胡遠(yuǎn)彬 梁小玉 季楊 易軍 張靚

摘要：研究白粉菌脅迫對(duì)苦荬菜葉片生理指標(biāo)及蛋白組的影響，為揭示苦荬菜響應(yīng)白粉菌脅迫的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。以龍牧苦荬菜（Lactuca indica L. cv. Longmu）為試驗(yàn)材料，測(cè)定其接種白粉菌72 h后葉片生理指標(biāo)的變化，并利用同位素相對(duì)和絕對(duì)定量標(biāo)記技術(shù)聯(lián)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（iTRAQ-LC-MS/MS）結(jié)合生物信息學(xué)方法分析葉片差異表達(dá)蛋白及其富集情況。結(jié)果表明，接種白粉菌后過氧化物酶活性較對(duì)照極顯著增加（P<0.01），丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性均顯著增加（P<0.05），總?cè)~綠素、葉綠素a和葉綠素b含量均下降。共篩選出200個(gè)差異表達(dá)蛋白，其中上調(diào)表達(dá)的蛋白有161個(gè)，下調(diào)表達(dá)的蛋白有39個(gè)。經(jīng)過蛋白注釋和富集分析，篩選出含Bet v 1結(jié)構(gòu)域蛋白、含幾丁質(zhì)結(jié)合1型結(jié)構(gòu)域蛋白、過氧化物酶、細(xì)胞色素P450、4-香豆酸-輔酶A連接酶-7、咖啡酸3-O-甲基轉(zhuǎn)移酶和大根香葉烯A羥化酶7種差異表達(dá)蛋白與苦荬菜響應(yīng)白粉菌脅迫有關(guān)。苦荬菜在白粉菌脅迫下，次生代謝和病程相關(guān)等蛋白顯著上調(diào)表達(dá)以響應(yīng)白粉病侵染，推測(cè)過氧化物酶可能在機(jī)體響應(yīng)白粉菌脅迫的調(diào)控中發(fā)揮了重要作用。

關(guān)鍵詞：苦荬菜;蒼耳單囊殼白粉菌;同位素相對(duì)和絕對(duì)定量標(biāo)記（iTRAQ）;差異表達(dá)蛋白

中圖分類號(hào)： S435.4? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2022）02-0147-07

收稿日期：2021-04-26

基金項(xiàng)目：四川省畜牧科學(xué)研究院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（編號(hào)：SASA2018A04）;國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系四川肉羊創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（編號(hào)：sccxtd-2021-14）;四川省“十四五”牧草育種攻關(guān)項(xiàng)目（編號(hào)：2021YFYZ0013）。

作者簡(jiǎn)介：胡遠(yuǎn)彬（1988—），女，河南信陽人，碩士，助理研究員，主要從事牧草育種與栽培研究。E-mail：595368128@qq.com。

