GLP 體系下實驗動物管理中生物安全風險與措施探討

胡楚元，蔡 拓，朱嘯川

（湖南省職業病防治院，湖南長沙 410007）

2019 年11 月，中國農業科學院蘭州獸醫研究所出現大面積感染布魯氏菌疾病。蘭州“布病”事件對實驗動物行業生物安全敲響警鐘，隨著新冠疫情在全球范圍的暴發給人類生命健康帶來嚴重的威脅，完善實驗動物生物安全管理迫在眉捷。良好實驗室規范（Good Laboratory Practice，GLP)本質是一種質量管理體系，實施GLP 旨在規范試驗安全的全過程，包括設施建設、管理、實驗設計、操作、記錄、報告等，確保試驗結果真實、客觀、可靠。該文從GLP 質量管理體系對設施建設、設施管理以及實驗動物管理的全方位要求出發，結合筆者17 年實驗動物一線工作經驗對實驗動物管理過程存在的一系列生物安全問題進行探討，在實踐中建立以預防為主、突發事件應急預案為輔的思路，為生物安全防范制定具體措施提供對策。

1 設施標準化管理

1.1 生物安全-設施建設與取證

建成后的SPF 級動物實驗室的各項條件符合《中華人民共和國實驗動物管理條例》和實驗動物及設施國標的要求[1]，經檢測、驗收取得《實驗動物使用許可證》。屏障設施的設計除符合國標要求外，應重點在“人污分離、交叉感染”方面做好設計工作。應重視設施管理人員、獸醫、病理人員、生物安全員的有效建議。

設施申請新證或換證，設施環境指標檢測應交由第三方公司完成，檢測指標應覆蓋設施內環境2/3 區域。自檢報告不宜做為上交材料。

1.2 生物安全-通風與壓差

通風與壓差對于保持環境指標穩定性、對于生物安全風險防范非常重要。各層樓最好具備獨立的兩套送風系統，新風經初效－中效－高效過濾器進入設施內環境，房間排風通過初效和中效及活性炭后排出設施，初效過濾器每年更換6 次，中效過濾器需每年更換2 次，高效過濾器每年更換一次，設施內環境壓差維持相鄰區域大于10Pa。

通風、壓差在實踐管理中要注意幾個細節問題，①房門隨開隨關，讓相鄰區域壓差保持正壓，保持風向正向流動；②注意出口緩沖間的衛生消毒以及兩扇門不能同時打開，防止外環境風逆流；③注意電腦系統內24h 的壓差數據必須符合國標要求且保持平穩運行；④分析電腦系統中數據異常波動因素，迅速解決問題并記錄在案。

1.3 生物安全-人員管理

嚴格實行人流、物流、動物流的有序控制，人員污染是屏障動物設施失敗的重要原因，應經常對相關人員進行職業培訓，嚴格控制人員流動、保持無菌觀念、嚴格遵守操作規程中的規定，規范化、程序化、標準化地進行操作[2]。

人員進出一律實行門禁卡使用制度，一人一卡不能外借，外來人員參觀必須經設施負責人批準且由工作人員陪同參觀。人員進出須嚴格執行SOP 操作，定向流動、穿戴整齊，實際的管理中最需要注意的是培訓考核以及懲罰升級制度，所有進出人員必須樹立設施內環境質量第一的觀念，杜絕一切污染設施行為，提高人員的生物安全意識，保持內環境指標良性循環。

物品進出執行嚴格的消毒制度，標識制度，設崗位負責人全責制，崗位負責人除自己嚴格執行程序規定外同時也扮演監督角色。

2 實驗動物申購

2.1 供應商評估

建立實驗動物及相關產品的供應商評估制度非常必要，從供應商的生產規模、產品質量、包裝運輸、質檢結果、服務態度、行業聲譽等維度評估，選擇優秀的供應商，直接從實驗動物生產源頭把控質量，有效防范生物安全風險。供應商評估應每年進行一次，以組員團隊的方式實地調查評估，實驗動物使用單位與生產單位形成監督與被監督關系，有效促進實驗動物生產單位以質量優先生產經營。

2.2 動物申購倫理審查

所有動物試驗項目均須倫理申請審查，倫理申請審查內容須客觀真實，包括實驗項目名稱、項目組人員、擬開展試驗時間、實驗的目的與內容、擬使用動物相關信息、試驗過程的主要技術、實驗動物處理方式等等，實驗動物使用必須符合“3R”原則，實驗動物處理無害化。

實際操作執行中要注意關鍵環節把控，不能走過程流于形式，①不管是正式試驗還是預試驗動物，所有的實驗動物申購必須經單位實驗動物福利與倫理委員會審查，；②只申購合格供應商供應的來源清楚的實驗動物，其他形式的購買、寄養一律禁止，保持渠道來源穩定。

2.3 動物的包裝運輸

實驗動物包裝必須規范符合國標要求，運輸工具車況良好、通風空調正常，不能隨意使用外來租借車輛運輸，杜絕生物安全風險。

3 實驗動物飼養管理

3.1 生物安全-傳染病

嚴格執行“預防為主、防重于治”的方針，特別是小動物，發生傳染病或疑似傳染病時，應第一時間向獸醫、項目負責人報告，采取消毒、隔離、停止設施運行等一切必要措施。

3.2 生物安全-飲用水

根據GB14925-2010 對實驗動物飲水的要求，研究單位實驗動物飲用水來源于長沙市城市生活飲用水，經JZR－200 制水設備進行無菌處理，利用超濾+微電解機殺菌原理。微電解設備由水處理設備公司提供并定期維護，超濾膜每年更換一次，水箱空氣濾芯每年更換一次，回水濾芯每四個月更換一次，水箱和管道每月清洗一次，每一季度做一次水質檢測。

