分析水質對CA及生化免疫檢測的影響

魏 晟

（福建中醫藥大學附屬第二人民醫院，福建 福州 350003）

水在檢驗分析過程中扮演著關鍵但又容易被忽視的角色，在臨床生化分析等檢測過程中，有時作為反應的媒質、載體，有時作為溶劑或稀釋液。水質的好壞直接影響臨床檢驗分析的結果，水質純度影響因素貫穿整個檢驗分析過程。目前，各大醫院的檢驗實驗室大多采用獨立的純水供水系統，即根據反滲原理對民用自來水進行二次處理。本研究結合日常工作中遇到的案例，討論分析水質分析故障。

1 Ca校準失敗案例分析

1.1 故障描述

福建中醫藥大學附屬第二人民醫院新裝機cobas c 311儀器，替換之前的生化儀器。水機為GN-RO-60反滲透去離子制水機，故障出現半月前換了新濾芯。在裝機培訓過程中執行項目校準時，Ca校準出現“Sens.E”報警。重復校準，問題依舊，其他項目校準通過，如圖1所示。

圖1 失敗的Ca校準結果

1.2 問題分析和處理

查看校準結果，顯示S1、S2吸光度差異過小，導致“Sens.E”報警，校準失敗。與正常校準結果相比，S1和S2主副波長吸光度差值均明顯偏高，但是主波長相差不大，S1為試劑+水，S2為c.f.a.s校準品（濃度為2.78 mmol/L）[1]。

首先，如果是校準品有問題，其他項目也會校準失敗，因此可以初步排除。其次，考慮試劑本身是否有失效或污染的可能，但由于使用的是新開封試劑，試劑本身有問題的可能性不大[2]。最后懷疑科室系統水存在問題，于是對水質問題進行排查跟進。

1.3 尋根溯源

首先，檢查水機制水情況。由于水機顯示屏故障，無法讀取系統水的電導率。其次，結合現場情況分析一切可能出現的原因，如加樣系統、反應系統、試劑、操作、項目參數、校準品、系統水等。最后，分析校準結果。失敗校準結果的吸光度S1和S2在﹣10 000以下，與正常校準結果相差很大，并且表現出兩者差異過小的問題，說明反應體系存在干擾物質，導致S1和S2間吸光度變化過小，靈敏度下降。Ca檢測試劑的反應原理：Ca2+與鈣螯合劑（NM-BAPTA Tetrasodium Salt）在堿性條件下反應生成有色物質，在340 nm處有吸收峰，副波長376 nm，再加入乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA）競爭結合Ca2+，使340 nm處的吸收減弱，檢測340 nm波長的吸光度變化，達到檢測Ca2+濃度的目的[3]。

如圖2所示，羅氏的Ca項目為濃縮試劑，加入20 μL R1試劑后會打入160 μL系統水進行體積稀釋，綜合項目特性和校準結果讀點分析，繼續鎖定外源性干擾物質對試劑造成了污染，導致試劑反應性下降。此時，最大的懷疑對象為系統水。

1.4 分析處理

驗證系統水異常的猜測成為解決問題的關鍵，采集系統水樣本，用離子檢測儀器檢測，同時使用娃哈哈純凈水作為對照樣本進行檢測，結果如圖3所示。

圖3 水質檢測對比結果

結果顯示，系統水的Ca2+濃度為0.28 mmol/L，幾乎是娃哈哈的4倍。如果進一步證實該體系中存在高濃度的Ca2+，可以解釋校準結果產生“Sens.E”報警的原因。為了驗證這個猜想，根據項目加樣量設計了系統水或娃哈哈純凈水分別與試劑發生反應的實驗，如圖4所示。

圖4 Ca模擬儀器檢測試劑混合實驗

系統水與娃哈哈純凈水分別混合Ca試劑實驗結果顯示出明顯的差異，由此可推測系統水Ca2+濃度超標，導致試劑在稀釋步驟被污染，造成校準失敗。需要注意的是，已驗證過娃哈哈純凈水符合實驗室生化用水質量要求。實驗數據證明，羅氏Ca檢測方法具有試劑穩定性好、不受mg2+干擾、不含有毒物質等特點，效果優于其他方法。濃縮試劑增加了試劑的測試數，避免頻繁更換，便于操作。Ca檢測的系統水占總反應體系的78.81%，所以對水質的要求比較高[4]。