通信作者：梁小玉，博士，研究員，主要從事草種質(zhì)資源評(píng)價(jià)與育種研究。E-mail：liangxiaoyucao@ 163.com。

苦荬菜（Lactuca indica）為菊科（Compositae）萵苣屬（Lactuca）一年生或越年生草本植物，具有適應(yīng)性強(qiáng)、產(chǎn)草量高、營(yíng)養(yǎng)豐富及藥用功能[1-2]等優(yōu)點(diǎn)，是多種畜禽及魚類喜食的優(yōu)質(zhì)青綠多汁飼草[3]，也可作為功能性飼料添加劑[4]。隨著草牧業(yè)的發(fā)展及種草養(yǎng)畜觀念的增強(qiáng)，苦荬菜已在我國(guó)南北多省推廣種植，因連作、密植及氣候條件等因素，白粉病的危害日益突顯，已經(jīng)成為苦荬菜生產(chǎn)中的常見病害，在我國(guó)黑龍江[5]、四川[6]和貴州[7]等苦荬菜種植區(qū)多次報(bào)道，而防治該病害最為有效的措施是種植抗性品種，但尚未見免疫或高抗苦荬菜品種的報(bào)道。因此，研究白粉病病菌與苦荬菜之間的相互作用，篩選苦荬菜響應(yīng)白粉病病菌侵染的防御相關(guān)蛋白，對(duì)深入研究苦荬菜響應(yīng)白粉病脅迫的分子機(jī)制及選育高抗白粉病的苦荬菜品種具有重要意義。目前，關(guān)于苦荬菜白粉病的研究較少，僅在田間發(fā)病規(guī)律、防治及病原菌鑒定等方面有少量報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn)，苦荬菜白粉病是由蒼耳單囊殼白粉菌（Podosphaera xanthii）[7]或菊科高氏白粉菌（Golovinomyces cichoracearum）[8]引起的，主要危害葉片，導(dǎo)致葉片和植株早枯，對(duì)苦荬菜產(chǎn)量及飼用價(jià)值都有很大影響。目前，蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于植物與病原真菌的互作研究中[9]，已鑒定出病程相關(guān)（pathogenesis-related，PR）蛋白家族、次生代謝途徑蛋白及其他防御相關(guān)蛋白等[10]。植物與白粉病病菌互作的研究主要集中在小麥（Triticum aestivum）、黃瓜（Cucumis sativus）和葡萄（Vitis vinifera）上，研究者多采用雙向凝膠電泳（2-DE）分離技術(shù)，但其分離精確度低，獲得的差異蛋白數(shù)量偏少[11]，而同位素相對(duì)和絕對(duì)定量標(biāo)記（iTRAQ）是一種新型定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，彌補(bǔ)了2-DE技術(shù)的不足。國(guó)內(nèi)外未見苦荬菜響應(yīng)白粉病病菌脅迫蛋白組學(xué)研究的報(bào)道，本研究結(jié)合生理指標(biāo)，利用iTRAQ標(biāo)記結(jié)合液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)，研究苦荬菜在白粉菌侵染后蛋白質(zhì)組學(xué)的變化，以期為揭示苦荬菜響應(yīng)白粉菌脅迫的分子機(jī)制及挖掘苦荬菜抗白粉病基因奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試材料龍牧苦荬菜由黑龍江省畜牧研究所提供。白粉菌為蒼耳單囊殼白粉菌（P. xanthii），采自四川省崇州市白頭鎮(zhèn)高筧村牧草試驗(yàn)基地田間自然感病的龍牧苦荬菜葉片，純化后人工擴(kuò)繁。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2018年7月在四川省畜牧科學(xué)研究院開展試驗(yàn)，選取粒大飽滿的龍牧苦荬菜種子，用1% NaClO溶液浸泡10 min消毒后，用無菌水沖洗干凈，放入培養(yǎng)皿中保溫催芽1～2 d，挑選露白一致的種子，種在裝有滅菌營(yíng)養(yǎng)土的花盆（上徑29 cm，下徑19 cm，高17 cm）中，每盆20株，共播種6盆，分為對(duì)照組和處理組。待幼苗長(zhǎng)至2葉1心期時(shí)，接種組（TR）將濃度為5×104個(gè)/mL的白粉病病菌分生孢子懸浮液采用噴霧接種法進(jìn)行接種;對(duì)照組（CK）噴施等量蒸餾水，保濕24 h后，置于晝/夜溫度周期為 25 ℃/20 ℃、相對(duì)濕度為70%～80%、光/暗周期為16 h/8 h的人工氣候箱中培養(yǎng)。接種72 h[12]后分別采集對(duì)照組、接種組的第2張真葉，每組設(shè)3次重復(fù)，用液氮冷凍后于-80 ℃保存，備用。

1.3 生理指標(biāo)的測(cè)定

過氧化物酶（POD）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、總?cè)~綠素含量、葉綠素a和葉綠素b含量均參照郝再彬等的方法[13]進(jìn)行測(cè)定。

1.4 葉片總蛋白質(zhì)的提取

稱取適量的冷凍葉片至預(yù)冷的研缽中，加液氮研磨成粉，具體按照郭偉等的方法[14]進(jìn)行總蛋白質(zhì)的提取，用二奎啉甲酸 （BCA） 法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。