無菌供水系統是一套閉水循環系統，采用食品級材料水管，能做到24h 循環持續殺菌不留死角，接水端也進行外源逆污染控制，經JZR－200 制水設備產生的微電解水可以做為SPF 級實驗動物的無菌飲用水[3]。

3.3 生物安全-飼料

從生物安全的角度看，主要做好飼料的滅菌工作，選擇優秀的供應商，飼料真空包裝，Co6025K 輻照劑量，飼料進出設施內環境做好外包裝消毒。

飼料傳遞是非常關鍵的一環，傳遞消毒必須到位，外包裝必須進行擦拭消毒或充分的噴霧消毒，紫外燈照射每次不低于15min。

3.4 生物安全-墊料

墊料供應商的選擇非常重要，確保墊料的供應能力與供應質量，墊料一般優先玉米芯或刨木花墊料，墊料使用前必須經高溫高壓滅菌消毒，滅菌效果檢測必須符合標準，對于滅菌后進入屏障內環境的墊料還必須跟蹤，2 周內未用完則必須重復滅菌消毒。

4 實驗動物尸體及廢棄物

4.1 動物尸體及廢棄物的危害性

傳播疾病、危害食品安全、污染環境是動物尸體及其廢棄物的三大危害[4]。實驗動物尸體及廢棄物的無害化處理非常必要，也是生物安全工作重要組成部分，對實驗動物尸體及廢棄物處理措施如下步聚：①各層設施的衛生負責人履行實驗動物尸體及廢棄物收集工作，收集工作要做到及時、包裝規范、記錄到位；②實驗動物尸體用黑色垃圾專用袋密封保存，醫廢垃圾用黃色垃圾袋密封保存，針頭用銳器盒保存，動物尸體及相關產品集中存放于冰箱；③根據實驗動物尸體及廢棄物存放情況定期統一交由第三方廢棄物處理公司無害化處理。

4.2 實驗動物全程跟蹤

跟蹤所有動物試驗項目，從實驗計劃書開始到試驗結束，建立完整的實驗動物管理鏈條，倫理申請審查－購買動物－動物接收－檢疫－檢疫期觀察－檢疫報告－與試驗人員記錄交接－試驗過程及記錄－動物安樂死處理－冰箱存放－與第三方無害化處理公司交接。除此之外，贈送動物等其他情況都要納入生物安全的防范之中，嚴禁任何實驗動物違規流入市場。

實踐管理中項目負責人應對動物試驗的人員參與、培訓、試驗進程、試驗質量、動物去向進行有效的跟蹤，項目負責人應第一時間知曉任何偏離試驗計劃的情況并做出有效處理措施。

4.3 記錄管理

記錄是工作完整性真實性重要的證據，記錄對實驗動物工作溯源有重要意義。

實驗動物管理的各項工作均要制定完善的工作記錄，既要考慮規范性也要考慮執行性，記錄表格的設計宜由主要使用人員制定為好，由質量管理人員復核，經機構負責人審批。記錄表格使用前必須先進行人員培訓，做到程序合規。記錄表格的修訂也要遵循相關SOP 修訂程序。

實踐工作中，要做到記錄的及時性與真實性，記錄必須規范，如有誤寫、漏寫應及時糾正，并注明修改原因、簽名、日期；記錄的空白處應劃斜杠完善；實驗動物尸體及廢棄物的交接記錄必須雙方簽名，落實責任人；記錄的存檔必須及時、規范。

4.4 個人防護

定期培訓從業人員生物安全知識，提升生物安全意識，遵守設施運行管理制度，在設施內環境必須穿戴隔離工作服，連體衣比較規范適合，戴無菌口罩、帽子、手套，處理特殊廢棄物時還要穿戴護目鏡等保護措施。在設施外環境也必須穿工作服、戴口罩、手套等防護用品，勤洗手消毒。

5 生物安全應急機制

實驗單位應強化實驗動物突發事件應急管理，完善管理機制，提升應急能力，有效防范和處置突發實驗室安全事件[5]。

實驗單位為保障機構實驗動物工作有效開展，設立有實驗動物管理委員會，實驗動物管理辦公室，實驗動物倫理道德小組以及實驗動物生物安全應急小組，機構健全，責任明確，并定期培訓、考核、演練，制定應急預案，保持應急工作有序穩健。

實踐工作中應著重提升從業人員生物安全防范意識，工作務實避虛，把生物安全、人民健康、人與自然和諧共生放在第一位。

6 小結

《中華人民共和國生物安全法》是實驗動物生物安全防范工作有力的后盾，隨著該法自2021 年4 月15 日起施行，在此背景下，實驗動物管理部門投入力量組織宣法培訓工作，在實踐工作中建立相應的SOP制度，從設施運行管理到實驗動物的飼養管理，從動物試驗到實驗動物尸體及其廢棄物處理，從人員培訓到SOP 制度執行進行了全方位的監督落實，特別是關鍵環節落實責任人，確保實驗動物生物安全各項工作穩健到位。