最后進行水機檢查。水機入水除沙管長時間未清潔導致泥沙過大，影響過濾效果，更換耗材并充分放出陳水后，再次執行Ca校準，結果通過，并對制水機顯示器進行了維修。

2 部分生化項目失控

2.1 故障描述

據反映，質控時有3個項目失控，執行兩點校準均失敗，分別是甘油三酯（Triglyceride，TG）、總膽固醇（Total Cholesterol，CHOL）、尿酸（Uric Acid，UA）更換校準品，重新校準依然失敗。其他項目質控正常，未進行校準。校準失敗時提示“SENS.E”和“＞ABS”，懷疑試劑出現問題，鑒于前一天標本檢測一切正常，建議檢查試劑并嘗試使用新試劑再次校準，結果并無改善。現場查看UA2校準結果，發現“＞ABS”報警。水空白和Cfas的吸光度均超過5萬。查看校準記錄發現，TG和CHOL也存在同樣的問題。

分析反應過程，第一點水空白和第二點Cfas反應中均受到了干擾。檢查這3個項目的試劑，分別與冰箱里的試劑做顏色比較，沒有發現明顯異常。考慮到試劑出現問題的可能性不大，初步懷疑反應過程中有干擾物質進入比色杯，進而產生影響。但反應杯里只有校準品和試劑，查看試劑參數（見表1～3），發現這3項均是濃縮試劑，通過系統水稀釋后進行反應檢測。

表1 cobas c 701/702測試定義

表2 cobas c 701/702測試定義

續表2

表3 cobas c 701/702分析儀—測試定義—血清、血漿

2.2 分析過程

尋找從試劑艙換下來的TG試劑做模擬實驗，當樣品杯子中為桶裝純凈水與TG試劑的混合液時，對比杯子中為實驗室系統水與TG試劑的混合液。等待10 s左右，對比杯子中的混合液變為明顯的粉紅色。

懷疑實驗室系統水被污染，檢測儀器終端和實驗室蓄水桶電導率為38.0 μS/cm。前往水機房檢測發現，實驗室使用的去離子水由腎病科透析室提供，在檢驗科加裝一個濾芯加強凈化后使用[4]。檢測透析室水質電導率為0.2 μS/cm，懷疑是檢驗科自加的濾芯有問題。實驗室水質檢測系統的水質只能代表過濾前的水質，對于過濾后的實驗室用水水質情況并不了解，建議科室將水質監測裝置安裝在濾芯和蓄水桶之間，這樣才能真正反映實驗室用水的水質情況。

找到問題出現的原因后開始處理，短接濾芯，清洗蓄水桶和儀器水桶，做機械檢查，更換儀器管路內陳舊水，清洗反應杯，重新校準并監測質控，一切正常。

2.3 拓展討論

在分析問題的過程中又產生新的疑問點，因為C701試劑大部分是濃縮試劑，為什么僅這3個項目出現了問題？3個項目的反應原理如下。

（1）CHOL反應原理：

（2）TRIGL反應原理：

（3）UA2反應原理：

從反應原理不難看出，3個項目均為Trinder反應，檢測特性是通過生成中間產物H2O2，與試劑中的4-氨基比林分別與不同的色素原物質（供氫體）在過氧化物酶的作用下生成醌亞胺類顯色物質。初步判斷水中的干擾物質類似于H2O2物質[5]。但又有疑問產生：本實驗室使用的HDL-C和LDL-C也是Trinder反應，為什么沒有受到影響？通過查閱相關說明書后得知，因為HDL-C和LDL-C不是濃縮試劑，不需要系統水稀釋使用。因此，建議科室對濾芯內物質做微生物培養，懷疑是乳酸菌類微生物產生了H2O2類物質。