1.5 iTRAQ標(biāo)記和液質(zhì)檢測(cè)

蛋白質(zhì)樣品經(jīng)胰酶酶解成肽段，用Phenomenex StrataX C18除鹽后真空冷凍干燥。參照iTRAQ-4plex試劑盒說明標(biāo)記肽段，混合標(biāo)記后的肽段用Agilent 300Extend C18進(jìn)行分級(jí)（分級(jí)梯度為8%～32%乙腈，pH值為9），合并為9個(gè)組分后進(jìn)行真空冷凍干燥。然后采用EASY-nLC 1200超高效液相色譜儀、Q Exactive HF-X質(zhì)譜儀進(jìn)行液相分離和質(zhì)譜分析。

1.6 質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析

用MaxQuant（v1.5.2.8）軟件進(jìn)行質(zhì)譜數(shù)據(jù)解析。檢索數(shù)據(jù)庫(kù)為Uniprot Lactuca_ sativa_4236_PR_20190118（37 927條序列），蛋白質(zhì)鑒定、肽匹配圖譜鑒定的假陽性率均設(shè)置為1%。設(shè)定蛋白質(zhì)的差異倍數(shù)>1.2或<1/1.2，P<0.05表示差異表達(dá)。

1.7 數(shù)據(jù)處理及生物信息學(xué)分析

用Excel 2010和SPSS 17.0 軟件統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。對(duì)鑒定到的蛋白質(zhì)進(jìn)行COG、GO和KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)注釋，并對(duì)篩選出的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行GO、KEGG和結(jié)構(gòu)域富集分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 生理生化指標(biāo)的測(cè)定

由圖1可知，接種P. xanthii后，苦荬菜葉片中的MDA含量呈顯著上升趨勢(shì)（P<0.05），是對(duì)照組的1.25倍，說明此時(shí)細(xì)胞膜脂過氧化程度增加;POD活性呈極顯著上升趨勢(shì)（P<0.01），是對(duì)照組的1.72倍;SOD活性呈顯著上升趨勢(shì)（P<0.05），較對(duì)照組增加了11.34%。POD、SOD這2種抗氧化酶通過清除活性氧（ROS）維持機(jī)體的氧化還原平衡。此外，接種組總?cè)~綠素、葉綠素a、葉綠素b含量均呈下降趨勢(shì)，較對(duì)照組降低了6.66%～7.06%，表明機(jī)體的光合作用受到了一定影響。

2.2 差異表達(dá)蛋白的篩選

利用iTRAQ-LC-MS/MS技術(shù)在龍牧苦荬菜的處理組、對(duì)照組中共鑒定到6 758個(gè)蛋白質(zhì)，其中6 104個(gè)蛋白質(zhì)具有定量信息。在白粉菌脅迫下共有200個(gè)差異表達(dá)蛋白發(fā)生顯著變化，其中顯著上調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)有161個(gè)，顯著下調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)有39個(gè)，顯著上調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)數(shù)量明顯多于下調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)（圖2）。亞細(xì)胞定位分析發(fā)現(xiàn)，這些差異表達(dá)蛋白主要位于葉綠體、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中（圖3）。

2.3 差異表達(dá)蛋白的COG功能分類

200個(gè)差異表達(dá)蛋白經(jīng)COG數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后，有140個(gè)被注釋并進(jìn)行了功能分類。從圖4可以看出，被注釋的差異表達(dá)蛋白共分為21類，其中次生代謝物的生物合成、運(yùn)輸和分解代謝類蛋白數(shù)量最多（18個(gè)），還有16個(gè)細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸、分泌和囊泡運(yùn)輸類蛋白質(zhì)，14個(gè)翻譯后修飾、蛋白質(zhì)折疊、分子伴侶類蛋白質(zhì)，10個(gè)能量生產(chǎn)和轉(zhuǎn)化類蛋白質(zhì)，10個(gè)碳水化合物的運(yùn)輸和代謝翻譯類蛋白質(zhì)，此外還有細(xì)胞骨架類、防御機(jī)制類等，這些類別的蛋白質(zhì)可能在植物與病原菌的互作中發(fā)揮著不同作用。

