明顯高于PD-RBD組，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表4。

表4 兩組患者焦慮、抑郁狀態(tài)比較(分)

2.5 兩組患者運(yùn)動(dòng)功能比較 兩組UPDRS Ⅲ評(píng)分比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，PD+RBD組H-Y分期明顯高于PD-RBD組，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表5。

表5 兩組受試者運(yùn)動(dòng)功能比較

2.6 帕金森病患者伴發(fā)RBD相關(guān)因素Logistic回歸分析 Logistic多因素回歸分析結(jié)果顯示，病程、α-突觸核蛋白含量與帕金森患者伴發(fā)RBD顯著相關(guān)(P<0.05)，見表6。

表6 帕金森病患者伴發(fā)RBD相關(guān)因素Logistic回歸分析

3 討 論

RBD是一種神經(jīng)變性疾病，為帕金森病等多種突觸核蛋白病的前驅(qū)癥狀及危險(xiǎn)因素[9]。研究表明，RBD患者5年內(nèi)帕金森病的患病風(fēng)險(xiǎn)約為20%～45%，10年內(nèi)患病風(fēng)險(xiǎn)高達(dá)40%～65%。國外研究團(tuán)隊(duì)對(duì)貓RBD模型進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，其雙側(cè)腦橋鄰近藍(lán)斑的區(qū)域受損后可使得REM睡眠期的肌肉失張力消除，導(dǎo)致貓的行走等多項(xiàng)行為出現(xiàn)異常，且在隨后對(duì)其他動(dòng)物的研究中也再次證實(shí)了這一現(xiàn)象[10]。提示RBD的發(fā)生可能與神經(jīng)元通路的變性具有一定相關(guān)性。研究人員為貓的中腦腹側(cè)區(qū)域注射N-甲基-D-天冬氨酸后發(fā)現(xiàn)，貓出現(xiàn)了失眠以及頻繁覺醒等情況，1周后發(fā)生帕金森病樣震顫、肌強(qiáng)直以及運(yùn)動(dòng)功能受損，雖然上述研究指出了帕金森病與RBD之間具有一定關(guān)聯(lián)性，但尚未發(fā)現(xiàn)一種指標(biāo)以評(píng)估帕金森病患者可能伴RBD的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

α-突觸核蛋白是一種可溶性蛋白，存在于人腦組織內(nèi)，當(dāng)機(jī)體處于正常狀態(tài)下時(shí)，α-突觸核蛋白不表現(xiàn)出細(xì)胞毒性，當(dāng)基因或環(huán)境產(chǎn)生變化后可能導(dǎo)致α-突觸核蛋白出現(xiàn)錯(cuò)誤折疊，形成寡聚體，增加纖維性蛋白含量，最終導(dǎo)致路易小體形成，路易小體的出現(xiàn)是帕金森病的一項(xiàng)主要特征[11-13]。α-突觸核蛋白是路易小體的主要成分，該蛋白大量沉積可能導(dǎo)致細(xì)胞程序性死亡最終引發(fā)帕金森病癥狀。大量研究[14-16]證實(shí)，帕金森病患者血漿α-突觸核蛋白表達(dá)水平明顯高于健康人群，且帕金森患者經(jīng)治療后其血漿α-突觸核蛋白表達(dá)水平仍呈現(xiàn)較高水平，提示α-突觸核蛋白水平的升高與帕金森病的發(fā)病相關(guān)，且不受抗帕金森病藥物的影響。近年來，隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，研究人員在帕金森病患者血漿、腦積液以及唾液中均檢測(cè)到了α-突觸核蛋白的高表達(dá)，提示其參與了帕金森病的發(fā)生及發(fā)展。近年來，研究[17]指出腸道自主神經(jīng)系統(tǒng)α-突觸核蛋白免疫反應(yīng)在RBD中發(fā)揮重要作用。本研究對(duì)伴或不伴RBD的帕金森病患者血漿及唾液中α-突觸核蛋白含量進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)無論是在血漿還是在唾液中，PD+RBD組受試者α-突觸核蛋白含量均顯著高于PD-RBD組，且多因素回歸分析結(jié)果顯示，α-突觸核蛋白含量與帕金森患者伴發(fā)RBD顯著相關(guān)。

除α-突觸核蛋白表達(dá)水平外，本研究還發(fā)現(xiàn)，PD+RBD組受試者病程、H-Y分期、ESS、HAMD及HAMA評(píng)分均明顯高于PD-RBD組，分析原因可能如下[18-21]：病程越長(zhǎng)、H-Y分期越高，表示患者疾病越嚴(yán)重，多巴胺能藥物的使用量則更多，因此運(yùn)動(dòng)并發(fā)癥更為嚴(yán)重；RBD患者睡眠質(zhì)量差是由于其夜間多夢(mèng)、易出現(xiàn)肢體活動(dòng)、喊叫等多種異常行為，引起睡眠中斷；此外，RBD患者存在排汗障礙、夜尿增多等自主神經(jīng)癥狀，同樣可能影響睡眠質(zhì)量，從而導(dǎo)致日間活動(dòng)及覺醒，更易出現(xiàn)日間過度嗜睡；帕金森病患者由于疾病造成的心理壓力及應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致其極易出現(xiàn)抑郁、焦慮等負(fù)性情緒，伴有RBD者由于睡眠質(zhì)量差則可能進(jìn)一步加重抑郁、焦慮癥狀。

綜上所述，血漿及唾液中α-突觸核蛋白表達(dá)量升高是帕金森病患者伴發(fā)RBD的獨(dú)立影響因素。