13種呼吸道病原體核酸檢測在兒童呼吸道感染中的應用效果研究

李偉生，謝敏靜

(珠海市人民醫院高欄港醫院，廣東 珠海 519050)

下呼吸道感染是兒科患者的常見病，高居5歲以下兒童死亡原因的第二位[1]。采用呼吸道感染患兒的病原檢測能識別呼吸道感染病原的流行現狀和分布特征，為臨床診斷和精準治療提供科學依據。與傳統病原學、核酸分離培養檢測相比，基于液相芯片技術的核酸檢測具有效率高、通量大的優勢[2]。本研究對我院收治的312例下呼吸道感染患兒采用液相芯片技術進行13種呼吸道病原體核酸檢測，以期為呼吸道感染的臨床診斷提供科學參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年11月—2020年10月珠海市人民醫院高欄港醫院收治的312例下呼吸道感染患兒為研究對象，男176例，女136例。

納入標準：(1)符合下呼吸道感染診斷標準；(2)臨床檢查體內炎性指標升高，胸片顯示肺部病變；(3)患兒家屬知情同意。

排除標準：(1)非感染原因致胸片顯示肺部病變；(2)肝腎功能不全；(3)合并其他嚴重器質性病變。

1.2 檢測方法

入院當日采集患兒咽拭子，置于2 mL保存液中4℃保存，于24 h內送實驗室檢測。用核酸提取試劑提取患兒的DNA和RNA，提取完成后，將待檢核酸與13項呼吸道病原體核酸檢測試劑盒(RNA/DNA)擴增試劑混合后進行PCR擴增，操作按照擴增試劑盒說明書進行。進行DNA 檢測的病原體為：SP、CMV、博卡病毒(hBoV)、MC、Hi、ADV、MP、BP；進行RNA檢測的病原體為：RSV、鼻病毒(HRV)、副流感病毒(HIV)、INF-A、乙型流感病毒(INF-B)。將已擴增樣本進行雜交檢測，開啟Luminex Magpix液相芯片檢測平臺，在核酸雜交試劑加入擴增產物，通過PCR儀行雜交顯色反應。顯色結束后，將樣品放入孔板加熱模塊，運行待檢測批次并完成檢測。

1.3 觀察指標

將患兒按年齡劃分標準分為<1歲組、1～3歲組、3～5歲組和≥5歲組，比較13種呼吸道病原體的檢出情況、混合感染及不同年齡組間病原體的檢出情況。混合感染率=病原體檢出2種及以上病原體陽性例數/該病原體檢出陽性總數[3]。

1.4 統計學方法

采用SPSS 23.0軟件進行數據分析，計數資料用例數(%)表示，行χ2或秩和檢驗；P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 13種呼吸道病原體檢出情況

在312例患兒中，有215例患兒至少有一種呼吸道病原體檢測陽性，陽性檢出率為68.91%，其中檢出單一病原體陽性患兒134例，占42.94%，檢出兩種及兩種以上病原體陽性患兒81例，占25.96%。檢出率最高的3種病原體為SP、CMV和RSV。13種呼吸道病原體檢出中，混合感染率排名前5位的病原體為MP、BP、Hi、INF-A和MC，見表1。

表1 13種呼吸道病原體檢出情況 例

2.2 不同年齡組的病原體檢出情況

不同年齡組的SP、CMV、RSV、INF-A、ADV陽性檢出率差異顯著(P<0.05)，具有統計學意義。低年齡段患兒常見的病原體為CMV、RSV，SP的檢出率隨患兒年齡的增長而升高。高年齡段患兒常見的病原體為INF-A、ADV。不同年齡組間(<1歲組、1～3歲組、3～5歲組、≥5歲組)其他病原體的陽性檢出率差異不顯著(P>0.05)，見表2。

表2 不同年齡組病的病原體檢出情況 例(%)

3 討論

建立一種能同時檢測多種呼吸道病原體的快速有效的檢測技術對兒童呼吸道感染的臨床診斷具有十分重要的臨床價值。本次檢測結果顯示，215例患兒中至少有一種呼吸道病原體檢測陽性，陽性檢出率為68.91%，說明基于液相芯片技術的核酸檢測具有較高的陽性檢測率。SP、CMV和RSV是檢出率最高的3種病原體，提示細菌和病毒是本地區呼吸道感染患兒的主要病原體，臨床診斷應在參照血常規、X線檢查的基礎上重視病原學實驗室檢測結果，科學合理使用抗生素[4]。檢出兩種及兩種以上病原體陽性患兒81例，占25.96%，提示呼吸道感染患兒存在多重呼吸道病原體混合感染的情況。混合感染率排名前5位的病原體為MP、BP、Hi、INF-A和MC，可能是因為原發病原體感染后損壞了呼吸道黏膜的防護屏障，其他病原體入侵更容易，或者是患兒感染后體質變差，自身抵抗力下降。

不同年齡組間SP、CMV、RSV、INF-A、ADV的陽性檢出率存在顯著差異。低年齡段患兒常見的病原體為CMV、RSV，可能與低年齡患兒自身免疫力相對較低有關[5]。SP的檢出率隨年齡增長而升高，高年齡段患兒常見的病原體為INF-A、ADV，可能受機體呼吸道正常菌群建立過程的影響。

基于液相芯片技術的核酸檢測效率高、通量大，13種呼吸道病原體核酸檢測能快速有效地滿足呼吸道病原體檢測的需要，具有檢測簡單、敏感度高等優點，可用于輔助診斷兒童呼吸道感染的相關疾病。在臨床診斷時要注意不同年齡組間病原體的差異和多重病原體感染。