2.4 差異表達(dá)蛋白的GO注釋與富集分析

將差異表達(dá)蛋白進(jìn)行GO注釋和功能富集分析，以確定差異表達(dá)蛋白參與的生物學(xué)過程、行使的分子功能及所處的細(xì)胞環(huán)境。由圖5可以看出，GO注釋到差異表達(dá)蛋白有130個(gè)，顯著富集條目有19個(gè)（P<0.05），細(xì)胞組分中有3個(gè)條目顯著富集（P<0.05），其中極顯著富集（P<0.01）的有2個(gè)條目，為細(xì)胞壁和胞間連絲，均富集上調(diào)蛋白;分子功能中有8個(gè)條目顯著富集（P<0.05），主要有細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合、氧化還原酶活性-作用于配對(duì)供體、水解酶活性-作用于酯鍵、過氧化物酶活性和熱激蛋白結(jié)合、單加氧酶活性、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)體活性、磷酸酶活性等，主要富集上調(diào)蛋白，其中前2個(gè)條目極顯著富集（P<0.01）;生物過程有8個(gè)條目顯著富集（P<0.05），主要有次生代謝產(chǎn)物的生物合成過程、創(chuàng)傷反應(yīng)、免疫系統(tǒng)發(fā)育、水分運(yùn)輸、脫磷酸作用、離子跨膜運(yùn)輸、細(xì)胞骨架組織、對(duì)細(xì)胞外刺激的反應(yīng)等，主要富集上調(diào)蛋白，其中前4個(gè)條目為極顯著富集（P<0.01）。

2.5 差異表達(dá)蛋白的KEGG富集分析

通過KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行代謝通路顯著性富集分析，確定差異蛋白可能參與的生化代謝途徑。如圖6所示，接種后差異表達(dá)蛋白顯著富集到4條生化代謝途徑，分別為苯丙烷類生物合成，纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解，ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和酪氨酸代謝，其中前2條代謝途徑為極顯著富集（P<0.01），其包含的差異表達(dá)蛋白數(shù)量分別為6、5個(gè)，這4條生化代謝途徑均富集上調(diào)表達(dá)蛋白。

2.6 差異表達(dá)蛋白的結(jié)構(gòu)域富集分析

蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域是具有相似的序列、結(jié)構(gòu)和功能的蛋白質(zhì)進(jìn)化單元。對(duì)鑒定到的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)域富集分析發(fā)現(xiàn)，差異表達(dá)蛋白被富集到18個(gè)類別中，其中達(dá)到顯著富集水平的有14類（P<0.05），達(dá)到極顯著富集水平的有4類（P<0.01），分別為病程相關(guān)蛋白Bet v 1家族、幾丁質(zhì)酶Ⅰ類、幾丁質(zhì)識(shí)別蛋白和微管蛋白C末端結(jié)構(gòu)域（圖7）。此外，細(xì)胞色素P450、病程相關(guān)蛋白Bet v 1家族和幾丁質(zhì)酶Ⅰ類差異表達(dá)蛋白數(shù)量分別為6、4、2個(gè)，均為富集上調(diào)表達(dá)蛋白。

2.7 目標(biāo)差異蛋白

根據(jù)差異表達(dá)蛋白GO富集、KEGG富集及結(jié)構(gòu)域富集結(jié)果，從參與苦荬菜響應(yīng)白粉菌脅迫的次生代謝產(chǎn)物生物合成過程、病原相關(guān)蛋白Bet v 1家族、過氧化物酶和幾丁質(zhì)酶Ⅰ類4個(gè)途徑或類別中篩選出7種共16個(gè)目標(biāo)差異蛋白。其中參與次生代謝產(chǎn)物生物合成過程有7個(gè)差異表達(dá)蛋白，均為上調(diào)表達(dá);POD包含3個(gè)上調(diào)表達(dá)的差異蛋白;病原相關(guān)蛋白Bet v 1家族包含4個(gè)含Bet v 1結(jié)構(gòu)域蛋白， 除A0A2J6L9I3外，其余3個(gè)差異表達(dá)蛋白均上調(diào)表達(dá);幾丁質(zhì)酶Ⅰ類包含 2個(gè)上調(diào)表達(dá)的含幾丁質(zhì)結(jié)合1型結(jié)構(gòu)域蛋白（表1）。

3 討論與結(jié)論

病原真菌侵入植物體后可引起寄主體內(nèi)發(fā)生復(fù)雜的生理變化。葉綠素與植物的光合作用密切相關(guān)，能客觀反映植物抗病性的強(qiáng)弱。周夢(mèng)韓等研究發(fā)現(xiàn)，黃瓜感染白粉病初期葉片葉綠素含量明顯降低[15]。在本研究中，接種P. xanthii 72 h后苦荬菜葉片中的總?cè)~綠素、葉綠素a和葉綠素b含量均下降。MDA含量主要反映細(xì)胞膜脂過氧化的程度，其含量越高，說明細(xì)胞膜穩(wěn)定性越差[16]。SOD、POD在植物體內(nèi)活性氧清除過程中起重要作用。蘋果感病品種接種白粉菌后，SOD、POD等相關(guān)酶活性增強(qiáng)，MDA含量增加，葉綠素含量下降[17]。在本研究中，苦荬菜接種P. xanthii后，POD活性、SOD活性及MDA含量均極顯著或顯著上升，這與前人研究結(jié)果[17]一致，且POD活性的變化規(guī)律與其相關(guān)蛋白A0A2J6JJ85、A0A2J6JJ68、A0A2J6JJ94的表達(dá)情況一致，在接種后均呈上調(diào)表達(dá)。

本研究利用iTRAQ-LC-MS/MS技術(shù)對(duì)苦荬菜接種P. xanthii 72 h后差異表達(dá)蛋白進(jìn)行分析，共發(fā)現(xiàn)200個(gè)差異表達(dá)蛋白發(fā)生顯著變化，其中上調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)有161個(gè)，下調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)有39個(gè)，上調(diào)表達(dá)蛋白的數(shù)量明顯多于下調(diào)表達(dá)蛋白，主要有PR蛋白和次生代謝相關(guān)蛋白等，其中PR蛋白在宿主響應(yīng)病原菌侵染的防御反應(yīng)機(jī)制中起關(guān)鍵作用[18]。在本研究中，發(fā)現(xiàn)4個(gè)含Bet v 1結(jié)構(gòu)域蛋白、2個(gè)含幾丁質(zhì)結(jié)合1型結(jié)構(gòu)域蛋白及3個(gè)POD蛋白，除1個(gè)含Bet v 1結(jié)構(gòu)域蛋白（A0A2J6L9I3）下調(diào)外，其余均上調(diào)表達(dá)。病程相關(guān)蛋白Bet v 1家族含Bet v 1結(jié)構(gòu)域蛋白，屬于PR10[19]，葡萄接種白粉菌后，鑒定出PR10及與PR10具有相同保守結(jié)構(gòu)域Bet v 1-like蛋白[20-21]，推測(cè)PR10與葡萄的白粉病抗性有關(guān)，可能通過降解病原體RNA和誘導(dǎo)宿主細(xì)胞程序性死亡發(fā)揮雙重作用[22]。多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)，幾丁質(zhì)酶通過水解真菌菌絲細(xì)胞壁中的幾丁質(zhì)聚合物影響真菌的生長(zhǎng)[23]，同時(shí)產(chǎn)生的幾丁質(zhì)產(chǎn)物，可作為信號(hào)分子誘發(fā)進(jìn)一步的防御反應(yīng)。葡萄敏感品種受葡萄鉤絲殼（Uncinula necator）感染后，葉片中幾丁質(zhì)酶等病程相關(guān)蛋白基因被強(qiáng)烈誘導(dǎo)，其中幾丁質(zhì)酶Ⅰ類在嚴(yán)重感染的葉片中被檢測(cè)到[24]。POD屬于 PR-9，可由真菌誘導(dǎo)產(chǎn)生，通過建立結(jié)構(gòu)屏障或產(chǎn)生高毒性環(huán)境來限制感染擴(kuò)散，同時(shí)作為一種植物保護(hù)酶，在后期負(fù)責(zé)清除H2O2以減輕植物所受損害[25]。李杰對(duì)高感病小麥品種西農(nóng)979接種白粉菌72 h后的蛋白組表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，POD大量表達(dá)[26]。因此可見，含Bet v 1結(jié)構(gòu)域蛋白、含幾丁質(zhì)結(jié)合1型結(jié)構(gòu)域蛋白和POD這3類PR蛋白在白粉菌侵染后上調(diào)表達(dá)可能與其響應(yīng)侵染有關(guān)。

另外，次生代謝物木質(zhì)素、酚類、萜類等在植物抵御病原真菌中發(fā)揮著重要作用[27-28]。本研究在龍牧苦荬菜響應(yīng)白粉菌脅迫中共獲得5種與次生代謝產(chǎn)物生物合成相關(guān)的差異蛋白，包括細(xì)胞色素P450（CYP450）、咖啡酸3-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）、4-香豆酸-輔酶A連接酶-7（4-CLL7）、POD和大根香葉烯A羥化酶，均為上調(diào)表達(dá)蛋白。CYP450是一類多功能氧化酶，參與木質(zhì)素、萜類等次生代謝產(chǎn)物的合成[29-30]。薛飛利用基因芯片分析小麥N9134在白粉菌生理小種E09脅迫下的表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)CYP450、POD等差異表達(dá)基因參與抗白粉病代謝調(diào)控[31];Li等利用轉(zhuǎn)錄組技術(shù)鑒定到CYP450等6個(gè)候選基因在大麥高抗品種鳳7中持續(xù)上調(diào)表達(dá)，增強(qiáng)了植株對(duì)白粉病的抗病性[32]。有研究發(fā)現(xiàn)，4-香豆酸-輔酶A連接酶（4CL）、COMT和POD均與木質(zhì)素合成有關(guān)[33-35];Wang等研究發(fā)現(xiàn)，小麥COMT基因（TaCOMT-3D）可能通過促進(jìn)木質(zhì)素的積累來提高對(duì)紋枯病的抗性[36]。在本研究中，CYP450、COMT、4-CLL7和POD這4類差異蛋白的表達(dá)水平顯著升高，說明苦荬菜與白粉菌互作過程中苯丙烷生物合成活躍，木質(zhì)素等代謝物質(zhì)大量合成，可通過植物細(xì)胞壁木質(zhì)化以抵御病原菌的侵染。這可能是植株被白粉菌侵染后，其粗纖維含量升高從而影響營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的原因。此外，大根香葉烯A羥化酶參與倍半萜內(nèi)酯的生物合成[37]，該蛋白上調(diào)表達(dá)可能與響應(yīng)白粉菌脅迫有關(guān)。

白粉病影響苦荬菜的正常生長(zhǎng)發(fā)育，從而導(dǎo)致降質(zhì)減產(chǎn)。接種P. xanthii后，苦荬菜葉片MDA含量增加使膜脂過氧化程度升高，葉綠素含量降低導(dǎo)致光合作用受影響，機(jī)體通過增加POD、SOD防御酶活性來維持動(dòng)態(tài)平衡。同時(shí)，Bet v 1結(jié)構(gòu)域蛋白、幾丁質(zhì)結(jié)合1型結(jié)構(gòu)域蛋白等PR蛋白和CYP450、COMT、4-CLL7等次生代謝相關(guān)蛋白出現(xiàn)顯著差異表達(dá)，它們主要通過上調(diào)表達(dá)以響應(yīng)白粉菌的脅迫。由此推測(cè)，POD可能在機(jī)體響應(yīng)白粉菌脅迫的調(diào)控中發(fā)揮重要作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]Ha J M，Lee T，Kim M Y，et al. Comprehensive transcriptome analysis of Lactuca indica，a traditional medicinal wild plant[J]. Molecular Breeding，2017，37（9）：112.

[2]Yi T G，Park Y，Park J E，et al. Enhancement of phenolic compounds and antioxidative activities by the combination of culture medium and methyl jasmonate elicitation in hairy root cultures of Lactuca indica L.[J]. Natural Product Communications，2019，14（7）：1-9.

[3]斯日古楞，范鐵力，賈衛(wèi)星，等. 不同品種苦荬菜比較研究[J]. 內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007，22（2）：172-174.

[4]Harikrishnan R，Kim J S，Kim M C，et al. Lactuca indica extract as feed additive enhances immunological parameters and disease resistance in Epinephelus bruneus to Streptococcus iniae[J]. Aquaculture，2011，318（1）：43-47.

[5]楊偉光，李 紅，毛小濤，等. 早熟苦荬菜與晚熟苦荬菜性狀比較[J]. 草業(yè)科學(xué)，2011，28（12）：2221-2224.

[6]梁小玉，胡遠(yuǎn)彬，季 楊，等. 川畜1號(hào)苦荬菜新品種比較試驗(yàn)[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī)，2019（19）：116-121.

[7]Li D L，Yu H P，Dai Y F，et al. Powdery mildew of Pterocypsela indica caused by Podosphaera xanthii in China[J]. Plant Disease，2019，103（8）：2131.

[8]王麗麗，李克梅，趙震宇，等. 新疆阿勒泰地區(qū)草地植物的白粉菌和銹菌（Ⅰ）[J]. 菌物研究，2016，14（2）：81-85.

[9]丁麗娜，楊瑞英，楊國(guó)興. 植物與病原菌互作的蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展[J]. 微生物學(xué)通報(bào)，2016，43（2）：394-402.

[10]張彩霞，李 壯，陳 瑩，等. 植物與病原菌互作的蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展[J]. 西北植物學(xué)報(bào)，2010，30（3）：626-632.

[11]李春娟，閆彩霞，王 娟，等. 基于iTRAQ技術(shù)的黃曲霉脅迫花生蛋白質(zhì)組分析[J]. 花生學(xué)報(bào)，2020，49（1）：25-30.

[12]鐘 俐. 白粉病脅迫下甜瓜葉片蛋白組學(xué)分析[J]. 新疆大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2020，37（3）：282-288.

[13]郝再彬，蒼 晶，徐 仲，等. 植物生理實(shí)驗(yàn)[M]. 哈爾濱：哈爾濱工業(yè)大學(xué)出版社，2004.

[14]郭 偉，湛孝東，黃月娥，等. 楊絮總蛋白肽段中的T細(xì)胞和B細(xì)胞表位[J]. 現(xiàn)代免疫學(xué)，2020，40（3）：192-196.

[15]周夢(mèng)韓，汪 靜，孟新剛，等. 感染白粉病菌初期黃瓜葉片生理指標(biāo)的變化[J]. 北方園藝，2013（3）：133-135.

[16]韓志順，鄭敏娜，梁秀芝，等. 干旱脅迫對(duì)不同紫花苜蓿品種形態(tài)特征和生理特性的影響[J]. 中國(guó)草地學(xué)報(bào)，2020，42（3）：37-43.

[17]田小敏. 基于轉(zhuǎn)錄組水平的蘋果抗白粉病基因篩選與感病葉片生理指標(biāo)分析[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2019：27-28.

[18]Zhang J R，Wang F，Liang F，et al. Functional analysis of a pathogenesis-related thaumatin-like protein gene TaLr35PR5 from wheat induced by leaf rust fungus[J]. BMC Plant Biology，2018，18（1）：76.

[19]Radauer C，Lackner P，Breiteneder H. The Bet v 1 fold：an ancient，versatile scaffold for binding of large，hydrophobic ligands[J]. BMC Evolutionary Biology，2008，8（1）：286.

[20]張軍科，羅世杏，張玉潔，等. 葡萄抗、感白粉病植株葉片蛋白質(zhì)組差異比較[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2012，40（10）：149-153.

[21]張 娟. 白粉菌接種誘導(dǎo)的葡萄葉片蛋白質(zhì)組差異分析[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2015：35-37.

[22]Xu T F，Zhao X C，Jiao Y T，et al. A pathogenesis related protein，VpPR-10.1，from Vitis pseudoreticulata：an insight of its mode of antifungal activity[J]. PLoS One，2014，9（4）：e95102.

[23]Shibuya N，Minami E. Oligosaccharide signalling for defence responses in plant[J]. Physiological and Molecular Plant Pathology，2001，59（5）：223-233.

[24]Jacobs A，Dry I，Robinson S P. Induction of different pathogenesis-related cDNAs in grapevine infected with powdery mildew and treated with ethephon[J]. Plant Pathology，1999，48（3）：325-336.

[25]Almagro L，Ros L V G，Belchi-Navarro S，et al. Class Ⅲ peroxidases in plant defence reactions[J]. Journal of Experimental Botany，2009，60（2）：377-390.

[26]李 杰. 小麥白粉病引致的葉片與籽粒差異表達(dá)蛋白分析[D]. 鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2017：34-68.

[27]Bhuiyan N H，Selvaraj G，Wei Y D，et al. Gene expression profiling and silencing reveal that monolignol biosynthesis plays a critical role in penetration defence in wheat against powdery mildew invasion[J]. Journal of Experimental Botany，2009，60（2）：509-521.

[28]陳 瑤，謝琴鼎，唐亞琴，等. 植物萜類合成代謝途徑及限速酶的研究進(jìn)展[J]. 分子植物育種，2018，16（7）：2371-2379.

[29]趙志新，鹿鵬鵬，王 通. 植物三萜皂苷代謝中細(xì)胞色素P450的生物信息學(xué)分析[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2019，32（10）：2304-2312.

[30]Gou M Y，Ran X Z，Martin D W，et al. The scaffold proteins of lignin biosynthetic cytochrome P450 enzymes[J]. Nature Plants，2018，4（5）：299-310.

[31]薛 飛. 小麥抗白粉病基因的分子作圖及其與白粉菌互作的表達(dá)譜分析[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2012：78.

[32]Li Y B，Guo G M，Zhou L H，et al. Transcriptome analysis identifies candidate genes and functional pathways controlling the response of two contrasting barley varieties to powdery mildew infection[J]. International Journal of Molecular Sciences，2020，21（1）：151.

[33]于娟娟，李 玲，金 青，等. 碭山酥梨石細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素代謝關(guān)鍵酶POD類型的分析[J]. 園藝學(xué)報(bào)，2011，38（6）：1037-1044.

[34]Chen X H，Wang H T，Li X Y，et al. Molecular cloning and functional analysis of 4-Coumarate：CoA ligase 4（4CL-like 1） from Fraxinus mandshurica and its role in abiotic stress tolerance and cell wall synthesis[J]. BMC Plant Biology，2019，19（1）：231.

[35]Sattler S E，F(xiàn)unnell-Harris D L. Modifying lignin to improve bioenergy feedstocks：strengthening the barrier against pathogens？[J]. Frontiers in Plant Science，2013，4：70.

[36]Wang M X，Zhu X L，Wang K，et al. A wheat caffeic acid 3-O-methyl transferase TaCOMT-3D positively contributes to both resistance to sharp eyespot disease and stem mechanical strength[J]. Scientific Reports，2018，8（1）：6543.

[37]de Kraker J，F(xiàn)ranssen M C，Dalm M C，et al. Biosynthesis of germacrene A carboxylic acid in chicory roots. Demonstration of a cytochrome P450（+）-germacrene a hydroxylase and NADP+-dependent sesquiterpenoid dehydrogenase（s） involved in sesquiterpene lactone biosynthesis[J]. Plant Physiology，2001，125（4）：1930-1940.